植物生理学实验

实验1叶绿素a、b含量的测定(乙醇)(分光光度法)、目的学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶(25ml)、漏斗、滤纸、乙醇(95%)三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据LambertBeer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：TOC\o"1-5"\h\zD=83.31Ca+18.60C .(1)665 bD=24.54Ca+44.24C .(2)649 b(1)(2)式中的D、D为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。665 649为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。解方程式(1)(2)，则得：TOC\o"1-5"\h\zC=13.7D—5.76D (3)A 665 649C=25.8D—7.6D………(4)B 649 665G=C+C=6.10D+20.04D (5)AB 665 649此时，G为总叶绿素浓度，C、C为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面(3)(4)(5)式,AB即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。四、方法步骤称取0.05克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇1ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到10ml。取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中,作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。计算结果：叶绿素a叶绿素a含量(mg/g.FW)=c”1000*015叶绿素b含量mg/g.FW)叶绿素b含量mg/g.FW)CX10XB100010.05叶绿素总量mg/g.FW)=G叶绿素总量mg/g.FW)=GX101X10000.05五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。六、思考题1、 分光光度法与一般比色法有何异同？2、 叶绿素a、b在红光和蓝光区都有一最大吸收峰值，能否用蓝光区的最大吸收波长进行叶绿素a、b的定量分析，为什么？实验2用CO2排出法测定呼吸强度一、原理植物进行呼吸作用，可通过单位时间内所吸收的O2或放出的CO2来测定。本实验是把植物材料置于密闭系统中，用抑制浓度和数量的Ba(0H)2作为植物呼出的CO2吸收基质，然后再用草酸滴定Ba(0H)2的剩余量，其反应如下：同时作一空白对照，二者的差数，即为呼吸作用放出的co2量。二、仪器及试剂(1)大红花 (2)广口瓶 (3)橡胶瓶塞(带孔、带钩) (4)线 (5)小铁钩 (6)0.05mol/L氢氧化钡溶液 (7)0.05mol/L草酸溶液 (8)酚酞指示剂三、 实验步骤空白实验：准确地称取25毫升0.05mol/LBa(OH)2溶液于广口瓶中，随即塞紧瓶塞，充分摇动几分钟，使瓶内CO2被Ba(OH)2吸收，接着拔去瓶塞上的小橡皮塞，加入1—2滴酚酞指示剂，然后将滴定管插入小孔中，用0.05mol/L(COOH)2滴定致红色刚退为止，记下草酸的消耗量。呼吸强度的测定：先将瓶盖上小孔用纸帖好，称取大红花1朵，用线扎住，挂于瓶塞钩上，长度适中，而后，装入25毫升0.05mol/LBa(OH)2溶液到广口瓶中，放入大红花，随即塞紧瓶塞，并记录时间，同时摇动瓶子，待40—50分钟后，取出植物材料再盖紧瓶塞，与空白试验同样，分别加入指示剂并用草酸滴定，记下草酸的消耗量。四、 计算呼吸强度(mg/100g为鲜重•小时)二(A—B)xMBa(OH)2x44x丄x丄x100WT注：A为对照草酸的消耗量ml、B为呼吸瓶草酸的消耗量ml、44为CO2时的摩尔数W为呼吸的材料重量(g)、T为净呼吸的时间(小时)实验3不良环境对植物的伤害一、原理植物在遭遇到不良环境(如高温、低温等)时，原生质的结构常受到影响，原生质膜的半透性丧失，对物质的透性发生变化，盐类或有机物从细胞中渗出，进入周围环境中。通过电导度的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗，表明植物受害的程度。二、 仪器及试剂(1)电导仪 (2)电冰箱 (4)水浴锅 (5)烧杯 (6)量筒(7)移液管 (8)试管 (9)镊子 (10)2mol/L盐酸溶液(11)蔥酮试剂：称取1克经过纯化的蔥酮溶解于1000ml稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760ml浓硫酸(比重1.84)稀释成1000ml而成。三、 实验步骤1、摘取一致性较好的榕树或桉树植物叶片6片，分别以两片为一组，进行如下处理：1)一组置于0—2°C冰箱中6小时2)二组置于室温下6小时2、分别对二组叶片用打孔器进行打孔，取20片圆孔，分别置于两个三角瓶中，加入蒸馏水20毫升，轻摇30分钟，用电导仪测定器电导率。3、从二个三角瓶中分别吸取0.5ml渗出液置于二个试管中，每个试管内加入2毫升蒽酮试剂，通过目测比较各试管中颜色深浅，判断环境对植物的伤害程度。4、另对二组叶片进行打孔，取5片圆孔片分别置于二个试管中，每个试管中加入2ml盐酸，静置10分钟，比较圆孔周围褐色范围的大小，分析二组处理对叶片的伤害程度。四、思考题如何通过实验结果比较三组处理对植物的伤害程度的深浅？其原理是什么？实验4生长素对根芽生长的不同影响一、原理生长素包括植物体内产生的吲哚乙酸及人工合成的化学试剂萘乙酸、2,4－D等，均有刺激植物生长的作用。如促进细胞的生长与分化，加速根、芽的伸长、促进果实的形成与种子的萌发等。但不同浓度作用不一样，一般来说，在浓度小或者用量少时有刺激生长的作用。在浓度大或者用量过多时，则抑制生长，甚至会导致植物死亡。不同器官和不同位置的组织对生长素的反应也不一样，如刺激芽生长的浓度比刺激根生长的浓度要大些。二、 仪器及试剂(1)培养皿(9cm)(2)移液管(0.1ml；10ml)(3)lOppm萘乙酸(4)滤纸(7cm)三、 实验步骤1、 洗净、烘干五套培养皿，在皿的边缘贴上标签，分别标明(1)10ppm； (2)10-1ppm (3)10-3ppm (4)10-5ppm (5)蒸馏水；2、 在(1)皿中用10ml移液管加入lOppm萘乙酸溶液10ml；3、 在(2)—(5)皿中各加蒸馏水9.9ml；4、 用0.1ml移液管从(1)皿中吸取0.1ml萘乙酸溶液加入(2)皿充分混匀后，再从(2)皿中吸取0.1ml加入(3)皿中，如此继续稀释至(4)皿，即成各皿所标志浓度，最后从(4)皿吸出0.1ml弃去。5、 在每个培养皿中加入洁净的滤纸两张，纸上均匀排放大小相似而发芽一致(刚露白点)的水稻种子10粒，加盖后放在室内。6、 3—5天后，分别测量不同处理中萌发种子根、芽的长度。并将实验所测结果记录于下表，试比较不同浓度的萘乙酸溶液对于水稻幼苗根、芽生长的影响(促进或抑制)不同浓度萘乙酸对水稻根芽生长的影响浓度(ppm) 对照 10-5 10-3 10-1 10平均根长(cm)平均芽长(cm)根为对照％芽为对照％备注：1、 水稻种子的萌发：在30r下浸种2—3天，然后在30r以下保湿催芽至露白点(约1—2天)。2、 1000ppm母