荧光光度法在食品分析中的应用示例课件

荧光分光光度法在食品分析中的应用示例化工0901黄高能200906010106荧光分光光度法的特点荧光分析法（PCF）具有灵敏度高、选择性好、线性范围广等特点。近年来随着分析测试技术的迅速发展，人们对样品分析的要求也愈来愈高，而PCF技术由于自身优势，特别是与HPLC等技术的结合，在各方面的应用越来越受到人们的关注。下面对荧光分光光度法在食品中的几种应用进行一些介绍。一、荧光光度法测定食品中维生素C的含量原理

维生素C（抗坏血酸）在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸，它与邻苯二胺（OPDA）反应生成荧光物质（喹唔啉），用荧光分光光度计测定其荧光强度，其荧光强度与维生素C的浓度成正比。

脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物不与邻苯二胺反应，以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。

实验条件仪器及附件：F-380型荧光分光分光度计荧光石英比色皿分析条件：激发波长：350nm发射波长：430nm药品：淀粉酶、偏磷酸-乙酸溶液、酸性活性炭、乙酸钠溶液、硼酸-乙酸钠、邻苯二胺溶液、维生素C标准溶液等其他：分析天平（0.0001g）、称量纸、容量瓶、三角瓶、移液管、具塞比色管、烧杯、水浴锅、擦镜纸等。样品前处理样品前处理乳粉样品含淀粉样品：分别取固体5g、液体约20g于150mL三角瓶+淀粉酶+50mL蒸馏水→用氮气排空空气→塞上瓶塞→于45°下培养30min→取出冷却→用偏磷酸-乙酸溶液定容。乳粉样品不含淀粉样品：固体5g+偏磷酸-乙酸溶液A溶解、液体约50g+偏磷酸-乙酸溶液B溶解→混匀→定容至100mL。此为样品前处理溶液。待测样品制备样品经前处理后还需进一步的处理才可以进行检测。处理后的乳粉试样+2g酸性活性炭混匀过滤，得滤液→分别取5.0mL于25mL容量瓶，并编号为1号、2号→1号瓶中+5mL硼酸-乙酸+样品空白溶液，2号瓶中+5mL乙酸钠+样品溶液→分别取2.0mL与10mL比色管中→分别加入5mLOPDA溶液，静置闭光，放置60min→1号为样品空白溶液，2号为样品溶液。标准样品待测溶液制备精密称取0.050gVC标准样品，用偏磷酸-乙酸溶液A溶解并定容至50mL，再准确吸取10.0mL该溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀释并定容至100mL，配置成100ug/mL的标准溶液（临用前配置）二、荧光光度法测定食品中的甲醛

1、材料和方法1.1、原理：甲醛与乙酰丙酮在一定条件下定量反应生成吡啶衍生物,该产物的相对荧光强度在一定范围内与甲醛浓度成正比。1.2、仪器与试剂：960荧光分光光度计。甲醛标准溶液(1µg/ml);乙酰丙酮溶液，称约15g乙酸铵溶于水中,加入0.3ml乙酸和0.4ml乙酰丙酮,用重蒸馏水定容至100ml。此液于棕色瓶中能保存1个月。1.3、样品前处理：称取经粉碎的样品1~5g,以少量水湿润后移入100ml容量瓶中,加入80ml重蒸馏水,浸泡于80水浴中30min以上,冷却至室温,用水稀释至刻度,过滤备用。如有浑浊可蒸馏后测定。1.4、测定方法

1.4.1、标准曲线绘制吸取甲醛标准0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于10ml比色管中,各管用水稀释到8ml,加2ml乙酰丙酮溶液,摇匀后于沸水浴中加热5min,冷却后在Ex=430nm,Em=505nm处测定相对荧光强度。以甲醛含量为横坐标,相对荧光强度为纵坐标绘制标准曲线。1.4.2、样品测定取1.00~8.00ml样品处理溶液,按标准系列相同步骤操作测定其相对荧光强度。根据标准曲线法定量。1.4.3、食品中甲醛的含量按公式(1)计算：式中：X—

样品中甲醛含量,mg/kg;

C—

从标准曲线上查得的样品分析液中甲醛含量,µg;m—

样品质量,g;V—样品分析液体积,ml;100—

样品处理的定容体积,ml。

三、荧光光度法测定饼干中的黄曲霉毒素

黄曲霉毒素（Aflatoxin）是众所周知的最危险的毒素之一，简称AFT，是黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的一组以二呋喃香豆素为基本结构的化合物。其中黄曲霉毒素，Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２是最主要的毒素物质。1993年，黄曲霉毒素被世界卫生组织（ＷＨＯ）的癌症研究机构划定为Ｉ类致癌物。实验部分

1、试剂和仪器

1.1、试剂

水为重蒸馏水；甲醇:色谱纯；氯化钠（NaCl）；pH=7磷酸盐缓冲溶液0.1%；吐温／PBS溶液。

１.2、仪器

高速均质器（美国Vicam公司）；玻璃纤维滤纸直径11cm，孔径1.5μｍ（美国Vicam公司）免疫亲和柱（美国Vicam公司）；内含单株抗体对黄曲霉毒素Ｂ1具有专一性。空气压力泵（美国Vicam公司）；玻璃试管（12m×75mm，无荧光特性）；玻璃注射器，微量注射器；微型移液枪。2、实验条件标定值的设定：使用真菌标定标准物仪器绿色红色黄色Vicam4系列-12211+2３、实验步骤

称取磨细的试样（饼干）25.0ｇ于搅拌器中，加入5g氯化钠及125mL甲醇-水(6+4)，以均质器高速搅拌提取1-2min。将提取物倒入折叠式滤纸上，滤液收集于干净的容器中。准确移取20.0mL滤液并加入20.0mL纯水稀释，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤１次，至滤液澄清,备用。将上步10mL滤液以１－２滴/秒的流速全部通过免疫亲和柱，直至空气进入到亲和柱中。将10mL纯水以２滴／秒的流速通过亲和柱。再用10mL纯水以２滴/秒的流