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文档简介

肌肉组织氨基移换作用

（纸层析法）一、实验目的1.了解氨基移换作用的原理。2.熟悉纸层析法的基本原理。3.掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。氨基移换作用（转氨基作用）在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。二、实验原理人体内最重要的两种转氨酶：谷丙转氨酶（GPT）/丙氨酸转氨酶（ALT）谷草转氨酶（GOT）/天冬氨酸转氨酶（AST）谷氨酸+丙酮酸α-酮戊二酸+丙氨酸GPT谷氨酸+草酰乙酸α-酮戊二酸+天冬氨酸GOT正常人各组织中GPT及GOT活性(单位/克湿组织)血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预后的指标之一。组织GPTGOT组织GPTGOT肝44000142000胰腺200028000肾1900091000脾120014000心7100156000肺70010000骨骼肌480099000血清1620谷氨酸丙酮酸α-酮戊二酸丙氨酸3.显色反应茚三酮与α-氨基酸反应生成紫红色化合物相对迁移率Rf三、实验步骤1、酶液的制备2、氨基移换反应

加入物（ml）对照管测定管

肌匀浆10滴10滴煮沸5min37℃5min0.1mol/L丙氨酸溶液0.5ml0.5ml0.1mol/Lα-酮戊二酸溶液0.5ml0.5ml0.01mol/L磷酸盐缓冲液1.5ml1.5ml混匀，37℃50min

煮沸5min3、层析圆滤纸上标记点样制作滤纸芯滤纸芯插入圆滤纸组装层析装置4、显色把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器均匀喷洒0.5％茚三酮溶液，再

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