高效液相色谱法

高效液相色谱法和处器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。色谱柱内径一般为~μm，填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径(约2μm)填充剂的耐超高压、小进样量、低、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影柱。指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过。反相色谱系统使用非极性填充合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。正相色谱系统使用极用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂;分使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使孔径、表面积、键合基团的表面覆盖m之间。粒径更小(约之匹配;如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争种正文规定的色谱条件的测定结果为准。以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40C，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60C。高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机一无机杂化填充剂如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷，或有机一无机杂化填充剂等。在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与待检测器和质谱检测器通常不允许使末选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有的有机溶剂，如二氯甲烷和正充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变充剂粒径、流动相流速、混合流动相各组分百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为~；当X大于33%时，允许改变。应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。能满足分离要求的品种，可在该品种正行适用性试验，即用规定的对照品溶液或要时，可对色谱系统进行数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物。WWh/2可用时间或长度计(下同)，但应取相同单位。也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测组分度的计算公式为不大2.1.4拖尾因子(T)用于评价色谱峰的对称性。拖尾因子计算公式为：以峰高作定量参数时，除另有规定外，峰高法定量时T应在~之间。品第5页共10页高效液相色谱法第二版批准李忠华初审吴雅凝起草郭欣按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和内标物质，分别配成溶物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子R再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，进样，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别，进样，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分成分自身对照法。在建立方法批准李忠华初审吴雅凝起草录色谱图，按下式计算待测物的校正校正因子(f)=(cA/AA)/(cB/AB)也可精密称(量)取主成分对照品和杂质对照品各适量，分别配制成不同色谱图，绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回围(以噪声水平可接受为限)使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的量，分别进样，除另有规定外，供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为。测定杂质含量时，若无法获得待测杂质的校正因子，或校正因子可以忽液、进样调节纵坐标范围和计算峰面积的相对标准偏差后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样。除另有规定外，供试品溶液的记录时间应为主成分色。第7页共10页高效液相色谱法第二版批准李忠华初审吴雅凝起草郭欣按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量进样，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰杂质的检查。外一可见分光光度的高纯水，可用超纯水器制得或不超过±单位。配制好的流动相应通过适宜的μm(或μm)滤膜滤过，以除去杂质微粒。流动相用前必须脱气，否则容易在系统内逸效率、检测器的灵敏度以及基线稳定性严，以防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化用前应重新滤过。注人液相色谱仪前，一般应经适宜的μm(或μm)滤膜滤过，以减少对色谱系液的贮存条件(如温度、遮光等)。否则会导致色谱柱柱效明显第8页共10页高效液相色谱法第二版批准李忠华初审吴雅凝起草郭欣系统适用度的急剧变化及任何机械震动。温柱内固定相的填充状况；柱压的突然升高mL(10%--20%)冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出，再用较高-的为~，即~故该流动相比例调节的范围是:至:。X第9页共10页高效液相色谱法第二版批准李忠华初审吴雅凝起草郭欣查时，选择适宜的检测灵敏度和设定适宜的积分参数非常重准中，通常制备与杂质限度相当浓度的对照溶液，用以调高达到记录仪满量程的某个范围;而对于色谱工作没有明确规定峰设定灵敏度测试溶液，则在实际检验中，实验者通常数和小峰面积，由此也出现了同批样品的杂质总量在如遇到这种情况，建议实验者在检测灵敏度调节(或工作站标尺量程调整)完毕后，采用对照溶液逐步稀释法配制系列溶液来确定此色谱系统的检测面积作为计算杂质总量时色谱棍溶的