流式细胞术理论基础和应用

流式细胞术理论基础和应用第1页，课件共99页，创作于2023年2月CYTOME:细胞组，包括细胞结构、亚细胞结构和细胞功能元件CYTOMICS:细胞组学，研究异质性细胞组的科学，特别是以生物信息学方法研究单细胞分子水平由基因、蛋白和环境引起的细胞异质性PROTEOME:蛋白组，指单个单位生命组分（细胞器、细胞、组织、器官乃至生命个体等）所有蛋白构成PROTEOMICS:蛋白组学，研究异质性生命组分蛋白组的科学，特别是由基因和环境引起的变化。第2页，课件共99页，创作于2023年2月干扰RNA（RNAi）信号传导蛋白（CellSignalling）系统生物学第3页，课件共99页，创作于2023年2月环境－细胞组－基因/蛋白组相互作用网络第4页，课件共99页，创作于2023年2月Cell-based71%Biochemical23%Uncertain6%Cell-based40%Biochemical60%Past5yearsInDevelopmentSource:Dr.PriyaKunapuli,SeniorResearchScientist,MerckResearchLaboratories;Dec.2002Keytakeaways:Rapidmovementtocell-basedassaysforcontextualanalysisGrowthincellbasedassays------以细胞为目标第5页，课件共99页，创作于2023年2月细胞组学研究的过去、现在和未来暗视野光镜，相差显微镜，微分干涉对比显微镜，偏振光显微镜，荧光显微镜单光子共聚焦显微镜，多光子共聚焦显微镜大体荧光成像系统细胞计数仪18世纪，明视野显微镜发明流式细胞仪分光高度计，荧光高度计，干涉光高度计放射自显影细胞成像定量分析系统???目标细胞分选第6页，课件共99页，创作于2023年2月

形态学研究工具的发展历程SimpleopticalmicroscopeBasicclinicalscopeResearchgradefluorescencescopeHigh-endautomatedHCSsystemsConfocalscanningsystem第7页，课件共99页，创作于2023年2月细胞定量工具发展历程Simplecellcounters&sizersAutomatedCellviability2-4colorcytometer–simpleassays5-6colorcytometer–clinical/high-endres.6colorpluscytometer/sorter–high-endres.CellLabQuanta第8页，课件共99页，创作于2023年2月CONFOCAL－SUB-CELLORSTRUCTUREORIENTEDIMAGING第9页，课件共99页，创作于2023年2月

利用流式细胞仪(flowcytometer)

通过检测荧光信号来检测细胞或其它颗粒性物质（表面或胞浆或胞核）的物理、化学特性并通过这些特性对细胞或颗粒进行定量。

&检测表面标记物

&检测胞浆标记物

&检测胞核内标记物

&检测可溶性蛋白流式细胞术（FLOWCYTOMETRY）第10页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞术应用基础知识1)认识荧光素2)抗原抗体结合的基础和特点3)对待测目标细胞标记物的理解－应用的背景知识第11页，课件共99页，创作于2023年2月五光十色的荧光素单分子荧光素耦合的复合荧光素分子新型的荧光素样荧光物质—Qdots第12页，课件共99页，创作于2023年2月Qdots-纳米晶体：未来的荧光素同一种光源激发一种晶体发射多种荧光Qdots605的激发波长和发射波长（VERYSHARP）第13页，课件共99页，创作于2023年2月用荧光标记抗体抗体特异性地结合细胞上对应的抗原表达该抗原的细胞被标记上荧光；抗原表达多的细胞荧光强度强阳性细胞百分比或浓度靶蛋白浓度第14页，课件共99页，创作于2023年2月从模拟信号到

先进的数字化信号数字化信号转换对数查表保证最优化的线性和稳定性4次幂转换误差<1%光纤通讯速度快保真性高实时获取数据和分析报告结果20比特的数据，补偿数字化全矩阵正反补偿

离线补偿线性对对数查表VS普通对数放大第15页，课件共99页，创作于2023年2月让目标细胞特异性带上荧光！！！1)抗原抗体结合2)荧光素特异性结合&细胞器&生物大分子3)生物大分子之间的结合，如PS与ANNEXINV的结合第16页，课件共99页，创作于2023年2月第17页，课件共99页，创作于2023年2月抗原抗体结合非特异性因素抗体的交叉反应－所以最好选用单克隆抗体FC受体与Fc段的结合其它因素例如：IgG-CH3与单核细胞上FcR结合；

IgE-CH4与肥大细胞上FcR结合IgG1,IgG2andIgG4IgG3第18页，课件共99页，创作于2023年2月从模拟信号到

先进的数字化信号数字化信号转换对数查表保证最优化的线性和稳定性4次幂转换误差<1%光纤通讯速度快保真性高实时获取数据和分析报告结果20比特的数据，补偿数字化全矩阵正反补偿

离线补偿线性对对数查表VS普通对数放大第19页，课件共99页，创作于2023年2月抗原抗体结合的特异性第20页，课件共99页，创作于2023年2月

血液系统各系列细胞分化阶段抗原表达第21页，课件共99页，创作于2023年2月T细胞分化发育与膜表面分子的表达：

胚胎肝脏、骨髓阴性选择胸腺浅皮质区深皮质区髓质区

CD4+CD8-CD4-CD8+CD4-CD8-

4-8-4-8-阳性选择原T细胞CD3-αβ-CD4-/CD8-CD3+/γδ+CD4-/CD8-CD3+/αβ+CD4+/CD8+8+4+4+8+4+8+抗己抗己MHCIIMHCI第22页，课件共99页，创作于2023年2月CD抗原及其相关细胞群

细胞群CD抗原

T细胞CD2CD3CD4CD5CD7CD8CD28CD38B细胞CD10CD19CD20-CD24CD37CD72-CD75

髓系细胞CD13CD14CD15-CD17CD33CD34CD35NK细胞CD16CD56CD57CD94

血小板CD31CD41CD42aCD42bCD61CD62pCD63

激活抗原CD26CD30CD69CD95-CD97

粘附分子CD11a-cCD18CD29CD44CD49a-f

内皮细胞CD105CD106CD109细胞因子受体CD25CD115CD117CD122CD126第23页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞仪的主要特点高速测定细胞，大样本计数检测稀有细胞多参数分析自动化细胞分选第24页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞仪工作原理第25页，课件共99页，创作于2023年2月

基本原理流路流动室 鞘液SHEATH样本流SAMPLE单细胞悬液5*105~1*106个/ml光路光源滤片光电倍增管PMTHV电路放大电路HV及GAIN增益A/D转换统计

计算机第26页，课件共99页，创作于2023年2月

单细胞悬液大多数仪器是在50-300µm大小的孔径中,将细胞悬液注射进入鞘液中这一过程,成为流体动力学聚焦流路第27页，课件共99页，创作于2023年2月流动室InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid第28页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞仪光路图Air-cooledArgonIonLaserBeamShapingLensesHighSensitivityQuartzFlowCellForwardScatterDetectorSideScatterDetector525BPFL1(FITC)575BPFL2(PE)620BP

FL3(ECD)675BPFL4(PC5)488DL488BK550DL600DL645DL第29页，课件共99页，创作于2023年2月------单激光激发四色荧光标准模式

确保在同一个细胞上获得最多的信息单激光激发四色第30页，课件共99页，创作于2023年2月光路-滤片特性

长通滤片–允许长于设定波长的光通过

短通滤片–允许短于设定波长的光通过

带通滤片–允许一定带宽的波长通过当以45o

角放置滤片时,该滤片可以通过一定波长的光,同时也可以阻断并折射该波长以下的光

，这种方式的滤片称为二向色性滤片(dichroicfilter)630nmBandPassFilterWhiteLightSource第31页，课件共99页，创作于2023年2月散射光信号——细胞大小及颗粒性FSSS第32页，课件共99页，创作于2023年2月信号散射光信号

FS细胞大小

SS细胞颗粒性荧光信号

FL1–FITC

FL2–PE

FL3–ECD

FL4–PC5FL5-PC7第33页，课件共99页，创作于2023年2月荧光信号原理：细胞表面的抗原(或细胞膜受体)与相关的荧光抗体结合，形成带有荧光的抗原抗体复合物。通过流式细胞仪测定其荧光量，即可得到细胞群的不同抗原位点表达情况。第34页，课件共99页，创作于2023年2月电压调节－利用同型对照：设置背景

电压volts

增益Gain设定阴性和阳性信号强度的临界点第35页，课件共99页，创作于2023年2月荧光补偿Needtodowhenwemeasuresignalsfrommorethan1fluorescence.FITC520BP520BPE575BP第36页，课件共99页，创作于2023年2月4ColorSingleLaser(488nm)

FITC/PE/ECD/PC5第37页，课件共99页，创作于2023年2月荧光检测通道1荧光检测通道2荧光检测通道3荧光检测通道4荧光检测通道5荧光交叉对光路的影响第38页，课件共99页，创作于2023年2月补偿PEFITCPE+cellsFITC+cellsTodocolourcompensation:ForPureFITC+cells,=PEsignal-%FITCsignalForPurePE+cells,=FITCsignal-%PEsignalAftercompensationPEFITCPE+cellsFITC+cellsGOODcompensation:Y-meanoftheFITCcell=theY-meanof-/-cellsX-meanofthePEcell=theX-meanof-/-cellsPEFITCPE+cellsFITC+cellsOVERcompensation第39页，课件共99页，创作于2023年2月Beckmancoulter-应用最精确的全矩阵软件

利用软件进行全矩阵颜色补偿（任何两个荧光检测通道之间都可以进行补偿）第40页，课件共99页，创作于2023年2月检测的一般步骤设置检测方案（PROTOCOL)染色标本（同型对照，补偿管，检测抗体）同型对照管调电压电压不变，补偿管调补偿电压不变，补偿不变，上检测管检测后直接阅读结果第41页，课件共99页，创作于2023年2月如何看图第42页，课件共99页，创作于2023年2月第43页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞分选第44页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞仪分选电荷式分选是当前的主流分选模式高速分选是保证结果的基本条件高纯度和高活性是分选的基本要求可选的激光要多样化（空冷、水冷、固体；不同的波长；真正的紫外）提供多种分选流动室光路稳定，紫外激光功率大流式分选和磁珠分选的差别和联系BECKMANCOULTER提供工业标准的大型分选机型－EpicsALTRA:能满足绝大多数的分选需求BD的FACSVantage：只提供水冷激光和JIA流动室，光路不稳定，不方便检测，分选成本高BD的FACSAria：是一种过渡机型，只能提供空冷激光和石英流动室，不适用于大功率分选和活细胞分选Cytomation的Moflow是最经典的流式分选机，仅供应少量实验室，操作和人为干涉复杂，在中国无维修和售后服务，价格昂贵第45页，课件共99页，创作于2023年2月电荷式流式细胞仪分选系统488nmlaser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector第46页，课件共99页，创作于2023年2月流式细胞仪应用第47页，课件共99页，创作于2023年2月CELLSOFTHEIMMUNERESPONSE

INNATEPMNNUETROPHILSEOSINOPHILSBASOPHILSMONOCYTES/MACROPHAGESDENDRITICCELLS:mDC-pDCNKCELLSNKTCELLSgdTLYMPHOCYTESCD5+BCELLS

ADAPTIVEBCELLSHELPERT-CELLS Th1 Th2

REGULATORYT-CELLS(Th3)CYTOTOXICT-CELLS第48页，课件共99页，创作于2023年2月细胞免疫功能测定淋巴细胞亚群活化的T淋巴细胞抗原特异性免疫细胞调控性T细胞树突状细胞先天免疫细胞第49页，课件共99页，创作于2023年2月淋巴细胞亚群T淋巴细胞(CD3+)名称功能CD3+CD4+辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)辅助和诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-辅助性T细胞(Th)诱导性T细胞(Ti)辅助细胞免疫和体液免疫诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD8+抑制性/杀伤性T细胞(Ts/Tc)抑制免疫反应/杀伤异源细胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD4+CD29-抑制性T细胞(Ts)杀伤性T细胞(Tc)抑制细胞和体液免疫细胞毒性T细胞CD3+CD4+CD8+活化的T细胞在T细胞恶性增生时升高

CD3+CD4-CD8-有调节功能的T细胞,其表达

/T细胞受体(TCR/)CD4+/CD8+比值CD45RA+CD45RO-幼稚的/静止的T淋巴细胞

当免疫系统没有能力更新辅助性或抑制性/细胞毒性淋巴细胞的祖细胞时此细胞亚群较低

CD45RA-CD45RO+记忆性T淋巴细胞

病菌感染时升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+活化的T细胞,感染时升高

感染时升高第50页，课件共99页，创作于2023年2月淋巴细胞亚群活化T淋巴细胞名称功能CD3+HLA-DR+活化T细胞CD4+HLA-DR+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞CD4+CD25+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+CD25+CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞在病毒感染的患者中增加;其增加意味着HIV患者的预后较差B淋巴细胞(19+)CD19+CD23+活化的B细胞过敏患者中升高

CD19+CD5+在自身免疫性疾病中升高

CD19+CD5+CD23+慢性B细胞白血病及单克隆B淋巴细胞

NK细胞CD3+CD(16+56)+自身免疫性疾病时降低,而病毒感染时升高

CD3+CD57+CMV(巨细胞病毒)感染的强烈征兆

第51页，课件共99页，创作于2023年2月根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同还可将CD4+、CD8+分为

◎◎

CD4+:Th1:CD4+IFNr+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFNr+IL4+

◎◎CD8+:Tc1:CD8+IFNr+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFNr+IL4+第52页，课件共99页，创作于2023年2月Th1Th2细胞因子分泌细胞测定根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2Ｔｈ1细胞产生ＩＬ2、ＩＬ12、ＩＦＮγ、ＴＮＦβ等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ4、ＩＬ5、ＩＬ6、ＩＬ10、ＩＬ13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体相应地，CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。Th2细胞：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。第53页，课件共99页，创作于2023年2月淋巴细胞亚群数量检查项目和意义疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫病降低增高降低降低AIDS降低严重降低增高降低SARS降低降低降低降低降低慢性活动性肝炎、肝硬化降低正常或增高降低降低肿瘤降低降低增高降低降低第54页，课件共99页，创作于2023年2月抗原特异性T细胞分析四聚体（tetramer)染色细胞因子分泌试验ELISPOTCytokineSecretionAssay第55页，课件共99页，创作于2023年2月TETRAMER抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分析仪器对标本中这群细胞进行分析四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是对有功能的细胞进行检测。不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者

第56页，课件共99页，创作于2023年2月BeckmanCoulter已经有的产品传染性疾病相关：HIVgag–SLYNTVATL[HLA-A*0201]HIVpol–ILKEPVHGV[HLA-A*0201]CMVPP65–NLVPMVATV[HLA-A*0201]EBV–GLCTLVAML[HLA-A*0201]EBV–GLCTLVAML[HLA-A*0201]InfluenzaM1–GILGFVFTL[HLA-A*0201]HBVcore–FLPSDFFPSV[HLA-A*0201]肿瘤性疾病相关：Mart1–ELAGIGILTV[HLA-A*0201]Gp100–IMDQVPFSV[HLA-A*0201]Gp100–ITDQVPFSV[HLA-A*0201]Her-2/neu–KIFGSLAFL[HLA-A*0201]Her-2/neu–RLLQETELV[HLA-A*0201]PR-1–VLQELNVTV[HLA-A*0201]Tyrosinase–YMDGTMSQV[HLA-A*0201]第57页，课件共99页，创作于2023年2月抗原决定簇分析的科学平台

—iTopiaEpitopeDiscoverySystem

在目前主要以数据库为基础的理论性分析抗原决定簇的基础上，iTopia技术平台为研究者研究免疫的发生发展、疫苗的研制和免疫学检测提供了一个科学合理的解决方案第58页，课件共99页，创作于2023年2月第59页，课件共99页，创作于2023年2月活化的淋巴细胞分泌细胞因子检测TH1类细胞因子:与细胞免疫有关TH2类细胞因子:与体液免疫有关TH17类细胞因子:与炎症反应有关PMA,IONOMYCIN,BFA处理后全血染色分析IFN-GAMMA第60页，课件共99页，创作于2023年2月抗原特异性CD8T细胞检测检测HBV核心抗原(8AA)特异性CD8T细胞第61页，课件共99页，创作于2023年2月第62页，课件共99页，创作于2023年2月新现象??待进一步阐明

TETRAMER结合后对CD3,CD8位点的结合是否有影响?观察到CD3,CD8弱阳性一群细胞,TER阳性第63页，课件共99页，创作于2023年2月理论支持TETRAMER+CD8竞争位点TETRAMER+CD3竞争位点第64页，课件共99页，创作于2023年2月ELISPOTELISPOT的优势是非常敏感（流式细胞仪检测的极限是10*-6,ELISPOT的极限可以到10*-8)ELISPOT的缺点是计数麻烦，并且不能限定细胞因子是由哪一类细胞分泌的第65页，课件共99页，创作于2023年2月CytokineSecretionAssay

非常新的思路第66页，课件共99页，创作于2023年2月CD4CD25Treg调控性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免疫耐受，太弱会引起自身免疫反应调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来越多的其它分子可能能够更精确限定（eg.FOX-P3)CD25也是免疫细胞晚期活化的标记，但表达的平均荧光强度不足够强第67页，课件共99页，创作于2023年2月树突状细胞分析（DendriticCells,DC)DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群，没有发现特异性的抗原标记DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导检测,一般分为两群－PDC,MDC当前DC检测的方法：1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达CD80,CD86,CD83,DR等2）利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行分析3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123第68页，课件共99页，创作于2023年2月3contextsforDCDISCOVERYPeripheralbloodDCDCintissuesDCgeneratedinvitroFLOWCYTOMETRY第69页，课件共99页，创作于2023年2月两群树突状细胞－MDC/PDC第70页，课件共99页，创作于2023年2月新的DC细胞群－RegulatoryDC:

RegulatoryDC与传统DC不同，不递呈抗原，不激活T细胞主要存在与二级淋巴组织，发挥与传统DC相反的作用与淋巴组织的微环境相互作用，调节DC的功能第71页，课件共99页，创作于2023年2月非特异性的先天免疫细胞δＴ细胞:占外周血T细胞的10％以下，非抗原依赖型免疫细胞，在传染病、肿瘤病人外周血数量增加，表达CD3量较普通T细胞多NK细胞：占外周血淋巴细胞8－25％，传染病和肿瘤病人数量偏低。NK细胞可以根据NKR的不同而分类，丙型肝炎的发生和预后可能与NK细胞的表型相关DC：分布与淋巴组织和外周血，为非成熟状态，遇到相应的抗原后主要分泌IFN-alpha来发挥左右第72页，课件共99页，创作于2023年2月受体与疾病关系趋化因子受体CCR5与HIV易感性第73页，课件共99页，创作于2023年2月干细胞研究造血系统干细胞肿瘤干细胞间充质干细胞神经干细胞脂肪干细胞…………第74页，课件共99页，创作于2023年2月热门研究－间充质干细胞非造血系统细胞的主要来源共同的祖先在不同的培养诱导条件下能分化为不同的系列细胞或组织无特异性标记，天然数量稀少最好用流式细胞仪的多参数分析方法来分析表达的抗原包括间质细胞,内皮细胞,表皮细胞的标志:1)粘附分子类:CD102,CD56,CD54,CD166等,无CD62P;2)生长因子和细胞因子受体类:CD121-126等,无CD25;3)整合素分子类:CD49,CD29等,无CD11;4)其它分子类:CD105,CD90,CD73等,无CD34,CD45,CD80,CD86.第75页，课件共99页，创作于2023年2月CD34ISHAGESinglePlateform

第76页，课件共99页，创作于2023年2月热门研究－（肿瘤）干细胞肿瘤组织无限制的增殖在于肿瘤干细胞的存在目前研究的肿瘤干细胞来源于前列腺、乳腺等肿瘤肿瘤干细胞数量稀少，常规方法很难检测目前研究发现，肿瘤干细胞和正常细胞在HOECHEST33342染料摄取方面有重大差别因此流式细胞仪是分析和检测肿瘤干细胞的重要工具第77页，课件共99页，创作于2023年2月肿瘤干细胞中的研究应用

-Hoechst33342sidepopulation干细胞能表达ABCG2泵蛋白，在HOECHST33342染色时能将该染料泵出，因此分析不能被该染料染色的细胞群时可以发现一群不能染色的细胞既是干细胞，因此能够在众多肿瘤细胞中区分出肿瘤干细胞。QUANTA检测SP结果第78页，课件共99页，创作于2023年2月SIDEPOPULATION检测指南波长为355nm的超过50mw的紫外激光;488BPand488DLforSSC608LPHoechst-red515SPHoechst-blue非常关键的染色步骤-Goodell,M.,etal.(1996)JExpMed183,1797-806

ALTRA检测SP结果第79页，课件共99页，创作于2023年2月细胞凋亡和细胞周期检测第80页，课件共99页，创作于2023年2月细胞凋亡研究

1.鉴别凋亡与坏死:AnnexinⅤ/PI2.测定凋亡率:AnnexinⅤ、Apo2·7、TUNEL3.研究凋亡触发机制：Caspase、Fas及FasLbcl-2/bax4.多参数分析凋亡是趋势第81页，课件共99页，创作于2023年2月细胞膜非对称性和通透性检测第82页，课件共99页，创作于2023年2月

细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M.DNA含量及细胞周期分析第83页，课件共99页，创作于2023年2月NormalCellCycle第84页，课件共99页，创作于2023年2月细胞增值和凋亡检测CFSE检测细胞增值Regulatoryproteins

(bax/bcl-2family,p53)

Forwardandsidescatter

Dyeuptake(YO-PRO-1+PI)

Membraneinversion(AnnexinV)

Lossofmitochondrialmembranepotential(DiOC6)

Caspaseactivation(Ab)

DNAstrandbreak(TUNEL,SubG1)第85页，课件共99页，创作于2023年2月M4M5M6M7T-allB-ALL常见白血病CD45设门、FS/SS设门分群比较第86页，课件共99页，创作于2023年2月M2M3CD45/SSC辅助设门的原理

CD45是所有白细胞的抗原，CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达CD45。侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。以CD45／SSC典型图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色甚至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型，并排除正常细胞的干扰，当标本中幼稚细胞低于50％或检测残存白细胞时尤为必要。第87页，课件共99页，创作于2023年2月贝克曼库尔特公司BBA试剂

能同时检测10种细胞因子*HumanTh1/Th2CytokineIKitFL2

(ReporterParameter)FL4

(DifferentiatorParameter)第88页，课件共99页，创作于2023年2月ComparisonofFlowCytomixandELISAStandardRanges第89页，课件共99页，创作于2023年2月FlowCytomixCorrelationwithELISAs第90页，课件共99页，创作于2023年2月采用的是夹心免疫分析方法，捕捉抗体包被在微球上微球:直径4.4和5.5µm的两种聚乙烯小球抗体通过羧基与微球连接检测不同指标的微球其内部荧光或大小不同ELISA的原理.Microsphere技术原理第91页，课件共99页，创作于2023年2月KitConfigurationsKitTypesSimplexKitsMultiplexKits(upto10)BasicKitsSpecies/ApplicationHumanTh1/Th2HumanCardio-VascularMouseTh1/Th2RatCytokineHumanAdhesionMainMenu第92页，课件共99页，创作于2023年2月KitConfigurationsSimplexKits:ContainreagentsforthedetectionofoneindividualcytokineUsermaycombineSimplexkitsforcustomassay*

BasicKitrequired

MultiplexKits:Containreagentsforthedetectionofupto10analytespersamplesimultaneously

CommonSampleTypesSerumPlasmaCellculturesupernatantsWholeBloodMainMenu第93页，课件共99页，创作于2023年2月ProductCharacteristicsMainMenu第94页，课件共99页，创作于2023年2月SimplexKitsIFN-gIL-8sVCAM-1IFN-gIL-5IL-1bIL-10t-PAGM-CSFIL-6IL-2IL-12p70sP-selectinIL-1aIL-10IL-4TNF-asCD40LIL-2IL-17IL-5TNF-bMCP-1IL-4TNF-aIL-6Upto10SimplexKitscanbeco