质谱广泛应用于药物的定性鉴别

第二章药物的鉴别试验

（Identification

）通过理化方法判别已知药物真伪.第一节药物鉴别试验的定义与目的药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判断已知药物的真伪，它是药品质量检验工作中的首项任务。

ChP2010凡例中对药物鉴别的定义为：鉴别项下规定的试验方法，仅反映该药品某些物理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。

一.性状(Description)1.外观:晶型,色泽,气味等.2.溶解度:可反映药品纯度,并作为选择溶剂的依据.

方法：除另有规定外，称取研成细粉的供试品或量取液体供试品，于25℃2℃一定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解。第二节鉴别试验的项目3.物理常数:（1）熔点:

定义→固体药品从初熔到全熔的T,熔融分解T,药品从固态到液态的T.

方法→毛细管法,包括第一法,第二法和第三法.

例

雌二醇的熔点为175～180℃；格列本脲的熔点为170～174℃，熔融时同时分解。

（2）比旋度:

反映手性药物特性及纯度.

定义→一定，T下，偏振光通过长1dm，手性药物含量为1g/ml的溶液时测得的旋光度。

[]=100

/l•C(g/100ml)◆（3）吸收系数：

一定，T和溶剂下，药物在单位浓度及液层厚度（1cm）时的吸收度。

C=1%(w/v)时→E,C=1mol/L时→

.

＝E×M

/101%1cm1%1cm20D

二一般鉴别试验:一类药物

1.有机氟化物

样品→氧瓶燃烧,H2O/NaOH吸收(F-),→pH4.3缓冲液,茜素氟蓝/Ce(NO3)3→蓝紫色配位化合物,λmax=610nm.

2.有机酸盐:

◆水杨酸→酚OH与FeCl3(弱酸性)作用→紫色.

◆酒石酸→加AgNO3/NH3H2O→银镜.

3.芳伯氨基→重氮化-偶合反应.

4.托烷类生物碱→发烟硝酸/KOH(s)→紫色

5.Na,K,Ca→焰色反应.

6.铵盐：OH-/Δ

→NH3↑，红色石蕊变蓝。

7.无机酸根：Cl-加AgNO3→AgCl↓

SO42-加BaCl2→BaSO4↓

三专属鉴别试验

原理：依据特有化学结构采用特殊灵敏的定性反应。适于：证明是哪一种药物如司可巴比妥鉴别:1.丙二酰脲类鉴别试验一般

2.与碘液反应专属

第三节.鉴别方法

一.化学法→反应快,现象明显,专属性差.

1.显色→FeCl3显色(酚羟基),

异羟肟酸铁反应(芳酸及酯),

双缩脲反应(氨基醇),

重氮化-偶合反应(芳伯氨基),

氧化还原反应.

2.沉淀→与重金属离子反应,

与生物碱沉淀剂反应.

3.荧光→药物在光照（UV或VIS）下发出荧光;

药物发生反应后光照下发出荧光

4.气体→如NH3,CO2等

5.氧化还原反应使试剂退色（如VitC）.

6.测定衍生物mp.二光谱法1.UV-Vis(UltravioletandVisiblespectrophotometry)

适于含共轭结构的药物.

可供鉴别的参数:max,min,A,E,经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性,A1/A2,

如:VitB2的鉴别:其max为267nm,375nm和444nm;A375/A267的比值应为0.31-0.33;A444/A267的比值应为0.36-0.39;

BP2009阿替洛尔的UV鉴别：取本品0.100g用甲醇溶解并稀释至100ml，取上述溶液10.0ml用甲醇稀释至100ml。在230～350nm波长范围内测定，溶液显示在275nm和282nm处有最大吸收峰，其吸收度比值为1.15～1.20。

2.IR(Infraredspectrum):

专属性强,应用广泛,ChP2010采用标准图谱对照法，USP32则采用对照品法。

制样方法:(1)压片法,取供试品约1mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200mg，充分研磨混匀,压片,测定时扣除用同法制成的空白

(2)糊法和膜法,(3)溶液法.

原料药鉴别采用标准图谱对照.ChP2010也收载了制剂的IR鉴别法,注意辅料的干扰。炔诺酮νν3.NIR(Near-infraredspectrophotometry)

根据被测物质在近红外谱区750～2500nm(12800～4000cm-1)的特征光谱并利用适宜的化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进行定性、定量分析的一种技术。具有快速、准确、对样品无破坏的检测特性，不仅可用于“离线”供试品的检验，还能直接对“在线”样品进行检测。

(1)建立参考谱库,(2)数据预处理,(3)数据评估,(4)数据库验证.

4.AAS(AtomicAbsorptionspectrophotometry)

基态原子蒸汽吸收由同一元素作阴极制成的空心阴极灯发出的特征谱线.

专属性高.5.NMR(NuclearMagneticResonance)

根据样品指定基团的质子峰的化学位移和偶合常数来鉴别.ChP2010附录也列入该方法，在新药的研制中，如药物结构确证，更是重要的定性分析方法之一。

6MS(MassSpectrometry)

真空状态下,将样品离子化(EI,CI,FAB)并进一步打成碎片,按正离子的质荷比(m/z)大小分离而实现结构分析.ChP2010、USP32、BP2009均收载了质谱法。质谱广泛应用于药物的定性鉴别。解析重点：分子离子，碎片离子，同位素离子峰，亚稳离子峰，准分子离子峰。

7X射线粉末衍射

当X射线照射到晶格排列整齐的晶体上时，在一些方向产生反射→X射线衍射，由布拉格方程求出晶面间距，并求出键长,键角，最后画出分子结构

2dhklsin

=n

衍射角2

,面间距dhkl；hkl为晶面指数，即晶面与晶轴截距的倒数之比，也叫密勒指数。三色谱法

1.TLC(Thin-layerChromatography)(1)一般用同浓度对照品对照法,比较Rf值(2)样液+同体积对照液→应显单一斑点(3)样液和结构相近的对照药物分别点样,两者的Rf值应不同.(4)样液+结构相近的对照药物后点样,应显二个分离的斑点.

分离效能：在对照品与结构相似药物的对照品制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点。

Rf=l/l02.HPLC(HighPressureLiquidChromatography)

和GC(GasChromatography).(tR)

四显微鉴别法显微鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。

五生物学法.

利用微生物或者实验动物进行鉴别.主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。

六、指纹图谱与特征图谱鉴别法

中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段。借以鉴定真伪，评价药材和成品质量均一性和稳定性。基本属性是“整体性”和“模糊性”。不强调个体的绝对唯一性，而强调同一药材群体的相似性。相似性是通过色谱的整体性和模糊性来体现，这是中药色谱指纹图谱分析的最基本的属性。分析色谱指纹图谱强调的是“准确的辨认”（accuraterecognition）而不是“精密的计算”（precisecalculation）；比较图谱强调的是相似（similarity）而不是相同（identity）。在不可能将中药复杂成分都搞清楚的情况下，指纹图谱的作用主要是反映复杂成分的中药及其制剂内在质量的均一性和稳定性。

第四节.鉴别试验条件和方法验证

(一)浓度→与方法灵敏度有关,影响所观察的现象.

(二)温度→影响反应速度,药物稳定性.

(三)酸碱度→影响药物离解度.

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