荧光显微镜标准操作规程

荧光显微镜标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的建立规范的××型荧光显微镜操作程序，确保荧光免疫法检测结果准确可靠。2.仪器名称及型号××(品牌)××(型号)荧光显微镜。3.应用范围适用于免疫组经授权操作的检验技术人员。4.仪器简介和测试原理汞灯／LED灯的激发光通过激发滤光片后，波长非常窄的高能光子通过聚光器进一步聚集，最后到达抗原基质。与第二抗体结合的荧光素被激发后，引起电子转换为高能状态，再由高能转换回低能状态时，发射出较长波长的光，即荧光。5.开展项目包括直接免疫荧光法(如呼吸道病毒抗原检测项目)和间接免疫荧光法(如抗核抗体等自身抗体项目)。6.仪器环境要求相对湿度：40％~80％；环境温度：15~30℃；电源要求：电压200~240V，频率50~7.操作规程7．3·转动“物镜转换器”，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1~2cm处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。7．4·将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。物台上升，物镜逐渐接近试样。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合(要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图)，并转动“粗动调焦手轮”，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。7．6·如果在视野内看到的物像不符合实验要求(物像偏离视野)，可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。7．7·如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央(将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多)。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。7．8·在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求(一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱)。7．9·观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤(特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净)，检查处理完毕后即可装箱。8.维护保养置1~2袋硅胶作干燥剂。8．2．2注意保持显微镜的清洁。镜头的清洁，镜头上粘的灰尘应用柔软的刷子轻轻刷掉，在有指纹和油污的地方宜用柔软干净的脱脂棉、纱布或擦镜纸蘸上无水乙醇(或甲醇)轻轻擦拭，对物镜表面上的油渍只能用汽油擦拭。8．4·防热：避免热胀冷缩引起镜片的开胶与脱落。因此，生物显微镜要放置在干燥阴凉、无尘、无腐蚀的地方。使用后，要立即擦拭干净，用防尘透气罩罩好或放在箱子内。当显微镜闲置时，用塑料罩盖好，并储放在干燥的地方防尘防霉。将物镜和目镜保存在干燥器之类的容器中，并放些干燥剂。用软性的清洁剂来清洗，建议使用硅布。注意：不要使用有机溶剂(如乙醇、乙醚、稀释剂等)，因为会腐蚀机械和油漆，造成损坏。8．6．1透镜的清洁：使用后用干净柔软的绸布轻轻擦拭目镜和物镜镜片。聚光镜和反光镜只要擦干净就可以了。有较顽固的污迹，可用长纤维脱脂棉或干净的细棉布蘸少量二甲苯或镜头清洗液(3份乙醇∶1份乙醚)擦拭，然后用干净细软的绸布擦干或用吹风球吹干。注意：清洗液千万不能渗入到物镜镜片内部，否则会损坏物镜镜片。纯乙醇和二甲苯容易燃烧，在将电源开关打开或关闭时要特别当心不要引燃这些液体。独分开放置干燥剂器皿中，最好用棉花棒、纱布、柔软的刷子等比较柔软的东西来擦拭，油镜目镜可以自己拆下来清洗，16×目镜注意别装反了，前片凹面在上。物镜不要随便拆下。注意：擦洗镜头时，不能用力过猛，以防止损伤镀膜层。最好能2个月集中保养一次。显微镜多时，各个镜头要标号以免弄错了搭配。时清洗擦拭干净，并定期在有关部位加注中性润滑油脂。对于一些结构复杂，装配精密的零部件，如果没有一定的专业知识、一定的技能和专用工具，就不能擅自拆装，以免损坏零部件。9.校准转换器上出现的空孔位于光轴上，卸去转换器上的保护盖(如无空孔，可卸掉一个低倍物镜，校准完毕后再旋上)。转动荧光显微镜主体内的滤光片座，选一个透过绿光的滤光片组，使反射照明有光通过物镜转换器孔，此时在白纸上可以看到汞灯照亮的光斑。如光斑太亮，可以插入中性滤光片，或带上太阳眼镜，以保护眼睛。聚光镜调焦旋手，使汞灯光弧在白纸上成像清晰。因汞灯室内装有一个球面反光镜，用来增加亮度，于是在白纸上看到两个光弧的像。旋转汞灯调节旋手和反光镜位置调节旋手，使两个光弧并立。再转动反光镜聚焦调节旋手，使两个光弧有接近相等的亮度。汞灯调节旋手和反光镜位置调节旋手，使两个光弧重合。再调节聚光镜调焦旋手，得到放大和均匀的光弧像。这样汞灯校准工作就完成了。转入物镜后，根据物镜具体倍率，稍微调节一下聚光镜调焦旋手就可以了。9．2·孔径光阑和视场光阑的校准：一般荧光显微镜均采用柯勒照明。所谓柯勒照明是一种能够得到图像最大对比和最大分辨的折中方法。这时，灯丝成像在孔径光阑上，一般也成像在物镜最后一片镜框上。孔径光阑是限制光源大小的光阑，而视场光阑是限制人眼在目镜里看到视野大小的光阑。只有在正确校准柯勒照明的条件下，荧光显微镜才能获得它的最佳光学性能。10.报警及处理荧光显微镜无报警功能。11.注意事项意改变程序。11．2·应在暗室中进行检查，进入暗室后接通高压稳压器电源，开启3~5min后再开启激发高压汞灯，当看到高压汞灯完全亮后，停止激发，再开始观察标本。本经激发15min后，荧光亦明显减弱。