血清人绒毛膜促性腺激素β（β-HCG）定量检测标准操作规程

血清人绒毛膜促性腺激素β(βHCG)定量检测标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的规范操作流程，保证血清人绒毛膜促性腺激素β(βHCG)定量的准确性和可靠性。2.原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18min完成。2．1·第1步孵育：30μl标本、生物素化的单克隆βHCG特异抗体和钌(Ru)标记的单克隆βHCG特异抗体混匀，形成夹心复合物。2．2·第2步孵育：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。3.标本要求3．1．1血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管。标本在2~8℃可稳定7天，－20℃可稳定3个月。含沉淀的标本使用前需离心。心 (大约15000g，10min或2000~3500r／min，5~10min)澄清，方可进行检测。3．3·患者准备的一般要求：患者在采血前24h内应避免运动和饮酒，不宜改变饮食习惯和睡眠习惯。一般主张在禁食12h后空腹取血，门诊患者提倡静坐15min后再采血。4.试剂与仪器4．2·试剂使用：试剂盒中的试剂是一个整体，打开后可立即使用，不能被分开。正确操作需要的所有信息可通过相应的试剂条码读取。470ng生物素／mg粒子。含防腐剂。R2：Ru(bpy)32＋标记的抗HCG单克隆抗体(黑色瓶盖)，1瓶，10ml。浓度4．4·其他试剂：βHCG定标液(βHCGCalSet)、肿瘤标志物质控品(PreciControlTumorMarker)1和2、分析杯和Elecsys分析吸头(移液管吸头加样枪头)、通用稀释液、lM系统缓冲液、ProbeWashM清洗液、废物袋。4．5．1存放在2~8℃。为了确保使用前自动混匀期间提供足够量的磁性微粒，试剂盒器上，8周(交替贮存在冰箱内和仪器上，室温20~25℃，开瓶使用时间累计约20h)。5.操作步骤5．1·检查试剂与消耗品是否充足，使用前自动混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20℃后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开／关试剂瓶盖。5．2·检测程序：从主菜单进入测试要求屏幕。对每个样品，设置一个样品架上的位置，输入样品信息和需要检测的测试名称。将样品管(杯)放入样品架中已设定的位置。按下运行键(Run)开始检测。仪器会提醒操作者运行所需的定标。系统会自动计算检测结果。6.校准6．1·溯源性：该检测方法可溯源至国家生物标准品及质控品研究所(NIBSC)第4个绒毛膜促性腺激素国际标准品，编码75／589。每批ElecsysHCG＋β试剂的试剂盒上都有条形码记录各批号试剂特异的定标信息。使用HCG＋βCalSet使预定义的主曲线适用于分析仪。6．2·定标频率：必须使用新鲜试剂对每个试剂批进行一次定标(即试剂盒上机登入后的24h内)。下列情况建议重新定标：使用同一批试剂的1个月后(28天)；7天后(在分析仪上使用同一试剂盒)；根据需要：质控结果超出范围时，比如质控结果在规定的限值外；若两水平质控均在控，则定标曲线可延至试剂及质控批号更换。6．3·定标验证：分析仪的软件会自动检查定标曲线的有效性及任何偏离。7.质控该测试适用的质控液PreciControlTumorMarker1和2；也可以用其他合适的质控液，如××LyphochekTumorMarkerPlusControl。在以下情况建议进行质控检测：每24h进行一次检测、每一个新批号试剂盒、每一次定标以后。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如果出现质控值落在范围以外，每个实验室应采取纠正措施。8.结果判断l8．3·稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1∶20稀释。稀释后的标本HCG＋β含量必须高于100mU／ml。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。8．4·检测结果的不确定度：具体参见AFP标准操作规程的相关内容。9.生物参考区间非怀孕妇女≤2mU／ml；绝经后女性≤6mU／ml；男性≤2mU／ml。10.性能参数 lCV10．3·干扰因素：当黄疸(胆红素＜410μmol／L或＜24mg／dl)、溶血(血红蛋白＜物素治疗8h后采集样本。类风湿因子浓度最高达到3400U／ml以及使用透析患者的样本时未发现干扰。浓度＜750000mU／ml的hCG不产生高剂量钩状效应的影响。针对15种常用药物进行了体外检测。未发现有药物影响检测结果。少数病例中极高浓度的分析物特异性抗体、链霉亲和素或钌抗体会影响检测结果。通过适宜性的实验设计可将影响因素降到最低。11.临床意义11．2·怀孕时HCG由卵巢产生。HCG由许多的亚激素组成，他们具有相同的生理活性，分子量不同。人类绒毛膜促性腺激素的生理功能是维持妊娠黄体及影响类固醇产生。怀孕妇女中的HGC主要是完整的HCG。检测HCG浓度可在受孕一周后诊断怀孕，在妊娠前3个月测定HC