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疑胶层析法思考题(课前设疑)1层析分离技术包括哪些技木?分别叙述凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、高压液相层析、疏水层析、聚集层析的分离纯化原理2.一般在粗品制备阶段和精品纯化阶段分别应采用哪些层析分离技术?3.膜分离技木的原理是什么?它同一般的透析方法相比有何特点?4.凝胶层析的应用范围有那几方面?5.凝胶层析有何优缺点?6.常用凝胶分那几类?分别叙述它们各自的应用范围及特点。7.在实验中应如何选择凝胶与预处理?8.细粒凝胶柱流速慢幔,洗脱峰越窄,分辨率高,适用于什么产品多分离或分析?粗粒凝胶柱流徳高,但洗脱峰平坦,分辨率低,适用于产品制备那个阶段的分离?9什么是“类分离”和“分级分离”?0.在凝胶层析中要想得到好的层析结果应注意那些问题和采取那些措施?11.凝胶用过后,有那几种保存方法?2.葡聚糖凝胶离子交换剂,葡聚糖凝胶和离子交换剂有何异同及特点?凝胶层析(gelchromatography)常出现多种名称如凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析、凝胶渗透层析等凝胶尽析的定义凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析。凝胶尽析的应用范围:凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品,只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性,可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源和脱色。凝胶尽析的优点凝胶层析具有设备简单、操作方便、分离迅速及不影响分子生物学活性等优点。目前己被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化。凝胶尽析的基本原理232(圈照凝胶层析的原理分子大小不同混合物上柱:2洗脱开始.小分子扩散进人凝胶颗粒内分子被排阻于颗粒之外大小分子分开:4大分子行程较短,已洗脱出层析柱,小分子j在进行中凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的孔隙。随着溶剂流动,因此流程较短。向前移动速度快而首先流岀层析柱:反之,相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶厕孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出。使流量增长,移动速率慢而最后流岀层析柱,而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离。V=Vo+VitvgVt=ttRohV。简称为外水体积,Vo等于被完全排阻的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子,如常用的蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床,即可测出柱床的外水体积Voⅵi称内水体积,可由求得(g为干凝胶质量,单位为g,W为凝胶吸水量

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