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文档简介
Basicbiologyofplasmidandphagevectors载体(vector)LOGOo目的基因进入原核或真核细胞并高效复制和表达蛋白质,需要装入载体才能实现。作为基因工程载体所需具备的基本条件1能自我复制,并具一定的拷贝数2带有便于检测的遗传标记,便于筛选和鉴定。3在适当的位置有单酶切位点,便于重组操作。4带有强启动子,驱动目的基因在宿主细胞内高效表达。5、具有较高的遗传稳定性基因工程载体的种类和用途依据基本组成元件的来源分LOGO1细菌质粒:最常用的用于目的基因克隆或表达的载体。2酵母质粒:用于在酵母中表达目的蛋白。3噬菌体:主要用于构建基因组DNA或cDNA文库4.粘粒用于克隆大片段DNA。5.M13噬菌体:专用于Sanger双脱氧DNA测序6病毒包括人或哺乳动物病毒、昆虫病毒及植物病毒。用于在真核细胞中表达目的蛋白7、人工染色体载体LOGOo依据功能分:克隆载体:用于在宿主细胞中克隆和扩增外源片段2、表达载体:用于在宿主细胞中获得外源基因的表达产物。LOGO质粒载体的一般特征BasicbiologyofplasmidLOGO◎发现:细菌,偶见于链霉菌和酵母◎独立于染色体之外进行复制和遗传,又依赖于宿主编码的酶和蛋白质来进行复制和转录。o比病毒还简单的亚细胞结构,一旦离开寄主细胞则无法繁殖。结构特征LOGOo大多数质粒是以双链环状DNA分子的形式存在的、共价闭环DNA(CccDNA):可分为超螺旋的和松弛的两种2、开环DNA(OCDNA)LOGO分子量:小于1×10到大于200×10都有质粒与染色体的不同1、离心:密度不同2、agarose电泳:分子量大小3、电镜观察:1umdSDNA=3000bp4、再转化LOGObacteriumplasmidBacterialchromos表型效应致育性LOGOF因子(ertilityfactor):是在某些大肠杆菌中发现的一种最有代表性的接合型质粒。是雄性决定因子有三种存在方式:F+、F、线性形式接合作用(conjugation):在合适的条件下,将雄性细胞和雌性细胞混合培养,由于性须的作用,形成雌雄细胞配对的过程叫细菌的接合作用。质粒分为接合型(
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