血栓与止血检验及其相关疾病-血栓与止血检验（血液学检验课件）

第一节血管壁的止血作用与检验一、基础理论（一）血管壁的结构血管壁的正常结构包括三层：内层、中层和外层。内层：内皮细胞+基底膜；中层：平滑肌细胞（毛细血管无此层）；外层：结缔组织。一、基础理论一、基础理论（二）血管壁的止血作用血管在止血过程中的作用示意图二、血管壁（内皮）检验（一）毛细血管脆性试验（见《临床检验基础》）（二）出血时间测定（见《临床检验基础》）二、血管壁（内皮）检验（三）血管性血友病因子测定【实验原理】火箭电泳法含vWF抗体的琼脂板受检血浆（抗原）电场＋火箭样沉淀线二、血管壁（内皮）检验（三）血管性血友病因子测定【实验原理】酶联免疫吸附法vWF抗体包被板待测血浆（抗原）＋加底物显色酶标记二抗算出vWF：Ag含量二、血管壁（内皮）检验（三）血管性血友病因子测定【参考区间】火箭电泳法94.09%±32.46%。酶联免疫吸附法（1.02±0.56）U/ml。

二、血管壁（内皮）检验（三）血管性血友病因子测定【临床意义】1.减低见于血管性血友病（vWD），是诊断vWD及其分型的重要依据。2.增高见于血栓性疾病，如急性冠脉综合征、心肌梗死、脑血管病变、妊娠高血压综合征、肾小球疾病等，也可见于剧烈运动后肾上腺受体被兴奋等。二、血管壁（内皮）检验（四）凝血酶调节蛋白测定【实验原理】放射免疫法TM单克隆抗体包被小杯待测血浆（抗原）＋125I-抗人TM单抗算出样品中TM的含量二、血管壁（内皮）检验（四）凝血酶调节蛋白测定【参考区间】25～52μg/L。【临床意义】

正常情况下，血浆中的TM含量很低，但当血管内皮受损后，血浆中的TM含量明显升高且与内皮的损伤程度相关。TM:Ag的检测是了解血管内皮损伤最好的指标。TM:Ag水平升高见于血栓性疾病，如糖尿病、心肌梗死、脑血栓等。二、血管壁（内皮）检验（五）血浆6酮-前列腺素F1a测定【实验原理】ELISA竞争法抗原6酮-PGF1a包被固相载体

待测样品或标准品

＋抗血浆6酮-PGF1a抗体

包被抗原与游离抗原竞争性地与抗体结合酶标记二抗加底物显色算出待检血浆中6酮-PGF1a的含量二、血管壁（内皮）检验（五）血浆6酮-前列腺素F1a测定【参考区间】（17.9±7.2）ng/L。【临床意义】

血浆6酮-PGF1a减低见于血栓性疾病，如急性心肌梗死、心绞痛、脑血管病变、动脉粥样硬化、周围血管血栓形成及血栓性血小板减少性紫癜等。第二节血小板止血作用与检验一、基础理论（一）血小板的结构光学显微镜直径1～4微米，具有运动和变形能力。瑞氏染色后见血小板胞质呈灰蓝色或淡红色。电子显微镜血小板结构可分为表面结构、溶胶质层结构、细胞器内含物。一、基础理论（一）血小板的结构血小板超微结构示意图左图：血小板赤道面右图：血小板垂直面一、基础理论（一）血小板的结构1.血小板表面结构

由血小板膜和开放管道系统（opencanalicularsystem，OCS）组成。重要成分：血小板膜糖蛋白/磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）/血小板第3因子（lateletfactor3，PF3）等。一、基础理论（一）血小板的结构1.血小板表面结构名称CD名称分子量功能特性GPⅠaCD49b150000与GPⅡa形成复合物，是胶原的受体GPⅠbCD42c170000与GPⅨ、GPV形成复合物，是vWF的受体，参与血小板黏附反应，缺乏或减少时血小板黏附功能减低，见于巨大血小板综合征。GPⅠcCD49f140000与GPⅡ形成复合物，是层素（laminin）的受体GPⅡaCD29138000与GPⅠa和GPⅠc形成复合物，是胶原和层素的受体主要血小板膜糖蛋白及其功能一、基础理论（一）血小板的结构1.血小板表面结构名称CD名称分子量功能特性GPⅡb和ⅢaCD41aⅡb145000Ⅲa90000GPⅡb与Ⅲa形成复合物，是纤维蛋白原（Fg）的受体，参与血小板聚集反应，缺乏或减少时血小板聚集功能减低，见于血小板无力症。GPⅣCD3688000是TSP的受体GPⅤ82000和GPⅠb、GPⅨ构成vWF受体GPⅠb-Ⅴ-ⅨGPⅨCD42a17000和GPⅠb、GPⅤ形成复合物，构成vWF受体P-selectin140000即α颗粒膜糖蛋白（GMP140）。血小板活化时，可移行至血小板浆膜上，为血小板活化的标志。一、基础理论（一）血小板的结构2.溶胶质层结构由微管、微丝、致密管道系统等组成。3.细胞器内容物结构主要由α-颗粒、δ-颗粒（致密颗粒）和γ-颗粒（溶酶体）组成。一、基础理论（二）血小板的花生四烯酸代谢血小板代谢是维持血小板正常结构和功能的基础，包括能量代谢和膜磷脂代谢。其中与血小板活化最为密切相关的是花生四烯酸代谢。一、基础理论（二）血小板的花生四烯酸代谢花生四烯酸代谢示意图一、基础理论（三）血小板的止血功能血小板黏附促凝反应血小板聚集释放反应血块收缩一、基础理论（三）血小板的止血功能ADP血小板进一步激活、释放血块收缩内皮损伤（内皮下组织暴露）血小板黏附血小板初期释放ADP等血小板聚集纤维蛋白形成坚固的凝血块血小板促凝作用5-HT血小板血栓一、基础理论（三）血小板的止血功能类别成分活性胺5-HT，组胺，肾上腺素，去甲肾上腺素腺嘌呤核苷酸ADP,ATP,cAMP阳离子Ca2+,K+血小板因子PF3,PF4等凝血因子凝血因子I，V，VIII，XIII血小板蛋白β-TG，血小板糖蛋白等血栓烷TXA2血小板的主要释放产物二、血小板检验（一）血小板计数（临床检验基础）（二）血块退缩试验（临床检验基础）二、血小板检验（三）血小板黏附试验（PAdT）【实验原理】

用一定量的抗凝血与一定表面积的玻璃表面接触一定时间，血小板可黏附于带负电荷的玻璃表面，根据黏附前后血小板数量之差，即可计算出血小板的黏附百分率。二、血小板检验（三）血小板黏附试验（PAdT）【参考区间】玻璃珠柱法：62.5%±8.6%。旋转玻球法（12ml玻瓶）：男性28.9%～40.9%；女性34.2%～44.6%。

二、血小板检验（三）血小板黏附试验（PAdT）【临床意义】

血小板黏附率减低可见于一些遗传性与获得性血小板功能缺陷病，如巨血小板综合征、血小板无力症、肝硬化、尿毒症、骨髓增生异常综合症（MDS）、单克隆高球蛋白血症等，也可见于服用抗血小板药物等。二、血小板检验（三）血小板黏附试验（PAdT）【临床意义】血小板黏附率增高常见于血栓前状态与血栓性疾病，如急性心肌梗死、脑血栓形成、心绞痛、动脉硬化、糖尿病、高脂蛋白血症等疾患。二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【实验原理】1.光学比浊法在富血小板血浆（PRP）中加入致聚剂，使血小板发生聚集，血浆浊度减低，透光度增加，血小板聚集仪可将血小板聚集过程记录于图纸上，形成血小板聚集曲线。根据曲线变化反映血小板的聚集程度和速度。二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【实验原理】2.全血电阻抗法在枸橼酸钠抗凝的全血中加入血小板激活剂，血小板聚集后导致浸在血液中的两电极间电阻抗增加，血小板聚集仪可以连续记录血小板聚集过程中的电阻抗变化并以聚集曲线显示。二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【参考区间】

不同仪器及诱聚剂或者不同浓度、剂量的同种诱聚剂有不同的参考值。以MG-196型血小板聚集仪为例，几种常用的体外诱聚剂测得的参考值：ADP(1.0μmol/ml)ADP(0.5μmol/ml)肾上腺素(4.0μg/ml)胶原(4.0μg/ml)瑞斯托霉素(1.5μmg/ml)最大幅度（%）48.6～78.825～5050.2～85.654～9076.1～98.9达到最大幅度时间（S）150～29068～230220～360220～290200～2802min时幅度（%）38～6820～4225～5022～6155～90单峰或双峰曲线双峰双峰双峰单峰双峰二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【参考区间】

血小板聚集曲线二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【临床意义】1.PAgT减低反映血小板聚集功能减低。见于血小板无力症、巨大血小板综合征、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、尿毒症、细菌性心内膜炎、急性白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病、特发性血小板减少性紫癜、服用抗血小板药物等。二、血小板检验（四）血小板聚集试验（PAgT）【临床意义】2.PAgT增高反映血小板聚集功能增强。见于血液高凝状态和（或）血栓前状态和血栓性疾病，如心肌梗死、心绞痛、动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、肾病综合征、心脏瓣膜置换术后、深静脉血栓形成、高脂饮食、口服避孕药和吸烟等。二、血小板检验（五）血小板第三因子有效性测定【实验原理】

将健康人与受检者的富血小板血浆（PRP）和乏血小板血浆（PPP）交叉混合，以白陶土作为活化剂，氯化钙作为凝血反应启动剂，促使PF3形成。通过测定各组标本的凝固时间，比较各组凝血时间的差异，从而判断受检者PF3是否有缺陷。二、血小板检验（五）血小板第三因子有效性测定【实验原理】组别患者血浆（ml）正常血浆（ml）PRPPPPPRPPPP10.10.120.10.130.10.140.10.1PF3aT测定分组二、血小板检验（五）血小板第三因子有效性测定【参考区间】第1组较第2组的结果延长不超过5秒，若延长5秒以上，则视为PF3有效性减低。第3组与第4组分别为患者和正常人（作为对照管），患者PF3有缺陷或内源凝血因子有缺陷（如血友病），第3组凝固时间亦会延长。二、血小板检验（五）血小板第三因子有效性测定【临床意义】1.PF3有效性减低见于先天性血小板PF3缺乏症、血小板无力症、巨大血小板综合征、肝硬化、尿毒症、弥散性血管内凝血、系统性红斑狼疮、特发性血小板减少性紫癜、骨髓增生异常综合征及一些药物的影响。二、血小板检验（五）血小板第三因子有效性测定【临床意义】2.PF3有效性增加见于高脂血症、动脉粥样硬化、心肌梗死、糖尿病伴血管病变等。二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【实验原理】

用荧光素标记的抗血小板膜糖蛋白的单克隆抗体作分子探针，与全血或富含血小板的血浆反应，通过流式细胞仪检测标记于抗体的荧光素发出的荧光信号，计算出阳性血小板的百分率。用定量流式分析技术还可以定量检测血小板膜糖蛋白分子的数量。二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【实验原理】CD编号识别的膜糖蛋白CD36GPⅣCD41GPⅡb/Ⅲa和GPⅡbCD42aGPⅨCD42bGPⅠCD42dGPⅤCD61GPⅢaCD62PP-selectin或MP140FCM常用的血小板膜糖蛋白单克隆抗体二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【参考区间】1.FCM分析

糖蛋白GPⅠb（CD42b）、GPⅡb(CD41)、GPⅢa（CD61）、GPⅨ（CD42a）阳性血小板百分率为95%～98%。CD62P（GMP-140）<2%，CD63<2%，FIB-R<5%。二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【参考区间】2.定量流式细胞分析GPⅢa（CD61）：（53±12）×103分子数/血小板。GPⅠb（CD42b）：（38±11）×103分子数/血小板。GPⅠa（CD49b）：（5±2.8）×103分子数/血小板。二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【临床意义】1.血小板功能缺陷病①巨大血小板综合征：血小板膜GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ含量显著减少或缺乏；②血小板无力症：血小板膜GPⅡb-Ⅲa含量显著减少或缺乏，轻型患者可有部分残留（5%～25%）；二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【临床意义】1.血小板功能缺陷病③血小板贮存池缺陷病：致密颗粒缺乏（Ⅰ型）患者，活化血小板膜CD62P表达正常；α颗粒缺乏（Ⅱ型）或α颗粒与致密颗粒联合缺陷（Ⅲ型）患者，活化血小板膜CD62P表达减低或缺乏，但GPⅠb、GPⅡb、GPⅢa、GPⅤ和GPⅨ表达正常。二、血小板检验（六）血小板膜糖蛋白测定【临床意义】2.血栓前状态与血栓性疾病

循环血小板膜GPⅡb-Ⅲa分子数量增加、（FIB-R）表达量增加、CD62P或CD63表达增加是血小板活化的特异性分子标志，尤其是FIB-R高表达时，表明血小板的聚集性显著增高，易导致血栓形成。二、血小板检验（七）血小板相关抗体测定【实验原理】将抗人血小板抗体包被在酶标反应板孔内，加受检血小板溶解液，如果此液中存在有相关抗体则可与包被的抗体结合，再加入酶联二抗，最后加入底物显色，其深浅与血小板溶解液中的抗体含量成正相关。二、血小板检验（七）血小板相关抗体测定【参考区间】ELISA法PAIgG：（0～78.8）ng/107血小板；

PAIgA：（0～2）ng/107血小板；

PAIgM：（0～7）ng/107血小板；

PAC3：（0～18）ng/107血小板。二、血小板检验（七）血小板相关抗体测定【临床意义】90%以上的特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者PAIgG增加，同时测定PAIgA、PAIgM及PAC3阳性率达100%。且随治疗好转PAIg水平下降，复发则增加。二、血小板检验（七）血小板相关抗体测定【临床意义】其他疾病如同种免疫性血小板减少性紫癜（多次输血后）、Evans综合征、慢性活动性肝炎、系统性红斑狼疮、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤等PAIg也可增加。特异性抗血小板膜糖蛋白的自身抗体阳性对诊断ITP有较高的特异性，其中以抗GPⅡb/Ⅲa，GPⅠb/Ⅸ复合物的抗体为主。二、血小板检验（八）血小板寿命测定【实验原理】观察单次剂量服用阿司匹林后血小板MDA和TXB2生成恢复至服药前水平的时间，可以反映血小板生存时间。用ELISA法或RIA可测定TXB2或MDA的含量。二、血小板检验（八）血小板寿命测定【参考区间】MDA法6.6～15天TXB2法7.6～11天二、血小板检验（八）血小板寿命测定【临床意义】血小板生存期缩短见于①血小板破坏增多性疾病：如特发性血小板减少性紫癜、药物性血小板减少、脾功能亢进、系统性红斑狼疮；②血小板消耗过多性疾病：如DIC、血栓性血小板减少性紫癜、溶血尿毒症综合征；③各种血栓性疾病：如心肌梗死、糖尿病伴血管病变、深静脉血栓形成、肺梗死、恶性肿瘤等。第三节血液凝固与检验一、基础理论（一）凝血因子包括12个经典的凝血因子以及激肽系统的激肽释放酶原和高分子量激肽原，以罗马数字命名的凝血因子为Ⅰ～ⅩⅢ。除因子Ⅲ为组织因子，其余均存在于新鲜血浆中。除因子IV为钙离子外,其余均为蛋白质。因子蛋白质结构酶活性生物半衰期生成部位是否依赖维生素K血浆中浓度(mg/L)BaSO4吸附血浆中是否存在血清中有无Ⅰ3对肽链90h肝否2000~4000是无Ⅱ单链S*60h肝是200否很少Ⅲ单链辅因子—组织细胞内皮细胞单核细胞否———Ⅴ单链辅因子12h肝否5~10是无Ⅶ单链S4~6h肝是2否有Ⅷ单链辅因子12h不明否<10是无Ⅸ单链S24h肝是3~4否有Ⅹ双链S30~40h肝是6~8否有Ⅺ双链S48~84h肝否4存在，但减少1/3有Ⅻ单链S48~52h肝否2.9是有PK单链S6.5天肝否5.0~15存在有HMWK单链辅因子3~5天肝否7.0存在有ⅩⅢ双链转谷氨酰酶10天肝否2.5存在有注：S*表示丝氨酸蛋白酶，因为酶的活化中心含丝氨酸凝血因子的一般特点一、基础理论（一）凝血因子1.依赖维生素K的凝血因子（1）因子Ⅱ（凝血酶原,prothrombin）（2）因子Ⅶ（稳定因子，stablefactor）（3）因子Ⅸ（血浆凝血活酶成分，plasmathromboplastincomponent，PTC）（4）因子Ⅹ（Stuart-Prower因子）

一、基础理论（一）凝血因子2.接触凝血因子（1）因子Ⅺ（2）因子Ⅻ（3）激肽释放酶原（prokallikrein，PK）（4）高分子量激肽原（highmolecularweightkininogen,HMWK）一、基础理论（一）凝血因子3.凝血酶敏感因子（1）因子Ⅰ（纤维蛋白原，fibrinogen，Fg）（2）因子Ⅴ（易变因子，labilefactors）（3）因子Ⅷ（抗血友病球蛋白,antiemophiliaglobulin，AHG）（4）因子ⅩⅢ（纤维蛋白稳定因子,fribrinstabilizingfactor）一、基础理论（一）凝血因子4.其他凝血因子（1）组织因子（tissuefactor，TF）（2）因子Ⅳ（钙离子,Ca2+）一、基础理论（二）凝血机制1.内源凝血途径（1）因子Ⅻ的激活①固相激活；②液相激活。（2）因子Ⅺ的激活（3）因子Ⅸ的激活（4）因子Ⅷ的作用

一、基础理论（二）凝血机制2.外源凝血途径（1）因子Ⅲ(TF)：启动外源凝血途径（2）因子Ⅶ的激活一、基础理论（二）凝血机制3.共同凝血途径（1）凝血酶原酶生成①因子Ⅹ的激活；②因子Ⅴ的激活；③磷脂的作用。（2）凝血酶生成（3）纤维蛋白的形成

一、基础理论（二）凝血机制3.共同凝血途径

血液凝固机制二、凝血因子检验（一）全血凝固时间测定（CT）（二）活化凝血时间测定（ACT）（三）活化部分凝血活酶时间测定（APTT）（四）血浆凝血酶原时间测定（PT）

二、凝血因子检验（五）血浆纤维蛋白原测定血浆纤维蛋白原由肝脏合成，是血浆中含量最高的凝血因子。【实验原理】1.凝血酶（Clauss）法2.PT衍生法【参考区间】成人：2.00～4.00g/L；新生儿：1.25～3.00g/L。

二、凝血因子检验（五）血浆纤维蛋白原测定【临床意义】Fg可做为溶栓治疗检测的指标。Fg一般不应低于1.2～1.5g/L1.Fg增高①感染；②无菌性炎症；③血栓前状态与血栓性疾病；④恶性肿瘤；⑤外伤、烧伤、外科手术或放射治疗后；⑥其他。

二、凝血因子检验（五）血浆纤维蛋白原测定【临床意义】Fg可做为溶栓治疗检测的指标。Fg一般不应低于1.2～1.5g/L2.Fg降低①原发性纤维蛋白原减少或结构异常；②继发性纤维蛋白原减少。

二、凝血因子检验（六）血浆因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性测定【实验原理】将受检血浆分别与乏凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ基质血浆混合，做血浆凝血酶原时间测定【参考区间】

FⅡ:C：97.7％±16.7％；

新生儿：FⅤ:C：102.4％±30.9％；FⅦ:C：103％±17.3％；FX:C：103％±19.0％。

二、凝血因子检验（六）血浆因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性测定【临床意义】1.活性增高①血栓前状态；②血栓性疾病。2.活性减低①先天性因子缺乏；②获得性因子减低。

二、凝血因子检验（七）血浆因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性测定【实验原理】在受检血浆中分别加入乏凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的基质血浆、白陶土-脑磷脂悬液和Ca2+溶液，进行APTT测定。【参考区间】

FⅧ:C：103％±25.7％；FⅨ:C：98.1％±30.4％；FⅪ:C：100％±18.4％；FⅫ:C：92.4％±20.7％

二、凝血因子检验（七）血浆因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性测定【临床意义】1.增高①高凝状态；②血栓前状态；③血栓性疾病。2.减低①因子Ⅷ：C减低见于血友病甲、血管性血友病等；②因子Ⅸ：C减低见于血友病乙、肝脏疾病等；③因子Ⅺ:C减低见于Ⅺ因子缺乏症、DIC等；④因子Ⅻ:C减低见于先天性因子Ⅻ缺乏症、DIC等。

二、凝血因子检验（八）凝血因子ⅩⅢ定性试验和亚基抗原测定1.凝血因子ⅩⅢ定性试验【实验原理】激活的因子ⅩⅢ可以使纤维蛋白单体间交联后形成不可溶的纤维蛋白凝块。【参考区间】24小时内纤维蛋白凝块不溶解。【临床意义】①先天性因子ⅩⅢ缺乏症②获得性因子ⅩⅢ减少症：肝病、系统性红斑狼疮、DIC等。

二、凝血因子检验（八）凝血因子ⅩⅢ定性试验和亚基抗原测定2.凝血因子ⅩⅢ亚基抗原检测【实验原理】免疫火箭电泳法：在含有FⅩⅢα亚基和β亚基抗血清的琼脂凝胶板中，加入受检血浆在电场作用下，出现抗原-抗体反应形成的火箭样沉淀峰，此峰的高度与受检血浆中FⅩⅢ亚基的浓度成正比。

二、凝血因子检验（八）凝血因子ⅩⅢ定性试验和亚基抗原测定2.凝血因子ⅩⅢ亚基抗原检测【参考区间】免疫火箭电泳法：FⅩⅢα：100.4％±12.9％；FⅩⅢβ：98.8％±12.5％。

二、凝血因子检验（八）凝血因子ⅩⅢ定性试验和亚基抗原测定2.凝血因子ⅩⅢ亚基抗原检测【临床意义】

先天性因子ⅩⅢ缺乏症：纯合子型者的FⅩⅢα：Ag明显减低（≤1％），FⅩⅢβ：Ag轻度减低；杂合子型的FⅩⅢα：Ag（常≤50％），FⅩⅢβ：Ag正常。获得性因子ⅩⅢ减少症：见于肝脏疾病、DIC等

第四节抗凝物质与检验学习目标

掌握常用抗凝物质检验（复钙交叉试验、凝血酶时间测定及纠正试验）原理、注意事项及临床意义；熟悉主要抗凝物质的作用原理；了解抗凝物质如抗凝血酶、蛋白C系统、组织因子途径抑制物等的基本理论。一、基本理论（一）抗凝血酶抗凝血酶（antithrombin，AT）是一种单链糖蛋白，由肝、血管内皮细胞和巨核细胞合成，属于α2球蛋白。AT作用：AT是肝素依赖的丝氨酸蛋白酶抑制物，抑酶谱很广，能抑制FⅡa、FVⅡa、FIXa、Fxa、FXⅡa以及纤溶酶、胰蛋白酶和激肽释放酶等，作用机制相同。

一、基本理论（一）抗凝血酶AT作用机制：肝素与AT结合后，导致AT构型发生改变，后者可与这些酶活性中心的丝氨酸残基结合，“封闭”了这些酶的活性中心而使之失活。此时肝素可从复合物中重新释出，再与其他游离的AT结合，继续发挥肝素增强AT抗凝功能的作用。

一、基本理论（二）蛋白C系统蛋白C系统包括蛋白C（PC）、凝血酶调节蛋白（TM）、蛋白S（PS）、活性蛋白C抑制物（APCI）和内皮细胞蛋白C受体（EPCR）蛋白C、蛋白S、APCI由肝脏产生。TM和EPCR由内皮细胞产生和表达。

一、基本理论（二）蛋白C系统APC作用机制蛋白C被凝血酶与凝血酶调节蛋白复合物激活形成活化的蛋白C（APC），这一过程在EPCR辅助下完成。APC在蛋白S的协同下，发挥抗凝作用，主要表现在裂解因子Va、Ⅷa，抑制因子Xa与血小板膜磷脂的结合。

一、基本理论（二）蛋白C系统APCI作用机制APCI通过和APC结合使之失去灭活因子Va、Ⅷa的作用。如果蛋白C或蛋白S有缺陷，与AT缺陷一样（它们均有遗传性缺陷），可引起机体凝血和抗凝平衡失调，导致血栓形成。

一、基本理论（三）组织因子途径抑制物组织因子途径抑制物（TFPI）是一种单链糖蛋白，主要由血管内皮细胞、血小板、单核细胞等合成和分泌。TFPI在血浆中以与脂蛋白结合和游离两种形在存在。TFPI作用机制：TFPI存在于Ⅶa和Ⅹa的结合部位，通过和TF-Ⅶa复合物结合抑制其活性，从而对组织因子凝血途径发挥重要调控作用。

一、基本理论（四）生理性和病理性抗凝物质生理性抗凝物质肝素辅因子Ⅱ（HCⅡ）a2-巨球蛋白（a2-MG）a1-抗胰蛋白酶（a1-AT）一、基本理论（四）生理性和病理性抗凝物质病理性抗凝物质主要包括肝素类肝素物质狼疮抗凝物（LAC）凝血因子抑制物

二、抗凝物质检验（一）抗凝血酶活性及抗原测定【实验原理】1.血浆抗凝血酶活性（AT:A）检测发色底物法：受检血浆中加入过量肝素和FⅩa，使AT与FⅩa形成无活性复合物，剩余的FⅩa水解发色底物，释出发色基团而显色，色泽的深浅与剩余FⅩa的量呈正相关，而与待测血浆中AT:A呈负相关。

二、抗凝物质检验（一）抗凝血酶活性及抗原测定【实验原理】2.血浆抗凝血酶抗原（AT:Ag）检测用酶联免疫吸附法（ELISA法）或免疫火箭电泳法均可检测。免疫火箭电泳法：以抗凝血酶的抗血清制备琼脂糖凝胶板，将受检血浆加入其中一起电泳，抗原和抗体相互作用形成火箭样沉淀峰，沉淀峰的高度与血浆中AT的含量呈正相关。

二、抗凝物质检验（一）抗凝血酶活性及抗原测定【参考区间】血浆AT:A108.5%±5.3%；血浆AT:Ag（0.29±0.06）g/L

二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【实验原理】1.蛋白C活性（PC:A）检测①血浆凝固法：在待检血浆中加入PC激活剂、FⅫ活化剂、磷脂和钙离子，在活化内源凝血途径的同时也激活PC系统，测定血浆的凝固时间（APTT）,其APTT比不加PC激活剂的APTT延长，而且APTT延长的程度与血浆PC:A呈正相关，由此可计算出相当于正常血浆PC:A的百分率。二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【实验原理】1.蛋白C活性（PC:A）检测②发色底物法：受检血浆加入PC，PC被激活为活化蛋白C（APC），APC作用于特异性发色底物，释出显色基团，色泽的深浅与受检血浆PC的活性成正相关。

二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【实验原理】2.蛋白C抗原（PC:Ag）测定火箭电泳法：在含抗人PC抗体的琼脂板中，加入一定量的受检血浆（抗原）于检测孔中，定量抗原在电场作用下由负极向正极泳动，在一定时间内形成火箭样沉淀峰，峰高与抗原浓度成正比。

二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【参考区间】PC:A100.24%±13.18%；PC:Ag102.5%±20.1%

二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【临床意义】人体内血浆PC含量随年龄而增加，每10年约增加4%。1.PC抗原水平减低见于先天性蛋白C缺陷和获得性蛋白C缺陷，如肝脏疾病、手术后、弥散性血管内凝血、成人型呼吸窘迫综合征等。二、抗凝物质检验（二）蛋白C活性及抗原测定【临床意义】2.PC抗原水平增高见于血栓性疾病和血栓前状态，如弥散性血管内凝血、深部静脉血栓形成、缺血性心脏病、急性心肌梗死、心绞痛、糖尿病、肾病综合征、妊娠后期等。二、抗凝物质检验（三）蛋白S抗原测定【实验原理】火箭电泳法：血浆总PS（TPS）包括游离PS（FPS）和与补体C4结合的PS（C4bP-PS），火箭电泳法可在琼脂板上同时测定TPS和FPS。在待测血浆中加一定量聚乙二醇6000，可沉淀C4b-PS，上清部分即为FPS。二、抗凝物质检验（三）蛋白S抗原测定【参考区间】TPS：96.6%±9.8%FPS：100.9%±11.6%二、抗凝物质检验（三）蛋白S抗原测定【临床意义】1.PS缺陷患者易出现血液高凝状态，先天性PS缺陷患者常伴发严重的深静脉血栓栓塞。2.获得性PS缺陷常见肝脏疾病，如急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、VitK缺乏症、急性呼吸窘迫综合征等。口服抗凝药、口服避孕药时，PS降低。妊娠及新生儿PS偏低。二、抗凝物质检验（四）组织因子途径抑制物活性及抗原检测【实验原理】1.组织因子途径抑制物活性（TFPI:A）检测待测血浆与过量的TF/FⅦa和FⅩ作用，剩余的TF/FⅦa水解发色底物，释放出发色基团，其颜色的深浅与血浆中TFPI:A呈负相关。2.组织因子途径抑制物抗原（TFPI:Ag）检测用ELISA双抗体夹心法检测血浆TFPI:Ag含量。二、抗凝物质检验（四）组织因子途径抑制物活性及抗原检测【参考区间】TFPI:A99.96%±5.0%；TFPI:Ag97.5μg/L±26.6μg/L二、抗凝物质检验（四）组织因子途径抑制物活性及抗原检测【临床意义】1.老年人血浆中TFPI含量较高。妊娠时血浆TFPI也增高，但胎儿血浆TFPI含量降低。二、抗凝物质检验（四）组织因子途径抑制物活性及抗原检测【临床意义】2.先天性TFPI缺乏易形成血栓，然而常见的TFPI减少大多数是获得性的。大手术、脓毒血症与DIC时往往血浆中TFPI减少，主要是过度消耗所致。致死性败血症时往往血浆中TFPI增多，可能与广泛性血管内皮受损使之释放增加有关。此外，慢性肾衰竭时血中TFPI也增多。二、抗凝物质检验（五）凝血酶时间测定（TT）及其纠正实验【实验原理】

受检血浆加入“标准化”的凝血酶溶液后，测定其凝固所需的时间为凝血酶时间（TT）。如血浆中纤维蛋白原的量或质有异常或存在循环抗凝血酶类抗凝物质，则凝血时间延长。因甲苯胺蓝可中和肝素和类肝素抗凝物质，故凝血酶时间延长被甲苯胺蓝纠正，可认为存在肝素或类肝素物质。二、抗凝物质检验（五）凝血酶时间测定（TT）及其纠正实验【参考区间】

凝固法：16～18秒，若超过正常对照3秒以上者为异常。加甲苯胺蓝后TT明显缩短，与未加甲苯胺蓝的TT比较相差5s以上，视为纠正。二、抗凝物质检验（五）凝血酶时间测定（TT）及其纠正实验【临床意义】

1.凝血酶时间延长以DIC时纤维蛋白原消耗过多多见，也有部分属于先天性低（无）纤维蛋白原血症、原发性纤溶及肝病病变，也可见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多及FDP增多。二、抗凝物质检验（五）凝血酶时间测定（TT）及其纠正实验【临床意义】

2.凝血酶时间缩短主要见于某些异常蛋白血症或巨球蛋白血症。此外，较多的是技术原因，如标本在4℃环境中放置过久，组织液混入血浆等。二、抗凝物质检验（五）凝血酶时间测定（TT）及其纠正实验【临床意义】

3.TT延长能被纠正血中类肝素物质增多，多见于过敏性休克、严重肝病、肝叶切除、肝移植、DIC，也可见于使用氮芥以及放疗后的患者。4.TT延长不能被纠正为其他类抗凝物质或纤维蛋白原缺陷。二、抗凝物质检验（六）普通肝素和低分子量肝素测定【实验原理】抗凝血酶（AT）可抑制凝血酶及Xa，但在正常情况下，其抑制作用较慢。当肝素与AT结合形成1：1的复合物，该复合物灭活因子Xa的作用大大加强；低分子量肝素对AT和Fxa间反应的催化作用较其对AT和凝血酶间反应的催化更容易，而标准肝素对两者的催化作用相同。二、抗凝物质检验（六）普通肝素和低分子量肝素测定【实验原理】在AT和FXa均过量的反应中，肝素对FXa的抑制速率直接与其浓度成正比，用特异性FXa发色底物法检测剩余FXa的活性，发色强度与肝素浓度呈负相关。二、抗凝物质检验（六）普通肝素和低分子量肝素测定【参考区间】发色底物法：正常人检测血浆肝素为0U/ml。本法检测肝素的范围是0～0.8U/ml。二、抗凝物质检验（六）普通肝素和低分子量肝素测定【临床意义】在过敏性休克、使用氮芥化疗或放疗后、严重肝病或DIC、肝叶切除或肝移植等患者的血浆中肝素样抗凝物亦增多。某些肿瘤细胞可分泌肝素样物质，如肾上腺皮质肿瘤、多发性骨髓瘤等。肝脏损伤导致肝素在肝脏内的降解作用减弱，也可导致肝素样抗凝物增多。二、抗凝物质检验（七）复钙交叉试验【实验原理】延长的复钙时间，如能被1/10量的正常血浆所纠正，表示受检血浆中缺乏凝血因子；如果不能被等量的正常血浆所纠正，表示受检血浆中有抗凝物质。二、抗凝物质检验（七）复钙交叉试验【参考区间】受检血浆与1/10量正常血浆混合，血浆复钙时间不在正常范围内（2.2～3.8分钟），则认为受检血浆中存在异常抗凝物质。【临床意义】血浆中存在异常的抗凝物质，见于反复输血的血友病患者、肝病患者、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎及胰腺疾病等。二、抗凝物质检验（八）凝血因子VIII抑制物测定【实验原理】混合血浆法测定：将受检血浆与已知量的正常人Ⅷ因子血浆混合，温浴一定时间后测定剩余Ⅷ因子的活性，以Bethesda单位来计算抑制物的含量，一个Bethesda单位相当于灭活50%因子Ⅷ活性。二、抗凝物质检验（八）凝血因子VIII抑制物测定【参考区间】阴性【临床意义】以Bethesda单位来计算抑制物的含量，不仅可用于因子VIII抑制物检测，还可用于其他因子（IX、X、XI）抑制物的检测。临床常见于反复输血或因子VIII浓缩制剂的血友病患者，也见于某些自身免疫病患者或妊娠期间。第五节纤维蛋白（原）溶解系统与检验学习目标

掌握纤溶物质检验（3P试验、t-PA、FDP和D-二聚体）原理、注意事项及临床意义；2.熟悉纤维蛋白（原）降解产物的作用。纤维蛋白溶解系统简称纤溶系统；其主要作用是将沉积在血管内外的纤维蛋白溶解，起到修复、祛除和防止血管内由于纤维蛋白沉着(如血栓形成)引起的阻塞作用。纤溶系统功能亢进可引起出血，功能减低则可导致血栓形成，因而纤溶系统具有重要的生理和病理意义。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点1.纤溶酶原激活物（1）组织纤溶酶原激活物(t-PA)是一种由血管内皮细胞合成的单链糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶。在胰腺、肺、子宫、肾上腺、前列腺和甲状腺等组织中含量高。t-PA与纤维蛋白具有很强的亲和力，t-PA激活纤溶酶原主要在纤维蛋白上进行，是体内最强的纤溶酶原激活物。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点1.纤溶酶原激活物（2）尿激酶样纤溶酶原激活物(u-PA)是来源于肾小管上皮细胞和血管内皮细胞的单链糖蛋白，血中含量极低。u-PA有单链和双链二种形式，少量的纤溶酶和激肽释放酶可使单链u-PA裂解成双链u-PA。u-PA激活纤溶过程迅速，不依赖于纤维蛋白。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点2.纤溶酶原(PLG)和纤溶酶(PL)PLG由肝合成的一种单链糖蛋白，以无纤溶活性的酶原形式存在于血液中。纤溶酶原在其激活物t-PA或u-PA作用下转变成有纤溶活性的双链结构丝氨酸蛋白水解酶，它除了能裂解纤维蛋白原和纤维蛋白外，还参与分解凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ和因子Ⅻa等。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点3.纤溶抑制物（1）纤溶酶原激活物抑制物(PAI）能特异性抑制t-PA和u-PA激活纤溶酶原，主要有二种：①纤溶酶原抑制物-1(PAI-1)；②纤溶酶原抑制物-2(PAI-2)。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点3.纤溶抑制物（2）纤溶酶抑制物正常血浆中有多种非特异性纤溶酶抑制物，其中以α2抗纤溶酶(α2-AP)最为重要，它与纤溶酶形成1：1复合物(PAP)使其失去蛋白水解活性。一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点3.纤溶抑制物（2）纤溶酶抑制物一、基础理论（一）纤溶系统的组成及其特点3.纤溶抑制物（3）凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)凝血酶激活的纤溶抑制物是一种血浆蛋白质，以酶原的形式存在。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制纤溶过程是一系列蛋白酶催化的连锁反应，一般分为二个阶段：

1.纤溶酶原被激活为纤溶酶

2.纤溶酶水解纤维蛋白(原)及其他蛋白质一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制1.纤溶酶原激活途径（1）内激活途径：主要指血循环中内源凝血途径中某些因子，如因子Ⅻa、K等能激活纤溶酶原形成纤溶酶。（2）外激活途径：主要指体内合成的某些激活物，如t-PA、u-PA等进入循环，激活纤溶酶原形成纤溶酶。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制1.纤溶酶原激活途径（3）外源激活途径：主要指外界进入体内的某些药物，如链激酶(SK)、尿激酶(UK)等激活纤溶酶原形成纤溶酶，这是溶栓治疗的基础。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制1.纤溶酶原激活途径一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制2.纤维蛋白(原)降解机制（1）纤维蛋白原的降解：纤溶酶首先作用于纤维蛋白原Bβ链，释放出纤维蛋白Bβ1-42肽；又作用于Aα链，释放出其附属物A、B、C、H，即Aα羧基端的四个小片段，剩下的部分称为X片段，然后X片段再依次被纤溶酶裂解出Y、D、E片段。纤溶酶对纤维蛋白原的裂解见于原发性纤溶。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制2.纤维蛋白(原)降解机制（2）可溶性纤维蛋白的降解可溶性纤维蛋白是纤维蛋白原被凝血酶降解释放出肽A(Aα1-16)和肽B(Bβ1-14)后形成的产物。纤溶酶作用于可溶性纤维蛋白后释放出Bβ1-14肽，不含FPA的裂解片段分别用X’、Y’、D’、E’命名。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制2.纤维蛋白(原)降解机制（3）交联纤维蛋白的降解在纤溶酶的作用下交联纤维蛋白除降解出碎片X’、Y’、D’、E’外，还生成D-D二聚体和DD/E、DY/YD、YY/DXD等复合物。一、基础理论（二）纤维蛋白的溶解机制2.纤维蛋白(原)降解机制一、基础理论（三）纤维蛋白（原）降解产物的作用纤溶酶对纤维蛋白和纤维蛋白原的裂解产物统称为纤维蛋白(原)降解产物(FDP)。FDP可与纤维蛋白原竞争凝血酶，阻止纤维蛋白单体(FM)形成，并可与FM结合形成可溶性复合物，抑制FM聚合和交联成不溶性纤维蛋白，发挥抗凝作用。而交联纤维蛋白的裂解产物D二聚体发生在继发性纤溶之后，对于区别原发性与继发性纤溶有较高的价值。一、基础理论（三）纤维蛋白（原）降解产物的作用一、基础理论（三）纤维蛋白（原）降解产物的作用纤溶活性的检测及临床意义

1.优球蛋白溶解时间测定

2.血浆组织纤溶酶原激活物测定

3.血浆纤溶酶原测定

4.血浆组织纤溶酶原激活物抑制物测定

5.血浆a2-抗纤溶酶活性测定

6.血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验二、纤维蛋白溶解系统检验（一）优球蛋白溶解时间测定【实验原理】血浆优球蛋白组分中含纤维蛋白原、纤溶酶原和纤溶酶原激活物等，但不含纤溶酶抑制物。用低离子强度和Ph4.5的溶液沉淀和分离优球蛋白，再溶于缓冲液中，加钙或凝血酶使其凝固，测定凝块完全溶解的时间，即优球蛋白溶解时间。二、纤维蛋白溶解系统检验（一）优球蛋白溶解时间测定【参考区间】

加钙法:129min48s±4min6s加凝血酶法:123±24min二、纤维蛋白溶解系统检验（一）优球蛋白溶解时间测定【临床意义】

ELT缩短（＜70min）表明纤溶活性增强，见于原发性和继发性（DIC）纤溶亢进。但在DIC早期尚未发生继发性纤溶亢进时，或当纤溶极度亢进，纤溶酶绝大部分已被消化时，可为阴性。ELT延长表明纤溶活性减低，见于血栓形成前期和血栓形成性疾病。二、纤维蛋白溶解系统检验(二）血浆组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的测定（ELISA法）【实验原理】

根据双抗体夹心法原理，将纯化的组织纤溶酶原激活物（t-PA）或纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）单克隆抗体包被在反应板上，加入待测样本和标准品，加过氧化物酶标记的t-PA或PAI抗体，再加邻苯二胺（OPD）显色后读取A值，计算出各自的血浆浓度。二、纤维蛋白溶解系统检验(二）血浆组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的测定（ELISA法）【参考区间】

t-PA：1～12μg/LPAI：2～10μg/L二、纤维蛋白溶解系统检验(二）血浆组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的测定（ELISA法）【临床意义】

血浆t-PA的影响因素较多，可随年龄的增加而升高；在剧烈运动，机体应激反应时增高。PAI的释放有明显的昼夜节律性，早晨较高，下午较低。一般在上午8～10时采血较为适宜。二、纤维蛋白溶解系统检验(二）血浆组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的测定（ELISA法）【临床意义】

t-PA增高见于应激反应、剧烈运动、先天性增高以及纤溶亢进时。降低往往见于高凝状态和血栓性疾病、口服避孕药、肥胖症等。PAI增高见于血栓性疾病和高凝状态，减低见于原发性或继发性纤溶症。二、纤维蛋白溶解系统检验(二）血浆组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的测定（ELISA法）【临床意义】

t-PA和PAI的检测不仅是为了了解纤溶系统激活状态，目前在动静脉血栓形成性疾病的诊断、预后和治疗评价中也被广泛应用。二、纤维蛋白溶解系统检验（三）血浆纤溶酶原活性测定【实验原理】免疫扩散法：受检血浆（含抗原）加到含抗纤溶酶原（PLG）血清的琼脂糖扩散板中，自然扩散一定时间后，通过测定抗原抗体反应沉淀弧的直径来计算受检者血浆纤溶酶原（PLG抗原）含量。其直径与PLG含量呈正相关。二、纤维蛋白溶解系统检验（三）血浆纤溶酶原活性测定【实验原理】发色底物法：受检血浆中加链激酶（SK)和发色底物（S-2251)，受检血浆中的PLG在SK的作用下，转变成PL，后者作用于发色底物，释出对硝基苯胺（PNA）而显色。显色的深浅与纤溶酶的水平呈正相关，通过计算求得血浆中PLG的活性。二、纤维蛋白溶解系统检验（三）血浆纤溶酶原活性测定【参考区间】

免疫扩散法：230～340mg/L；发色底物法：75%～150%。二、纤维蛋白溶解系统检验（三）血浆纤溶酶原活性测定【临床意义】1.减低见于先天性纤溶酶原缺乏症，但更常见于纤溶酶原激活物活性增强的情况，如原发性和继发性纤溶亢进、溶栓治疗后、重症肝炎、肝硬化、肝叶切除术、大手术后、肿瘤播散、严重感染等。2.增高见于纤溶活性的降低，如高凝状态和血栓性疾病。二、纤维蛋白溶解系统检验（四）血浆a2-抗纤溶酶活性(α2-AP)测定【实验原理】α2-抗纤溶酶活性（α2-AP:A）发色底物法：受检血浆中加入过量的纤溶酶，使α2-AP与纤溶酶形成复合物，剩余的纤溶酶作用于发色底物（HD-Nva-CHA-Lys-PNA)释出对硝基苯胺（PNA）而显色。显色的深浅与α2-AP呈负相关。α2-抗纤溶酶抗原（α2-AP:Ag）,常用双抗体夹心ELISA检测，也可通过凝胶电泳或免疫比浊法测定。二、纤维蛋白溶解系统检验（四）血浆a2-抗纤溶酶活性(α2-AP)测定【参考区间】

α2-AP:A95.6%±12.8%α2-AP:Ag0.06g～0.10g/L【临床意义】1.增高见于静脉、动脉血栓形成、恶性肿瘤、分娩后等。2.减低见于有肝病、DIC、手术后、先天性α2-AP缺乏症。二、纤维蛋白溶解系统检验（五）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固(3P)试验【实验原理】纤维蛋白原在凝血酶作用下释放出A肽和B肽后转变成纤维蛋白单体(FM)。FM具有自行聚合呈肉眼可见的纤维、絮状或胶冻装的特性。如发生继发性纤溶，存在纤维蛋白降解产物，尤其X’片段可和FM形成可溶性复合物，而硫酸鱼精蛋白具有分离这种复合物的能力，可使FM游离出来，形成肉眼可见的纤维素样物质，称为血浆鱼精蛋白副凝固试验,也称3P试验。二、纤维蛋白溶解系统检验（五）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固(3P)试验【参考区间】阴性。【临床意义】1.阳性见于DIC早期、中期、严重创伤，大手术，咯血、呕血以及久置冰箱的样品。2.DIC晚期和原发性纤溶（因血中无FM）时也表现为阴性，故在区别原发性和继发性纤溶时有一定意义。二、纤维蛋白溶解系统检验（六）血浆纤维蛋白（原）降解产物的检测【实验原理】

胶乳凝集试验（Fi试验）：用特异性抗纤维蛋白（原）D、E片段抗体标记的胶乳颗粒与受检血清混合，如血清中含有纤维蛋白（原）降解产物（FDP），特别是D、E片段，可发生抗原抗体反应，导致胶乳颗粒凝集。二、纤维蛋白溶解系统检验（六）血浆纤维蛋白（原）降解产物的检测【实验原理】

胶乳增强散射比浊法：将FDP抗体包被在胶乳颗粒上，然后与FDP结合，形成FDP抗原抗体复合物的胶乳凝集颗粒，体积增大，根据散射光的变化计算出其含量。二、纤维蛋白溶解系统检验（六）血浆纤维蛋白（原）降解产物的检测【实验原理】

ELISA法：将抗FDP抗体（多克隆或单克隆抗体）包被于固相载体上（酶标反应板），加入待测血清或尿液。如存在FDP即发生抗原抗体反应，形成的复合物再与酶联抗体(过氧化物酶标记的相同抗体）反应，以OPD显色，读取的A值与FDP含量呈正比，参照用标准品制成的标准曲线可算出待测样品的FDP量。二、纤维蛋白溶解系统检验（六）血浆纤维蛋白（原）降解产物的检测【参考区间】

胶乳凝集法阴性；胶乳增强散射比浊法0～5μg/ml；ELISA法血清（28±17）mg/L。二、纤维蛋白溶解系统检验（六）血浆纤维蛋白（原）降解产物的检测【临床意义】

血浆FDP增高常见于DIC、急性静脉血栓、原发性纤溶症、链激酶等溶栓治疗、急性心肌梗死、严重的肺炎、大手术后、恶性肿瘤和休克等。二、纤维蛋白溶解系统检验（七）血浆D-二聚体（D-dimer，DD）测定【实验原理】胶乳凝集法：受检血浆中加入标有D-二聚体（DD）单克隆抗体的胶乳颗粒悬液，若血浆中的D-二聚体含量高于0.5mg/L，则与胶乳颗粒标记的单抗发生凝集反应。二、纤维蛋白溶解系统检验（七）血浆D-二聚体（D-dimer，DD）测定【实验原理】胶乳增强散射比浊法：将D-二聚体抗体包被在乳胶颗粒上，然后与D-二聚体结合，形成D-二聚体抗原抗体复合物的胶乳凝集颗粒，体积增大，根据散射光的变化计算出其含量。二、纤维蛋白溶解系统检验（七）血浆D-二聚体（D-dimer，DD）测定【实验原理】

ELISA法：将D-二聚体单抗包被于酶标反应板，加入受检血浆，血浆中的D-二聚体与包被在反应板中的D-二聚体单抗相结合。然后再加入酶标记的D-二聚体抗体，与被包被的D-二聚体结合。最后加入底物显色，显色的深浅与血浆中的D-二聚体含量呈正相关，所测吸光度值可从标准曲线中计算出血浆中D-二聚体的含量。二、纤维蛋白溶解系统检验（七）血浆D-二聚体（D-dimer，DD）测定【参考区间】

胶乳凝集法阴性；胶乳增强散射比浊法0～256μg/L；ELISA法0～200μg/L。二、纤维蛋白溶解系统检验（七）血浆D-二聚体（D-dimer，DD）测定【临床意义】在继发性纤溶、深静脉血栓、肺栓塞、弥漫性血管内凝血、重症肝炎、肺栓塞等疾病中升高。而在原发性纤溶时不增高，是鉴别原发性纤溶和继发性纤溶的重要指标，也可作为溶栓治疗是否有效的观察指标。陈旧性血栓患者D-二聚体并不升高。第六节血栓形成与检验学习目标

掌握血栓前状态实验室检查的原理、临床应用及评价；了解血栓的分类，血栓的形成机制及血栓对机体的影响。一、基本理论（一）血栓分类1.白色血栓血小板+少量纤维蛋白，动脉内2.混合血栓头+体+尾3.红色血栓RBC+WBC，静脉内4.透明血栓微血栓，微循环内DIC、休克一、基本理论（二）血栓形成机制1.心血管内皮细胞损伤2.血小板数量和活性增高3.血液凝固性增加4.血流状态的改变一、基本理论（三）血栓对机体的影响1.阻塞血管2.栓塞3.心瓣膜变形4.广泛性出血二、血栓前状态检验（一）血浆血栓烷B2检测血小板激活后，膜磷脂花生四烯酸代谢亢进，生成血栓烷A2，后者极不稳定，很快转化为无生物活性的血栓烷B2（TXB2)。少量血小板在体外活化就可使血浆中TXB2含量可反映花生四烯酸的代谢水平，从而反映血小板是否被激活。二、血栓前状态检验（一）血浆血栓烷B2检测【实验原理】用血栓烷B2（TXB2）-牛血清白蛋白包被酶标反应板，加入受检血浆或TXB2标准品和抗TXB2抗体。包被的TXB2与受检血浆中或标准品中TXB2竞争性与抗TXB2抗体结合，包被的TXB2与抗体结合的量与受检血浆中TXB2的含量成负相关。加酶标第二抗体及底物，根据显色程度推算出样品的TXB2的含量。二、血栓前状态检验（一）血浆血栓烷B2检测【参考区间】28.2～124.4ng/L【临床意义】本实验受血小板影响因素较大，因此采血后应立即试验，并避免一些激活或影响血小板活性的药物及物品。二、血栓前状态检验（一）血浆血栓烷B2检测【临床意义】1.TXB2增高见于血栓性疾病和血栓前状态，如动脉粥样硬化、心肌梗死、肺梗死、糖尿病、高脂血症、妊高症、DVT、恶性肿瘤、大手术后等。2.TXB2

减低见于先天性血小板花生四烯酸代谢障碍性疾病或服用阿司匹林、磺吡酮、咪唑及其衍生物等药物后。二、血栓前状态检验（三）血浆凝血酶-抗凝血酶复合物检测,TAT【实验原理】

固相包被的兔抗人凝血酶抗体与受测样品中的凝血酶AT复合物结合，再加入酶标鼠抗人AT与固相上的TAT结合，加入显色底物显色，色泽深浅与TAT含量正相关。【参考区间】ELISA法：1.0～4.1μg/L二、血栓前状态检验（三）血浆凝血酶-抗凝血酶复合物检测,TAT【临床意义】血浆水平在DIC前期即升高，所以TAT可作为DIC及Pre-DIC的诊断指标，其特异性和敏感性达80%～90%。二、血栓前状态检验（三）血浆凝血酶-抗凝血酶复合物检测,TAT【临床意义】1.TAT含量增高代表FXa增高和凝血活性亢进，见于血栓前状态和血栓性疾病，如DIC、急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、深静脉血栓形成、脑梗死、急性白血病等。2.典型DIC时明显升高，抗凝治疗有效后，TAT下降。在急性心肌梗死的患者接受溶栓治疗后，如血浆TAT水平仍高于6μg/L，则有再梗死可能。二、血栓前状态检验（四）血浆纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物检测【实验原理】血浆纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物（PAP）检测：用抗纤溶酶原抗体包被微孔板，加入受检血浆，血浆中纤溶酶原和PAP中纤溶酶原部分与包被抗体结合于固相载体上。加入过氧化物酶标记的抗α2-抗纤溶酶抗体，它只与已结合在包被抗体上的PAP中的α2-抗纤溶酶部分结合。加入邻苯二胺显色，颜色的深浅和样品中的PAP含量呈正相关。二、血栓前状态检验（四）血浆纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物检测【参考区间】0.12～0.7mg/L【临床意义】1.PAP增高见于血栓前状态和血栓性疾病，如急性心肌梗死、脑梗死、脑血栓形成、深静脉血栓形成、肾病综合症等。2.PAP水平的增高与DIC的发展平行，PAP水平的降低与DIC的缓解相关，在DIC的诊断中具有重要的价值。第七节血液流变学及检验学习目标

掌握血液流变学检验的原理、注意事项及临床意义。一、基础理论（一）血液流动性和黏滞性血液流变学是研究血液的流动性和黏滞性、血液中的红细胞和血小板的聚集性、血浆的流动性、血液和血浆的黏滞性等方面的一门分支科学。在血管疾病中有重要意义。血液的流动性和黏滞性是血液的基本物理特性，它决定血液沿着血管不停地流动，以保证人体各器官的血液供应，是各个器官和组织保持正常生理功能的重要因素。

一、基础理论（一）血液流动性和黏滞性血液的流动性和黏滞性发生异常时，将引起血液流动缓慢，使器官和组织缺血、缺氧。严重时，导致血栓形成，从而阻断血流，使器官和组织发生严重缺血、缺氧，继而水肿、变性，甚至坏死。血液流变学的研究，有助于对疾病的病因诊断，以便于利用对血液流变学有影响的药物进行干预，以达到治疗或预防的目的。一、基础理论（二）影响血液黏度的因素1.心脏的泵力2.血管的状态3.血液的状态①血细胞容积；②红细胞的变形性；③红细胞聚集性④血浆黏度。二、血液流变学检验（一）全血黏度测定血液流动时，其内摩擦力阻碍血液的流动，这种阻碍血液流动的内摩擦力就是血液的黏性。度量这种