付费下载
下载本文档
版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领
文档简介
D-氨甲酰水解酶可溶性表达的遗传改造和结构与功能研究的中期报告本研究旨在通过遗传改造和结构与功能研究，提高D-氨甲酰水解酶的可溶性表达，并深入探究其催化机理。本次报告为中期报告，总结了目前已完成和正在进行的工作。一、遗传改造通过基因工程方法，对D-氨甲酰水解酶基因进行改造。首先，构建了载体pET-28a-DAAO，将D-氨甲酰水解酶基因克隆进载体中。其次，进行点突变，设计出4种突变体，分别为DAAO(A117V)、DAAO(G222R)、DAAO(A117V/G222R)和DAAO(A117V/G222R/L301F)，并利用重叠延伸PCR方法进行突变。其中，A117V突变体和G222R突变体分别针对D-氨甲酰水解酶的两个关键位点进行突变，旨在增强其催化效率和稳定性。A117V/G222R双突变体则将两个突变位点组合起来，再加上L301F突变位点，预期能进一步提高产物得率和催化速率。二、可溶性表达通过不同的表达条件和策略，达到提高D-氨甲酰水解酶可溶性表达的目的。目前已成功构建了三种表达菌株，包括E.coliBl21(DE3),E.coliRosetta(DE3)和E.coliArcticExpress(DE3)。同时，参照相关文献，优化了细胞培养条件，例如温度、诱导时间、诱导剂浓度等，以增加可溶性表达量。使用Westernblot和SDS等方法对获得的重组蛋白进行了鉴定和分析。三、结构与功能研究利用X射线晶体学和质谱等技术手段，深入探究D-氨甲酰水解酶的结构和催化机理。目前已成功获得了D-氨甲酰水解酶的晶体，并进行了X射线衍射实验。通过数据处理和晶体学分析，我们确定了D-氨甲酰水解酶的空间结构并绘制了其3D模型。此外，利用质谱技术，鉴定了D-氨甲酰水解酶在催化过程中的重要中间产物和代谢产物，揭示了其催化机理的关键环节和催化途径。综上，本次中期报告展示了我们在D-氨甲酰水解酶可溶性表达和结构与功能研究方面的初步进展。接下来，
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
评论
0/150
提交评论