用盐酸胍裂解细胞教学课件

核酸的制备及基因组文库的构建朱德裕主要内容、核酸制备的基本原理核酸制备的基本方法三、质粒DNA的制备四、基因组DNA的制备五、RMA的制备六、基因组、cDNA文库的构建、核酸制备的基本原理DNA主要存于细胞核中,其它如线粒体和质体等,也含有少量DNARNA主要存于细胞质中,其它如线粒体和核仁等也含有RNA。在生物体中,DNA和RNA都一般以核蛋白的形式存核酸不溶于一般有机溶剂。原核细胞与真核细胞EukaryoteDNAProkaryoteDNAorganizedinasingleNucleuschromosomeNonucleusNomitosisDNAorganizedinmultiplechromosomesinsideanucleusMitoticdivision类别原核细胞真核细胞细胞大小较小无成形的细胞核,有成形的真正的细细胞核无核膜,无核仁,胞核,有核膜、核无染色体仁和染色体有核糖体有核糖体、线粒体等,植物细胞还有细胞质(唯一的细胞器)叶绿体和液泡等(有多种细胞器)生物类群细菌、蓝藻、放线菌植物、动物、真菌原核细胞简示图细菌的基本构造菌毛细胞质原核细胞的主要结构有细胞膜露的DNA双链所构成的拟核。拟拟核核没有与细胞质部分相隔开的界膜(核膜),这是与真核细胞的荚膜主要区别细胞壁细胞膜真核细胞中只有植物细胞有细胞壁核糖体鞭毛原核细胞中的DNA没有组蛋白(histone)与之结合。无有丝分裂(mitosis和减数分裂(meIosIs,DNA复制后,细胞随即分裂为真核细胞简示图真核细胞含有细胞核。核糖体DNA与组蛋白等蛋白质共同组成染色体结构,相胞枝浴酶在核内可看到核仁。真核生物进行有性繁殖,并进行有丝分裂。也有些真核生物的细胞也能进行无丝分裂,如人的体肝脏细胞高尔基体核酸制备的基本原理1、细胞破碎2、将核蛋白解联,即利用解联剂将核蛋白裂解为核酸和蛋白。3、精致纯化核酸注意事项:操作过程应避免核酸的降解,包括化学因素(如过酸过碱),物理因素(如强烈振荡、高温、辐射等),生物酶等、核酸制备的基本方法(一)细胞破碎1、物理方法机械碾碎:对于动物组织(如鼠肝),一般多采用匀浆的方法。组织捣碎器:是一种剧烈的破碎的方法,必须保持低温,时间不宜太长超声波:借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器的有效方法。压榨法:是一种温和、彻底破碎细胞的方法。即用高压迫使几十毫升细胞悬液通过一个小于细胞直径的小孔,使细胞被挤压破碎。2、溶胀和自溶溶胀:在低渗溶液(如低浓度的稀盐溶液中),由于存在渗透压差,溶剂分子将大量进入细胞,致使细胞膜膨胀破裂。自溶:细胞结构在本身所具有的各种水解酶作用下,发生溶解。应用此法要特别小心,防止目的核酸被分解3、化学处理用脂溶性的溶剂(如丙酮、氯仿、甲苯等)或表明活性剂SDS)处理细胞时,可使细胞壁和细胞膜的结构部分溶解,导致细胞破碎。生物酶降解如溶菌酶等生物酶有降解细胞壁的功能。在用此法处理细菌细胞时,先是细胞壁消融,然后是渗透压引起的细胞膜破裂,导致细胞破碎各种组织细胞破碎方法细胞破碎方法应用1匀浆法机体软组织2捣碎法动物韧性组织3研磨法细菌、酵母4超声法细胞混