决明子真伪鉴别研究

1中药材决明子及其伪品国内外研究现状和发展趋势误!未定义书签。2决明子的真伪鉴别研究现状误!未定义书签。2.2决明子正/伪品显微性状鉴别误!未定义书签。误!未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。未定义书签。决明子真伪鉴别研究的水分含量、大黄酚含量、橙黄决明素含量有差异。结论：若样品为决明子药材，则可通过肉眼对其进行鉴定，与伪品望江南子进行区别；若决明子原材料为粉末，则必须通过TLC的橙黄决明素及大黄酚的含量要求，方可得知。广州、桂州”，指的是今天广州与桂林一带。除了国内，决明子还有国外的进口鲜种子有微毒[7]。曾经有两位临床的专家[8][9]就有分别报道过有关误食望江南使鉴别[12]。两者差异主要在于草酸钙簇晶的有无，若药材末中不存在草酸钙簇简单，可作为决明子的药材质量控制方法之一。不江南子不含橙黄决明素成分，所以可以用橙黄决明素为指地、不同炮制方式、不同品种的决明子药材，同对决明子药材的伪品进行收集总共收集样品15批，其中正品13批，伪品2批。两批伪品望江南子分别由顺老提供以及网上购买。13批正品中，分为决明子及小决明两个品种，小决明林样品2批次，无限极样品3批次，康美样品2批次，三只松鼠2批次，顺老提供的样品1批次。炒决明子为同仁堂样品2批次。本次收集的决明子样品见表1及图1-1至1-14。表1决明子、小决明子及伪品望江南子样品信息编号产地时间备注S1决明子广东采芝林图1-1东采芝林图1-2河北无限极无限极无限极康美康美三只松鼠三只松鼠顺庆生教授提供顺庆生教授提供图1-11顺庆生教授提供同仁堂2017/10/12图1-14安徽仁堂图1-14安徽仁堂7图1-1决明子(广东-采芝林)图1-2决明子(广东-采芝林)图1-3决明子(河北-无限极)图1-4决明子(安徽-无限极) 图1-5决明子(河北-无限极)图1-6决明子(安徽-康美)图1-7决明子(安徽-康美)图1-8决明子(安徽-三只松鼠)图1-9决明子(安徽-三只松鼠)图1-10决明子(上海-顺庆生教授提供)图1-11望江南子(上海-顺庆生教授提供)图1-12小决明子(上海-顺庆生教授提供)图1-13炒决明子(安徽-同仁堂)图1-14炒决明子(安徽-同仁堂)棱线图2-1决明子外观性状特征图2-2望江南子外观性状特征表2决明子与望江南子外观性状汇总表形状种皮薄，子叶2,黄色，呈S种皮薄，子叶2,黄色，不呈S形折曲气味粉末显微特征如下图3-1与图3-2。1.栅栏细胞(a.表面观b.侧面观);2.支持细胞(a.表面观b.侧面观);3.角质层;4.簇晶3.角质层;4.簇晶图3-2望江南子显微特征图品种栅状细胞侧面观支持细胞顶面观角质层碎片晶淡黄色，侧面观细胞一观呈类圆形，直径厚晶众多，列呈长方形，排列稍15-24μm,可见两个11-19μm。多存在于不整齐，长42-55μm,同心圆圈；侧面观呈薄壁细胞中，直径辉带两条；表面观类多20-30μm,宽望江南种皮栅状细胞无色或种皮支持细胞表面淡黄色，侧面观细胞一观呈类圆形，直径厚无列呈长方形，排列稍不整齐，长60-80μm,壁较厚，光辉带两条；表面观类多角形，壁稍15-24μm,可见两个11-19μm。同心圆圈，内圆多呈红棕色；侧面观呈哑铃状或葫芦状，长20-30μm,宽决明子与望江南子的粉末显微特征存在差异，差异主要在于草酸钙簇晶的有无，若药材粉末中不存在草酸钙簇晶，则可推测其粉末并非决明子，决明子粉末中富含草酸钙簇晶，而两者在栅状细胞及支持细胞形态上区别较小，因此粉末显微特征可作为判别决明子真伪的辅助手段。4决明子药材及其伪品TLC鉴定研究对不同产地、炮制方式、来源的决明子及小决明，伪品望江南子进行TLC鉴定，区分决明子药材及其伪品。4.1实验材料、仪器与试剂材料来源药材见表1大黄酚中国食品药品检定研究院，批号：110796-201621橙黄决明素中国食品药品检定研究院，批号：111900-201605决明子对照品中国食品药品检定研究院，批号：121011-201506仪器来源超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司水浴锅TAISITE公司分析天平赛多利斯科学仪器北京有限公司薄层色谱硅胶H薄层板烟台市化学工业研究所试剂来源甲醇天津市致远化学试剂有限公司，批号：201711324盐酸天津市致远化学试剂有限公司，批号：201711839乙醚天津市致远化学试剂有限公司，批号：201711125三氯甲烷天津市致远化学试剂有限公司，批号：201711034乙酸乙酯天津市致远化学试剂有限公司，批号：2017110574.2实验方法4.2.1供试品的制备按照2015版《中国药典》决明子项下的薄层内容，对所收集的样品进行提取，来源相同的样品选取其中1个批次进行提取，方法如下：次，每次20ml30分钟另取橙黄决明素、大黄酚对照品，加入无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)制成1mL含对照品1mg,作为对照品溶液。4.2.3实验方法以石油醚(30～60℃)-丙酮(2:1)为展开剂，先将混合粉红色(大黄耐)。如图4-3所示，通过薄层色谱图可见，各决明子正品样品斑点清晰，无拖尾现象；通过对比对照品薄层图谱发现，决明子正品样品(3至9号，11号)在相望江南子(10号)只在大黄酚标准品相应位置上有橙黄色斑点，并不含有橙黄(上海);6.决明子(河北);7.决明子(上海);8.决明子(安徽);9.决明子(广东);10.望江南子(上海);11.对照药材在正品决明子样品中，3号至7号及11号五个样品的大黄酚斑点清晰明亮，而8号、9号两个样品大黄酚斑点较暗，表明其大黄酚含量较前者低。而通过对比不同样品的橙黄决明素斑点可发现，4号至9号、11号样品斑点清晰，颜色较深，而3号样品则斑点颜色较浅。通过对比发现，不同产地来源样品的大黄酚及橙黄决明素斑点亮度不同，下一步通过高效液相色谱法对此两种成分进行含量测定，以期找出其中规律。版《中国药典》决明子项下条件进行含量测定，根据含量测定结果，区分决明子及其伪品望江南子，并通过含量测定，对不同产地、炮制方式及批次的决明子，小决明子根据《中国药典》中所规定的指标性成分含量进行测定，对比其品质优5.1实验材料与试剂乙腈(德国默克公司);其余实验材料、仪器、试剂同表4-1、表4-2、表5.2实验方法5.2.1样品水分含量的测定取决明子药材，使用粉碎机进行粉碎处理，并过三号筛，得到决明子粉末，取粉末适量，在热重分析仪中对其水分含量进行测定；5.2.2对照品的配置精密称取取大黄酚、橙黄决明素对照品3.0及2.0mg,定容至10mL容量瓶中，充分溶解，摇匀，配成300及200μg/mL的对照品准备液，吸取对照品准备液1mL,定容至10mL容量瓶中，将大黄酚及橙黄决明素对照品稀释至30及5.2.3供试品溶液的配置取本品粉末(过三号筛)约0.5g,加稀盐酸30ml置水精密量取续滤液25ml取4次，每次30ml残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶不低于3000。表5-1液相色谱条件时间流动相(A)流动相(B)表5-2各样品的水分含量样品来源水分含量(%)采芝林1采芝林2决明子康美1康美2三只松鼠1三只松鼠2同仁堂1望江南子1望江南子2无限极1无限极2无限极3小决明对照药材含量测定结果如表5-3所示，结果表明，所有样品均含有橙黄决明素与大黄酚两种成分，而两个批次的伪品望江南子则不含或含量及其低。在所有决明子及小决明子样品中，橙黄决明素的含量范围为0.824~2.432mg/g,含量较高的样品批次为采芝林及三只松鼠的样品，其次是无限极的决明子样品，含量较低的样品为康美及同仁堂，由顺庆生教授所收集的决明子与小决明子含量最低。在所有的决明子与小决明子样品中，大黄酚含量范围为0.599~8.004mg/g之间，其中，康美的样品大黄酚含量最高，其次则是无限极及同仁堂的样品，顺庆生教授收集的决明子与小决明子大黄酚含量均较高，而采芝林及三只松鼠的样品大黄酚含量则较低。所有的正品样品橙黄决明素的含量均达到药典要求的标准，而采芝林、三只松鼠及对照药材的大黄酚含量未达标。表5-3含量测定结果样品来源橙黄决明素(mg/g)大黄酚(mg/g)采芝林1采芝林2决明子康美1康美2三只松鼠1三只松鼠2望江南子1望江南子2无限极1无限极3小决明对照药材5.3.3所有样品液相色谱图1.橙黄决明素；2.对照药材；3.小决明子(上海);4.决明子(安徽-无限极);5.决明子(河北-无限极);6.决明子(河北-无限极);7.望江南子(上海);8.望江南子(网上购买);9.炒决明(安徽-同仁堂);10.炒决明(安徽-同仁堂);11.决明子(安徽-三只松鼠);12.决明子(安徽-三只松鼠