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免疫共沉淀(co|P)研究蛋白质间相互作用的技术05级生化专业:毛赟赟免疫共沉淀(co|P)1蛋白质相互作用的类型有牢固型互作和暂时型互作两种。互作力既可以强,也可以弱牢固型互作以多亚基蛋白复合体常见,最好通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)、Pull-down或Far-western法研究令暂时型蛋白质相互作用,被认为是涉及到胞内大部分生物过程,包括蛋白修饰、转运、折叠、信号转导和细胞周期等,属于开/闭性质,可以通过交联或标记转移法来研究。胞内研究蛋白质互作的方法除上述方法外,还有蛋白芯片、核磁共振、质谱、Ⅹ射线晶体衍射等蛋白质相互作用的类型有牢固型互作和暂时型互作21Co-P的原理当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质一蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质Ⅹ的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。1Co-P的原理3裂解细胞和免疫共沉淀蛋白质X复合物1复合物2复合物3免疫共沉淀检测蛋白质的原理和常见问题裂解细胞和免疫共沉淀蛋白质X42方法1)收获培养的细胞(1×107-1×108)冷PBS洗涤2次细胞裂解液裂解细胞,冰浴30min冷2)将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上4℃以最大速度离心15min3)收集上清(约30m),并加入30μg的适当抗体,4℃摇动免疫沉淀物1h2方法5免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件6免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件7免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件8免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件9免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件10免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件11免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件12免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件13免疫共沉淀研究蛋白质间相互作用技术课件14免疫

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