细菌分解葡萄糖,乳糖产酸产气使斜面与底层均呈黄色酚红

1授课专业：医学检验学时：2学时试验十二 大肠埃希菌、产气杆菌检验一、试验目的E.coli、产气杆菌的分别培育与鉴定方法；据。二、试验器材与试剂菌种：一般E.coli、产气杆菌培育基：SS,中国兰,KIA,MIU,蛋白胨,葡萄糖蛋白胨水,枸橼酸盐琼脂斜面,culturemedia1%玫瑰红酸酒，1%溴麝香草酚兰酒精溶液靛基质试剂甲基红试剂 VP试剂〔40%KOH肌酸溶液氧化酶试剂与纸片，3%过氧化氢，革兰染液，擦镜纸，电吹风，显微镜，恒温箱三、试验内容㈠标本的采集：血液，脓汁，胆汁，脑脊液，痰，分泌物，水等。㈡检验程序E.coli、产气杆菌接种枸橼酸盐琼脂斜面，硝酸盐culturemedia37℃，24hVP试验甲基红试验GS报告结果㈢培育基的制备〔Productingculturemedia〕:SSculturemedia(Samonella-Shigella培育基)〔重点〕⑴成分：①养分物：示胨，蛋白质，牛肉膏②抑制物：煌绿，胆盐，硫代硫酸钠，枸橼酸钠〔抑制非病原菌生长〕③促进剂：胆〔碱〕盐〔促进病原菌生长〕④鉴别用糖：乳糖⑤指示剂：中性红〔酸红碱黄〕⑵原理：H2s的菌落中心和中性红的毒性⑶用途：culturemedia〔附：现在Ssagar一PH值，无需灭菌〕⒉中国兰culturemediaculturemedia⑴成分：一般ager 100ml乳糖〔20%水溶液〕 1%中国兰水溶液 2ml1%玫瑰红酸乙醇液 1mlculturemedia呈淡红色⑵原理：瑰红酸的变色范围如下：指示剂 酸性 碱性中国红 蓝色 玫瑰红酸 黄色 红色⑶用途：分别肠道致病菌用⒊KIA culturemedi〔双糖铁培育基〔重点、难点〕⑴成分：蛋白胨 FeSO4 NaCl 硫代硫酸钠葡萄糖〔1g〕agar 乳糖〔10g〕 0.4%酚红牛肉膏，水〔附：现一般使用成品，0.7kg15min高压灭菌。制成斜面培育基〕⑵原理：①葡萄糖，乳糖的分解：〔酚红指示剂变色范围：酸黄碱红，具有气泡。假设细菌分解葡萄糖而不分解乳糖，分解乳糖产酸使culturemediaPH〔葡萄葡萄糖所生成的酸一时不被氧化而保持黄色。H2SculturemediaFeSO4作用形成黑色的沉淀。FeSO4被氧化。(3)用途:鉴别肠道杆菌用⒋MIUculturemedia动力-靛基质-尿素酶培育基)(160页)蛋白胨10g agar 2g 水1000mlNacl 5g KH2PO4 2g 葡萄糖1g20%尿素100ml 0.4%酚红水溶液 2mlPH7.0尿素与酚红高压灭菌后参加(2)原理此培育基制成半固体,可观看细菌的动力,蛋白胨中有色氨酸,可做靛基质试验(原理后述),,使酚红指示剂显红色。⑶用途同时可观看细菌动力,靛基质的产生,细菌分解尿素的活性⒌硝酸盐culturemedia⑴成分蛋白胨:1克 硝酸钾:0.1克水:100ml PH:7.4-7.6⑵原理：α⑶用途:硝酸盐复原试验用⒍蛋白胨水培育基⑴成分蛋白胨(胰蛋白胨) 20克Nacl 5g蒸馏水 1000mlPH7.4⑵原理,后有玫瑰红化合物生成(3)用途：靛基质试验用(indole)culturemedia⑴成分Nacl 5g agar 20g 蒸馏水1000mlMgSO4 0.2g NH4H2PO4 1g KH2PO4 1g枸橼酸钠5g1%溴麝香草酚兰酒精溶液:10mlPH6.8(agar为枸橼酸盐液体培育基)culturemedia⑵原理：枸橼酸盐培育基中枸橼酸钠为碳的唯一来源，而NHHPO

42 4使培育基变碱，指示剂有绿色变为深兰色，阴性不生长、不变色⑶用途枸橼酸盐利用试验用〔citrate〕⒏葡萄糖蛋白胨水培育基⑴成分:蛋白胨0.5g葡萄糖0.5gKHPO2 40.5g蒸馏水100mlPH7.2⑵原理甲基红试验：PH4.4阳性代表菌株:大肠杆菌VP被氧化为二乙酰，二乙酰与培育基蛋白胨中精AA等所含的胍基化合物结合，生成红色化合物，在培育基中参加胍基化合物如，肌酸、肌肝等，可加速此反响。阳性代表菌株:产气杆菌⑶用途甲基红试验,VP试验用四、试验安排㈠制备培育基，贴上标签第一台：SS平板：16个， 葡萄糖蛋白胨水：32支其次台：中国兰平板:16个 蛋白胨水： 16支枸橼酸盐琼脂斜面：16支第三台：KIA：16支 MIU：16支硝酸盐：16支㈡接种安排12支，蛋白胨水、枸橼酸盐琼脂斜面、KIA、MIU18种培育基。⒉四人一大组，2人一小组分别接种大肠杆菌和产气杆菌。⒊KIA〔示教〕蛇形划线即可。五、试验结果㈠菌落观看：⒈SS平板：同时与胆盐结合成胆酸而发生沉淀，故菌落中心混浊〕大肠杆菌：中等大小，圆形，凸起，边缘整齐，光滑，潮湿不透亮的红色菌落产气杆菌：同大肠杆菌⒉中国兰平板：㈡生化反响：KIA MIU斜面 底层 产气 硫化氢MUAA+/-— +—AA+/-— +—-IMVPC大肠杆菌：++——产气杆菌：——++㈢形态观看GS：革兰阴性，中等大小杆菌，两端钝圆，多呈单个分散存在六、试验报告SS，中国兰平板上的菌落特征，革兰染色结果及各种生化反响结果。七、试验预备：SS培育基：一般培育基：15ml/2人15ml/2人KIA：3ml/2人MIU：2ml/2人蛋白胨：2ml/2人葡萄糖蛋白胨：2ml/人枸橼酸盐琼脂：3ml/2人硝酸盐培育基：2ml/2人1%中国兰水溶液：2瓶1%玫瑰红酸酒：2瓶20%乳糖水溶液：2瓶20%葡萄糖水溶液：2瓶20%尿素：2瓶0.4%酚红水溶液：2瓶1%溴麝香草酚兰酒精溶液：2瓶中号平板：1个/人中号试管：1支/人小号试管：5支/2/人5ml无菌吸管：1筒/教室1ml无菌吸管：1筒/教室斜面板: 2个/教室靛基质试剂： 3瓶/教室甲基红试剂： 3瓶/教室VP试剂〔40%KOH肌酸溶液〕3瓶/教室氧化酶试剂与纸片：2瓶/教室3%过氧化氢： 3管/教室玻片： 2张/人硝酸盐复原试剂： 1套/教室镊子： 3把/教室八、试验总结：KOH502小时，或37440%KOH肌酸溶液的量可以多一些，水浴的结果更好观看。进一部强调革兰染色的操作。详述各种生化试验的原理。附一甲基红试剂的配臵甲基红 0.02g95%酒精 60ml蒸馏水 40ml将甲基