抗菌药物敏感试验标准操作规程

抗菌药物敏感试验标准操作规程肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程……235假单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程……238不动杆菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程…………………240嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程…………242洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程…………244葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程…………………246肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程……249链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程……251超广谱β-内酰胺酶测定标准操作规程………………253深部真菌药物敏感试验标准操作规程…………………256XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05111版本：20140601生效日期：20140615共3页1．目的规范肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于肠杆菌科细菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。3.1现行版本的CLSIM02和M100对肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2细菌耐药监控网每年发布的监控要求。3.3本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。4．质控用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。5．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺，标准比浊管或比浊仪。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-45.表5-45肠杆菌科细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感中介耐药氨苄西林（10µg）≥1714~16≤13参见结果解释哌拉西林（100µg）≥2118~20≤17氨苄西林/舒巴坦（10/10µg）≥1512~14≤11哌拉西林/他唑巴坦（100/10µg）≥2118~20≤17头孢唑林（30µg）≥1815~17≤14头孢克洛（30µg）≥1815~17≤14头孢呋辛（30µg）≥1815~17≤14头孢噻肟（30µg）≥2315~22≤14参见结果解释头孢他啶（30µg）≥1815~17≤14参见结果解释头孢吡肟（30µg）≥1815~17≤14头孢他啶/克拉维酸（30/10µg）参见结果解释头孢噻肟/克拉维酸（30/10µg）参见结果解释亚胺培南（10µg）≥1614~15≤13参见结果解释美罗培南（10µg）≥1614~15≤13参见结果解释阿米卡星（30µg）≥1715~16≤14参见结果解释庆大霉素（10µg）≥1513~14≤12参见结果解释环丙沙星（5µg）≥2116~20≤15参见结果解释左氧氟沙星（5µg）≥1714~16≤13参见结果解释复方新诺明（1.25/23.75µg）≥1611~15≤10参见结果解释呋喃妥因（300µg）≥1715~16≤14头孢哌酮/舒巴坦（75/75µg）≥2116~20≤158．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。变形杆菌属细菌可蔓延生长到某些抗菌药物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直径时可忽略抑菌圈中薄的蔓延生长区域。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。8.2沙门菌属和志贺菌属的细菌对一代、二代头孢菌素及头霉素体外试验敏感，但临床治疗无效，因此不应报告敏感。8.3肠杆菌属，枸橼酸杆菌属和沙雷菌属的细菌在使用三代头孢菌素治疗的过程中会产生耐药性，因此原本敏感的菌株可能会在使用抗菌药物治疗3~4日时产生耐药性，因此重复进行药物敏感试验是必要的。9．结果分析9.1分离自粪便标本的志贺菌属和沙门菌属的细菌仅需进行氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物及复方新诺明的药物敏感试验，如从肠道外标本中分离到这些菌株，还需增加氯霉素和1种三代头孢菌素的药物敏感试验。9.2对于脑脊液中分离到的肠杆菌科细菌，必须进行头孢他啶和头孢噻肟的药物敏感试验，以代替头孢噻肟和头孢唑林的药物敏感试验。9.3对于沙门菌属和志贺菌属的细菌而言，氨基糖苷类抗菌药物可能在体外表现有抗菌活性，但在临床上无抗感染作用，所以这些细菌不能报告对氨基糖苷类抗菌药物敏感。9.4肠道外沙门菌感染的病人所分离的沙门菌属细菌如对萘啶酸耐药，而对氟喹诺酮类敏感，在临床使用氟喹诺酮类时可能会治疗失败或对抗感染治疗反应迟缓。因此对肠道外感染的沙门菌属细菌需要其对萘啶酸的耐药性。如在临床上分离到这种细菌，应通知临床医师避免使用氟喹诺酮类药物。9.5有关产ESBL大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌的筛选和确证试验参见CLSI-M100-S19中的附件A。9.6有关碳青霉稀酶肠杆菌科细菌的筛选和确证试验参见CLSIM100-S19中的附件G。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书假单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05112版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范假单胞菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于是假单胞菌属细菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。3.1现行版本的CLSIM02和M100对假单胞属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2细菌耐药监控网每年发布的监控要求。3.3本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。5．试验材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺、标准比浊管或比浊仪。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-46.表5-46假单胞菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感中介耐药哌拉西林（100µg）≥18≤17参见结果解释哌拉西林/他唑巴坦（100/10µg）≥18≤17头孢他啶（30µg）≥1815~17≤14头孢哌酮（75µg）≥2116~20≤15头孢吡肟（30µg）≥1815~17≤15亚胺培南（10µg）≥1814~15≤15美罗培南（10µg）≥1814~15≤15氨曲南（30µg）≥1816~21≤15阿米卡星（30µg）≥1815~16≤15参见结果解释庆大霉素（10µg）≥1813~14≤15参见结果解释环丙沙星（5µg）≥1816~20≤15参见结果解释多粘菌素（300U）≥18≤15头孢哌酮/舒巴坦（75/75µg）≥1816~20≤158．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。8.2分离自囊性纤维化病人的铜绿假单胞菌的纸片扩散法药敏试验结果可靠，但药敏平板一定要孵育24小时方可报告。8.3铜绿假单胞菌在抗感染治疗期间对药物会产生耐药性，因此初分离到的敏感菌在抗感染治疗3~4日后应重复进行药物敏感试验。9．结果解释对青霉素类药物，敏感的试验结果提示在临床治疗铜绿假单胞菌严重感染时应使用高剂量的治疗方案。单剂治疗可能会失败，这时应考虑联合使用其他菌株对其敏感的抗感染药物，如氟喹诺酮类或氨基糖苷类。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书不动杆菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05113版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范不动杆菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于不动杆菌属细菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。现行版本的CLSLM02和M100对假单胞属细菌纸片扩散药物敏感试验的要求。3.2细菌耐药监控网每年发布的监控要求。3.3本单位上一年度不动杆菌属细菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。5．试验材料和仪器M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-47.表5-47不动杆菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感（S）中介（I）耐药（R）哌拉西林（100µg） ≥2118~20≤17哌拉西林/他唑巴坦（100/10µg）≥2118~20≤17头孢他啶（30µg）≥1815~17≤14头孢噻肟（30µg）≥2315~22≤14头孢吡肟（30µg）≥1815~17≤14亚胺培南（10µg）≥1614~15≤13美罗培南（10µg）≥1614~15≤13阿米卡星（30µg）≥1715~16≤14庆大霉素（10µg）≥1513~14≤13环丙沙星（5µg）≥2116~20≤15头孢哌酮/钠舒巴坦（75/75µg）≥2116~20≤158．注意事项抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05114版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于是嗜麦芽窄食单胞菌。3．选药原则3.1现行版本的CLSIM02和M100对假单胞属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。3.3本单位上一年度嗜麦芽窄食单胞菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。5．试验材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-48.表5-48嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感中介耐药米诺环素（30µg）≥1915~18≤14左氧氟沙星（5µg）≥1914~16≤13复方新诺明（1.25/23.75µg）≥1911~15≤10头孢哌酮/舒巴坦（75/75µg）≥1916~20≤158．注意事项抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05115版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于是洋葱伯克霍尔德菌。3．选药原则3.1现行版本的CLSIM02和M100对假单胞属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。3.3本单位上一年度洋葱伯克霍尔德菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。5．试验材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-49.表5-49洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感中介耐药头孢他啶（30µg）≥2118~20≤17美罗培南（10µg）≥2016~19≤15米诺环素（30µg）≥1915~18≤14复方新诺明（1.25/23.75µg）≥1611~15≤10头孢哌酮/舒巴坦（75/75µg）≥2116~20≤158．注意事项抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006（倪语星韩立中）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05116版本：20140601生效日期：20140615共3页1．目的规范葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于葡萄球菌属的细菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。3.1现行版本的CLSIM02和M100对葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。3.3本单位上一年度葡萄球菌属细菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。5．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺。6．操作步骤根据CLSIM2-A10和M100-S19制定本操作步骤。6.1菌液制备从孵育了18~24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用无菌生理盐水制成悬液作为接种物，将浊度调整至0.5麦氏标准。应在接种物制备后15分钟内接种M-H琼脂平板。用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。6.2接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥3~5分钟（不要超过15分钟），然后用纸片分配器将纸片放入琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各纸片中心相距应大于24mm，通常150mm平板至多放置12个纸片，90~100mm平板至多放置6个纸片。由于某些药物在纸片放入琼脂平板后几乎立即扩散，所以一旦纸片放入后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的另一个位置。6.3应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35℃孵箱，若超过15分钟将使纸片中的抗菌药物提早扩散。非苛养菌的药敏解释性标准是建立在这些菌株在空气中孵育的基础上，一些药物（如氨基糖苷类、大环内酯类和四环素）的抑菌圈直径受CO2的影响有较大的改变，所以本菌属细菌不能孵育在CO2孵箱。7．判断标准见表5-50.表5-50葡萄球菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感中介耐药青霉素（10U）≥29≤28参见结果解释9.1、9.3氨苄西林/舒巴坦（10/10µg）≥1512~14≤11参见结果解释9.3头孢唑林（30µg）≥1815~17≤14参见结果解释9.3头孢西丁（30µg）≥22≤21金黄色葡萄球菌和邓葡萄球菌，参见结果解释9.2、9.3≥25≤24路邓葡萄球菌以外的凝固酶阴性的葡萄球菌，参见结果解释9.2、9.3红霉素（15µg）≥2314~22≤13克林霉素（2µg）≥2115~20≤14参见结果解释9.4替考拉宁（30µg）≥1411~13≤10参见结果解释9.5庆大霉素（10µg）≥1513~14≤12左氧氟沙星（5µg）≥1914~18≤15复方新诺明（1.25/23.75µg）≥1611~15≤10利福平（5µg）≥2017~19≤16参见结果解释9.6利奈唑胺（30µg）≥21参见结果解释9.78．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。但利奈唑胺和苯唑西林纸片应使用透射光源进行观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显抑制处量取抑菌圈直径。如在苯唑西林、利奈唑胺抑菌圈内任何可辨别的菌落生长，则报告该菌株对相应抗菌药耐药。8.2在直接从血平板上挑取菌落配制细菌悬液时需注意，来自血琼脂培养基的菌落可能带有足够的甲氧苄啶或磺胺拮抗物，因此细菌可在甲氧苄啶/磺胺甲噁唑抑菌圈内部沿着敏感菌株的周围产生模糊生长。8.3MRS检测的要点提示：用30µg头孢西丁纸片检测MRS；用直接菌落悬液（DCS）接种法（而不是生长法）;在33~35℃（不超过35℃）、空气中孵育，金黄色葡萄球菌18小时，凝固酶阴性葡萄球菌24小时；用反射光仔细查看抑菌圈，如有任何小菌落或薄膜出现均报告耐药；如果怀疑可能为MRSA,需用OXA-Nacl筛选试验确认，培养基中必须加Nacl（2%W/V）；MRS必须报告对所有头孢类和其他β-内酰胺类抗菌药物均耐药，并提示可能对氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素和四环素等抗菌药物多重耐药；携带mecA基因，或产生PBP2a的葡萄球菌菌株，必须报告为MRS.9．结果分析9.1对于青霉素抑菌圈直径≥29mm的菌株，需要检测该菌株是否产诱导性β-内酰胺酶，非产酶菌株才可报告为敏感，见产色素头孢菌素试验标准操作规程。9.2头孢西丁纸片代替苯唑西林纸片用于试验，根据头孢西丁的试验结果报告苯唑西林的敏感、中介或耐药。9.3青霉素敏感的菌株对所有青霉素类、β-内酰胺类/β-内酰胺抑制剂合剂、头孢菌素、碳青霉稀类敏感；青霉素耐药且苯唑西林敏感的菌株对于青霉素酶不稳定的青霉素耐药，但对青霉素酶稳定的青霉素类、β-内酰胺类/β-内酰胺抑制剂合剂、相关的头孢菌素、碳青霉稀类仍然敏感；对苯唑西林耐药的菌株应报告对所有的β-内酰胺类耐药。9.4红霉素耐药，克林霉素敏感的菌株应检测菌株对克林霉素的诱导耐药性，对克林霉素的诱导耐药性可通过“D”试验进行确认，即将红霉素和克林霉素纸片间隔15~26mm，35℃孵育16~18小时观察结果，如克林霉素抑菌圈在朝向红霉素纸片的方向出现“D”型变化，该菌株为对克林霉素诱导耐药的菌株，该菌株对克林霉素的药敏结果应修正为耐药。9.5葡萄球菌属对糖肽类抗菌药的敏感试验要点提示：纸片扩散试验不能区分对万古霉素敏感菌株（MIC0.5~2µg/ml）与敏感性下降的菌株（MIC4~8µg/ml）；须仔细检查MRSA对万古霉素的MIC；可用与肠球菌同样的万古霉素琼脂做筛选试验，在35℃孵育24小时，并同时用阴性质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC29213作对照，用VanC型VRE做阳性对照。阳性结果需用MIC试验确认对VAN的MIC；如出现对万古霉素敏感性下降的菌株（MIC≥4µg/ml），应该重复鉴定和药敏试验，并保留菌种，送参考实验室确认；如果实验室用自动分析仪做万古霉素的敏感试验，必须加做CLSI推荐的BHI-万古霉素（6µg/ml）琼脂筛选试验，或用CLSI参考方法或E试验测定MIC；替考拉宁纸片扩散试验折点对于将替考拉宁敏感菌株从替考拉宁耐药或中介的菌株中鉴别出来的能力尚待进一步的评估。9.6利福平不能单独用于抗感染治疗。9.7利奈唑胺纸片的抑菌圈应用透视光量取，如出现利奈唑胺不敏感的菌株，应用MIC法进行确认。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05117版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于肠球菌属的细菌。3．选药原则3.1现行版本的CLSIM02和M100对肠球菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。3.3本单位上一年度肠球菌属细菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。5．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺、标准比浊管或比浊仪。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-51.表5-51肠球菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感（S）中介(I)耐药(R)氨苄西林（10µg）≥17≤16参见结果解释9.1、9.2万古霉素（30µg）≥1715~16≤14参见结果解释9.3替考拉宁（30µg）≥1411~13≤10庆大霉素（120µg）≥106参见结果解释9.4、9.5左氧氟沙星（5µg）≥1714~16≤13呋喃妥因（300µg）≥1715~16≤14利奈唑胺（30µg）≥2321~22≤20磷霉素（200µg）≥2113~15≤12氯霉素（30µg）≥1813~17≤128．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。但万古霉素的抑菌圈应该用透视光源量取。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。如在抑菌圈内任何可辨别的菌落生长，则报告该菌株对万古霉素耐药。8.2对肠球菌属细菌而言，头孢菌素、氨基糖苷类（高浓度除外）、克林霉素和复方新诺明体外药敏试验结果可能敏感，但临床治疗无效，因此不应报告为敏感。9．结果解释9.1氨苄西林的药物敏感试验结果可代表细菌对氨苄西林和阿莫西林的敏感性。在非产酶的肠球菌中，氨苄西林敏感提示菌株对阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦敏感。9.2纸片扩散法和稀释法均无法准确判断菌株是否由于产β-内酰胺酶而引起对氨苄西林和青霉素的耐药性，因此对于从血液和脑脊液分离的菌株需要用头孢噻吩进行检测菌株是否产β-内酰胺酶，见产色素头孢菌素试验标准操作规程。9.3在进行肠球菌的万古霉素药物敏感试验时，药敏平板孵育要足24小时，须用透视光源量取抑菌圈直径，对于万古霉素中介的肠球菌应用MIC进行检测，有关耐万古霉素肠球菌的检测参见《万古霉素肠球菌筛选试验标准操作规程》。9.4氨苄西林、青霉素或万古霉素与一种氨基糖苷类抗菌药需要先进行菌株对高浓度氨基糖苷类的药物敏感试验（庆大霉素和链霉素），其他氨基糖苷类抗菌药的效果并不比这两种更好，因此无需检测。9.5敏感提示可以与细胞壁活性的抗菌药（如氨苄西林、青霉素和万古霉素等）抗菌药联合使用，7~9mm为不确定，应进行琼脂稀释法或肉汤稀释法进行确认，耐药表明不能与细胞壁活性抗菌联合使用。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006（倪语星韩立中）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-05118版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于链球菌属的细菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。3.1现行版本的CLSIM02和M100对链球菌属纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。3.3本单位上一年度链球菌属细菌耐药监控数据。4．质控纸片药敏试验应使用肺炎链球菌ATCC49619进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。5．材料和仪器加5%羊血的MHA培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-52.表5-52葡萄球菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感（S）中介（I）耐药（R）青霉素（10U）≥24参见结果解释9.1头孢曲松（30µg）≥24红霉素（15µg）≥2116~20≤15参见结果解释9.29.3克林霉素（2µg）≥1916~18≤15参见结果解释9.29.3万古霉素（30µg）≥17左氧氟沙星（5µg）≥1714~16≤138．注意事项抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。量取时应打开药敏平板盖子，用反射光源，用肉眼观测，从上侧测量抑菌圈直径。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。9．结果解释9.1对青霉素敏感的链球菌菌株可以认为对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、头孢克洛、头孢唑林、头孢迪尼、头孢吡肟、头孢罗齐、头孢噻肟、头孢布坦（仅对A群链球菌）、头孢曲松、头孢呋新、头孢泊肟、头孢唑肟、头孢噻吩、头孢吡硫、厄他培南、亚胺培南、洛拉卡比、美罗培南等抗菌药敏感，无需对这些抗菌药进行药物敏感试验。9.2青霉素和氨苄西林被推荐用于B群链球的围产期预防用药。头孢唑啉被推荐用于非严重青霉素过敏的妇女的治疗，严重过敏的病人应使用红霉素或克林霉素。B群链球对氨苄西林、青霉素和头孢唑啉敏感，但可能会对克林霉素和（或）红霉素耐药。如果从对青霉素严重过敏的怀孕妇女分离到B群链球菌，必须进行克林霉素和红霉素的药物敏感试验并报告结果。9.3红霉素耐药，克林霉素敏感的菌株应检测菌株对克林霉素的诱导耐药性，对克林霉素的诱导耐药性可通过“D”试验进行确认，即将红霉素和克林霉素纸片间隔15~26mm，35℃孵育16~18小时观察结果，如克林霉素抑菌圈在朝向红霉素纸片的方向出现“D”型变化，该菌株为对克林霉素诱导耐药的菌株，该菌株对克林霉素的药敏结果应修正为耐药。参考文献[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006（倪语星韩立中）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书超广谱β-内酰胺酶测定标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-051119版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）筛选和确证试验。2．适用范围本操作规程适用于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌。3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据现行版本的CLSIM02和M100选择ESBLs筛选和确证试验所需的药敏纸片。4．质控纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。肺炎克雷伯菌ATCC700603可接受的抑菌圈范围为：头孢泊肟（10µg）抑菌环9~16mm头孢他啶（30µg）抑菌环10~18mm氨曲南（30µg）抑菌环9~17mm头孢噻肟（30µg）抑菌环17~25mm头孢曲松（30µg）抑菌环16~24mm5．材料和仪器M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺。6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。7．判断标准见表5-53.表5-53纸片法检测克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌超广谱β-内酰胺酶方法初步筛选试验表型确证试验培养基Mueller-Hinton琼脂Mueller-Hinton琼脂抗微生物药物纸片浓度肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌：头孢泊肟10μg或头孢他啶30μg或氨曲南30μg或头孢噻肟30μg或头孢曲松30μg奇异变形杆菌：头孢泊肟10μg或头孢他啶30μg或头孢噻30μg使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性头孢他啶30μg，头孢他啶/克拉维酸30/10μg和头孢噻肟30μg，头孢噻肟/克拉维酸30/10μg确认试验需要同时使用头孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂接种按标准纸片扩散法的规定进行按标准纸片扩散法的规定进行孵育条件35℃空气35℃空气孵育时间16~18h16~18h判读结果肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌：头孢泊肟抑菌圈直径≤17mm头孢他啶抑菌圈直径≤22mm氨曲南抑菌圈直径≤27mm头孢噻肟抑菌圈直径≤27mm头孢曲松抑菌圈直径≤25mm奇异变形杆菌：头孢泊肟抑菌圈直径≤22mm头孢他啶抑菌圈直径≤22mm头孢噻肟抑菌圈直径≤27mm上述抑菌环直径提示菌株可能产生ESBLs2个药物中有任何一个，在加克拉维酸后，抑菌环直径与不加克拉维酸的抑菌环相比，增大值≥5mm时，判定为产ESBLs（例如，头孢他啶的抑菌环=16mm；头孢他啶/克拉维酸的抑菌环=21mm）质控意见当执行ESBL筛选试验时，肺炎克雷伯菌ATCC700603被用于质量评估（如训练，能力或试验评价），肺炎克雷伯菌ATCC700603或大肠埃希菌ATCC25922用于常规QC（如每周或每日）大肠埃希菌ATCC25922（应在敏感范围）肺炎克雷伯菌ATCC700603头孢泊肟抑菌环9~16mm头孢他啶抑菌环10~18mm氨曲南抑菌环9~17mm头孢噻肟抑菌环17~25mm头孢曲松抑菌环16~24mm当执行ESBL确认试验时，肺炎克雷伯菌ATCC700603和大肠埃希菌ATCC25922用于常规QC（每周或每日）大肠埃希菌ATCC25922：所测试药物联合克拉维酸后的抑菌环直径与单药抑菌环相比，增大≤2mm肺炎克雷伯菌ATCC700603：头孢他啶/克拉维酸抑菌环直径增大≥5mm头孢噻肟/克拉维酸抑菌环直径增大≥3mm8．注意事项只有确定分离到的奇异变形杆菌与临床感染性疾病有关，才需要进行ESBLs的筛选和确