微生物检验实验室致病性大肠埃希菌标准操作规程

微生物检验实验室致病性大肠埃希菌标准操作规程1.概述致病性大肠埃希菌包括肠产毒型大肠埃希菌、肠致病型大肠埃希菌、肠侵袭型大肠埃希菌、肠出血型大肠埃希菌和肠凝聚型大肠埃希菌5群。与普通大肠埃希菌的生化反应相似，应结合血清反应（O、H和K抗原）、毒性试验（ST和LT肠毒素）和临床症状，分别鉴定5型致病性大肠埃希菌。2.标本类型粪便标本。3.鉴定3.1形态染色与一般大肠埃希菌相同。3.2培养特性在麦康凯琼脂平板上形成不透明、粉红色或无色菌落。3.3生化反应与普通大肠埃希菌相似。3.4鉴别要点在山梨醇麦康凯琼脂平板上形成无色菌落。IMViC++--，3.5不发酵或迟发酵山梨醇，为本菌的主要特征。3.6操作步骤3.6.1氧化酶试验参见氧化酶试验标准操作规程。3.6.2致病型大肠埃希菌的鉴定肠致病型大肠埃希菌（EPEC）婴幼儿水样或蛋花汤样便，鉴定为大肠埃希菌后用EPEC分型血清作O:H分型。肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）水样便，鉴定为大肠埃希菌后需要测定ST和LT两种肠毒素及血清分型。ST的检查可用兔肠段结扎试验，免疫学或分子生物学方法（DNA探针）检测。肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）细菌性痢疾样便，生化特性与志贺菌相似，不发酵或迟发酵乳糖，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，符合EIECO:H血清分型，豚鼠眼结膜试验、HELA细胞侵入试验阳性。肠出血型大肠埃希菌(EHEC)早期为水样便后为血便，有50多个血清型，最具代表性的是O157：H7不发酵或迟发酵山梨醇，在山梨醇麦康凯琼脂平板上形成无色菌落，可用EHECO:H诊断血清进行分型。4.药敏参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSIM100-S20最新版本文件。5.质量控制参见质量管理程序。6.检验结果解释与分析疑似致病性大肠埃希菌感染，分离菌应先鉴定为大肠埃希菌，再通过不同的方法鉴定到种型，如分离到上述4种腹泻病原菌，应立即向临床发出报告。7.临床意义7.1EHEC主要引起严重的出血性肠炎，临床表现为低热、痉挛性腹痛，开始水样便，继而血样便。7.2EPEC主要引起婴儿腹泻,伴有低热、呕吐和腹泻，黏液便不带血。轻者不用抗生素治疗，严重者需用抗生素治疗。7.3ETCC引起旅游者和婴幼儿腹泻的主要病原菌，临床表现为水样腹泻、恶心、呕吐、寒战，有时发生脱水及中毒症状。轻者不用抗生素治疗，严重者需用抗生素治疗。7.4EIEC要侵入结肠粘膜上皮，引起志贺菌样腹泻（粘液脓血便），引起痢疾样腹泻，发热和肠炎，黏液血便，便中有红、白细胞。8.鉴定流程粪便或肛拭子粪便或肛拭子报告检出EPECO××B××（L）型血清分型鉴定1.OK抗原:不加热活菌与分型血清作玻片凝集2.OK抗原:加热1001h的菌液与分型血清作玻片凝集山梨醇平板无色菌落挑菌落与分组OK多价血清作玻片凝集凝集不凝集移种KIA及MIU上报告未检出EPEC与某型血清凝集必要时可作定型凝集试验报告未检出EPEC不凝集符合大肠埃希菌粪、尿、残余食物参考文献[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学