一株对烷基苯磺酸钠降解菌的分离鉴定及其降解特性

一株对烷基苯磺酸钠降解菌的分离鉴定及其降解特性

直链烷基苯磺酸钠（las）是一种具有良好耐清洗性、润湿性、乳化性和增溶性的阴离子表面活性剂。随着las的使用范围和使用量的增加，环境问题变得越来越受到重视。las可以通过各种方式进入天然水域和土壤，造成严重的环境污染，对人类健康和生物产生一定的毒性影响。因此,有关LAS污染的防治和处理方法的研究成为环保工作者关注的焦点.目前处理LAS废水常用的方法有生物法、氧化分解法、泡抹分离法等;其中生物法降解LAS是目前研究最多的一种方法1材料和方法1.11.1.1生物染色剂.所用试剂均为分析纯,染色剂为生物染色剂.1.1.2“三自”结构的应用MgSO1.1.3培养基和培养基0.3,琼脂12.0,其它同液体培养基.1.21.2.1LAS采用苋菜红两相滴定法1.2.2碳源生长菌株的分离纯化向采自天津市某洗涤剂生产厂的污泥中加入一定量的LAS,反复驯化几次,然后在固体培养基平板上划线分离,挑取生长旺盛的菌落,经过纯化,获得能以LAS为唯一碳源生长的菌株.1.2.3微生物鉴定仪检测根据《常见细菌系统鉴定手册》对细菌的生理、生化特性进行鉴定;送天津市卫生防疫站通过VITEK微生物自动鉴定仪进行鉴定;分子生物学鉴定则利用细菌的16SrDNA基因进行同源性鉴定1.2.4laslas250mL三角烧瓶中加入适量(除溶解氧实验外均为50mL)的液体培养基,其中含有一定浓度的LAS(根据具体实验确定),高温灭菌后接种一定量的LAS1,置于30℃的恒温摇床中100r/min培养,定时采取水样考察LAS的降解效果.2结果与讨论2.1试验菌株的选择分离结果见图1.可以看出,对于所选择的5个菌株,菌株LAS1降解LAS的能力相对较强,因此选择LAS1为试验菌株.2.2las1对las1生长的影响根据细菌的生理、生化特性及利用VITEK微生物自动鉴定仪,鉴定该菌为放射形土壤杆菌(LAS1的生长测定结果见图2.LAS浓度为63.9mg/L对LAS1的生长比较有利,此时LAS的降解效率也比较高,浓度过低或过高都不利于LAS1的生长,且浓度过高会抑制LAS1的生长,这与许多文献报道LAS会对生物生长产生抑制是相一致的.2.3las12.3.1生长温度的确定在不同温度(20℃、30℃、35℃和40℃)下100r/min将接种一定量LAS1的液体培养基恒温培养24h,然后定量测定LAS的降解浓度.结果见图3-A,LAS1的最佳生长温度为30℃.2.3.2las降解浓度测定在pH值分别为3.0、5.2、6.0、7.1、8.1和10.0的液体培养基中分别接种等量的LAS1,30℃100r/min培养24h,然后定量测定LAS的降解浓度.结果见图3-B.2.3.3培养基体积对las降解效果的影响氧含量对LAS1降解LAS能力的影响主要是通过调节在250mL三角烧瓶中液体培养基的体积来实现的,并控制相同的摇速.结果见图3-C.在所研究的培养基体积范围内,LAS降解效果的变化并不明显,同时进行的静止培养实验也证明存在一定程度的LAS降解,这表明LAS1降解LAS需要氧,但并不是非常苛刻.2.3.4各氮源对las降解的影响主要是考察不同浓度的无机氮(氯化铵)和有机氮(蛋白胨)对LAS1降解LAS能力的影响.结果见图3-D和3-E.对比图3-D与3-E的结果,无机氮可以促进LAS的降解,而有机氮则对LAS的降解产生强烈的抑制作用,这主要是因为有机氮在提供氮源的同时也提供了较LAS更容易同化的碳源,对LAS的降解产生竞争作用.2.3.5las液体培养基对las1降解能力的影响LAS会对水生生物的生长产生抑制作用,因此进行LAS1对LAS的耐受能力的研究是非常必要的.配制一系列的含不同浓度的LAS液体培养基,接种相同量的LAS1,观察LAS的降解效果.结果见图3-F.LAS对LAS1降解能力的影响是非常明显的,当LAS浓度达到300mg/L时几乎完全受到抑制,但通过逐步的诱导、驯化,可以使其耐受能力有一定程度的提高.2.3.6降解曲对动力学曲线拟合的测定配制一系列浓度完全一致的LAS液体培养基,接种相同量的LAS1进行培养,一定时间间隔取出样品测定LAS的浓度,并绘制降解曲对动力学曲线线性拟合:1/=0.9893las对土壤杆菌的影响