pcr实验室的建设与行为指南

PCRPCRPCR本假阳性结果；另外由于PCR〔特别是RNA本〕，试验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。因此临床基因扩增检验试验室技术验收和标准化治理是PCR技术本身需要，也是在临床上顺当应用该技术前提。二、PCR〔一〕硬件预备——试验室根本建设1扩增产物分析区，如使用全自动封闭器检测，此区域可不设。2.各工作区域必需有明确的标记，避开不同工作区域内的设备、物品混用。标本制备区→扩增反响混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。不同的工作区域使用不同的工作服〔不同的颜色〕。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。工作区域仪器设备配置标准试剂贮存和预备区2～8℃和-15℃冰箱：混匀器；微量加样器〔1～1000μl〕；移动紫外灯〔近工作台面〕；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头〔带滤心〕；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。标本制备区2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器〔掩盖1～1000μl〕；可移动紫外灯〔近工作台面〕；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头〔带滤心〕；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。扩增反响混合物配制和扩增区核酸扩增仪；微量加样器〔掩盖1～1000μl〕；可移动紫外灯〔近工作台面〕；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头〔带滤心〕；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。扩增产物分析区视检测方法不同而定。根本仪器设备如下：微量加样器〔掩盖1～200μl〕；可移动紫外灯〔近工作台面〕；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头〔带滤心〕；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。〔二〕软件建设——质量手册编写与实施、人才资源〔上岗证培训与相关学问学习〕1.临床基因扩增检验试验室的质量手册编写质量手册是说明临床基因扩增检验试验室的质量体系质量体系质量体系实可行的质量手册。质量手册的提纲应包括三局部：质量方针和宗旨；工作制度；标准操作文件〔SOP〕质量方针和宗旨制定临床基因扩增检验试验室的质量治理目标和质量保证体系的构造体系和总方针。工作制度一般应包括以下文件：试验室的设置、布局及组织构造；试验室内务治理制度；试验室的人员配置及治理制度；生物的防护与安全制度；试验试剂、耗材购置程序及治理制度；临床标本的治理制度；试验室记录的治理制度；质量把握工作治理制度；结果报告治理制度；埋怨的内部处理制度；负责人及质检员职责；岗位设置和责任制等„„标准操作程序〔SOP〕一般包括：消毒液配制标准操作程序：消毒标准操作程序；超净工作台使用标准操作程序；超净工作台维护和保养标准操作文件；PCR仪使用标准操作程序；PCR标准操作程序；移液器使用标准操作程序；冰箱维护和保养标准操作程序；电热恒温水浴箱操作程序；电子天平使用和校正操作程序；可移动紫外消毒车使用操作程序；加样器校准标准操作程序；离心机维护保养操作程序；温度计校准程序；试剂的质检操作程序；标本唯一标识编号编制规章；临床标本的采集及处理操作程序；临床标本的保存程序；乙准操作程序；结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测标准操作程序；沙眼衣原体核酸扩增荧光检测标准操作程序等„„；室内质控结果记录表；室间质控记录表；消耗性材料验收记录表；试剂验收记录表；故障处理表；台阶式高速离心机使用记录表；台式高速冷冻离心机使用记录表；扩增仪维护保养记录表；人员培训打算及培训记录表；试验室工作人员一览表；主要设备一览表；试验室清洁消毒记录表；工作区温度、湿度记录表；埋怨记录表；标本超低温保存记录表；应急处理记录表；垃圾处理记录表；冰箱温度记录表；水浴箱温度记录表；移动紫外消毒车记录表；设备校正记录表；检测结果报告流程；报告单样张；临床送检标本流程图；试验室组织构造图。PCR为了对以个特定序列进展PCR1、样品预备区这个区域特地用作样品的预备剂时应当实行预防措施：PCRDNA组织培育物、组织标本和血清样品都带进样品预备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。3〕用于样品处理的工具不能被用作一般分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。4〕DNA样品应当用有特地的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。5〕大体积样品应当用单独包装的无菌一次性移液管吸取。6〕管子翻开前都要简短离心以削减气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。7〕任何时候都应当穿试验服和带手套，手套要常常更换，尤其在抽清洗。2、样品预备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污RNA-PCRUNG3、前PCR必需有特地用于预备各种反响的区域，这个区域必需保持干净，而且没有来自克隆和样品预备的污染。前PCR区必需要有试剂和预备，特别是特地用于前PCR4、PCR〔或〔DNase和RNase〕污染。全部PCR试剂中使用的水都应当是高质量的－颖蒸馏的去离子0.22μm在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中参与0.025%的叠氮钠不抑制扩增反响。4〕所用试剂都应当以大体积配制，试验一下看试剂是否满足，然后分装成仅够一次使用的量进展贮存。5〕全部试剂和样品预备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。配制的试剂在用于预备的标本之前应当加以检验。样品预备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应当留神保存。5、在前PCR区建立PCR1〕可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好-20℃或4℃，在试验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。2〕假设你的试验室使用多套引物，以致于配制包括全部试剂的单一反响混合物不够经济，可以考虑分装保存够一天的PCR成分。3〕作为一个规章，应当保存一套阴性、弱阳性和强阳性比照样品来分析样品配制和PCR使用一个的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。4〕阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR全部试剂。当做阳性比照时，有两个理由打算了应当使用最少数量的核酸。由于必需有比照反响，比照模板的特点应当予以考虑。6、把握污染的方法UNG，这一技术能有效地消退由PCR法几个数量级。7、PCR8、后PCRPCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应当留出一个特地用PCR材和仪器都必需是特地用于这一目的剂或仪器用于任何前PCRPCR质量，使临床诊断和治疗更为科学、合理，特制定本方法。关键词：PCR临床基因扩增检验试验室治理暂行方法第一条为标准临床基因扩增检验试验室治理增检验质量，使临床诊断和治疗更为科学、合理，特制定本方法。增检测DNA或RNA为方法的检测技术，如聚合酶链反响〔PCR〕、连接酶链反响LC〕、转录依靠的放大系统TAS〕〔3SR〕和链替代扩增〔SDA〕等。第三条本方法适用于开展临床基因扩增检验的试验室因扩增检验试验室设立在二级以上医院。局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验工程。第五条卫生部临床检验中〔以下简称卫生部临检中心和省、〔以下简称省临检中心〕负责对所辖行政区域内临床基因扩增检验试验室的质量监视治理工作。〔见附件〕筹建试验室；筹建完提交以下材料：〔一〕《医疗机构执业许可证》复印件；〔二〕可行性争论报告；1、拟设临床基因扩增检验试验室机构的所在地医疗卫生资源扩增试验室运行的推想分析；23、拟设临床基因扩增检验试验室将开展的检验工程、试验设备条件和有关技术人员资料家组〔以下简称专家组〕，依据《临床基因扩增检验试验室根本设置20定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案部材料送达省级卫生行政部门后15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见，方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验工程。疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验工程。第十条临床基因检验试验室必需依据室工作标准》〔另发〕开展临床基因扩增检验工作。训。经培训合格者，由培训单位发给合格证书，并将培训合格人员名增检验工作。培训单位为卫生部临检中心，或由省级卫生行政部门指定并经卫生部临检中心认定的机构。培训时使用规定的材。第十二条以科研为目的的基因扩增检验工程检验报告，不得向病人收取任何费用。第十三条临床基因扩增检验试验室必需依据内质量评价。第十四条床基因扩增检验试验室所在医疗机构。政部门托付可对临床基因扩增检验试验室进呈现场检查调阅有关资料，被检查机构不得拒绝或隐瞒。基因扩增检验结果不合格的临床基因扩增检验试验室心报省级以上卫生行政部门由省级以上卫生行政部门责令其暂停有验工程。格并报省级卫生部门备案，擅自开展临床基因检验工程的医疗机构，由省级卫生行政部门依据《医疗机构治理条例》第四十七条和《医疗机构治理条例实施细则》第八十条予以惩罚，并予以公告。公告所需费用由被公告机构支付。第十八条消灭以下状况之一的临床基因扩增检验试验室级卫生行政部门责令其停顿开展临床基因扩增检验机构予以公告。公告所需费用由被公告机构支付：〔一〕开展超出卫生部临检中心组织的技术验收合格并报省级〔二〕使用未经国家药品监视治理局批准的试剂开展临床基因扩增检验的；〔三〕在临床基因扩增检验中未开展室内质量把握的；〔四〕在临床基因扩增检验中未参与室间质量评价的；〔五〕〔六〕〔七〕使用未经培训合格的专业技术人员从事临床基因扩增检验的；检验工程的治理，参照本方法执行。扩增检验的试验室进展技术验收所需费用按国家有关规定执行。其次十一条本方法由卫生部负责解释。其次十二条本方法自公布之日起施行。附：临床基因扩增检验试验室根本设置标准依据《临床检验扩增检验试验室治理暂行方法》，制定本标准〔一〕1234如使用全自动，区域可适当合并。〔二〕各工作区域必需有明确的标记，避开不同工作区域内的设备、物品混用。〔三〕进入各工作区域必需严格依据单一方向进展，即试剂储增产物分析区。〔四〕〔例如不同的颜色。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。〔一〕1、2-8C-15C2、混匀器3、微量加样器〔掩盖1-1000ul〕4、移动紫外灯〔近工作台面〕5和加样器吸头〔带滤心〕6、专用工作服和工作鞋7、专用办公用品〔二〕1、2-8C-20C-80C2、高速台式冷冻离心机3、混允器4、水浴箱或加热模块5、微量加样器〔掩盖1-1000ul〕6、可移动紫外灯〔近工作台面〕7、超净工作台8和加样器吸头〔带滤心〕9、专用工作服和工作鞋10、专用办公用品如需处理大分子DNA，应具有超声波水浴仪。〔三〕12〔掩盖1-1000ul〕3〔近工作台面〕4、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头〔带滤心〕56(四)扩增产物分析区视检验方法不同而定。根本仪器设备如下：1〔掩盖1-1000ul〕2〔近工作台面〕3〔带滤心〕45为了对以个特定序列进展PCR做重复检测,需要三个不同的区域,1、样品预备区这个区域特地用作样品的预备剂时应当采取预防措施：PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。组织培育物、组织标本和血清样品都带进样品预备间处理，以依据应用的需要提取DNARNA。用于样品处理的工具不能被用作一般分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。DNA以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。大体积样品应当用单独包装的无菌一次性移液管吸取。管子翻开前都要简短离心以削减气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。任何时候都应当穿试验服和带手套，手套要常常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。试验服要特地用于样品预备间，常常清洗。2、样品预备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污RNA-PCRUNG3、前PCR必需有特地用于预备各种反响的区域，这个区域必需保持干净，而且没有来自克隆和样品预备的污染。前PCR区必需要有试剂和预备，特别是特地用于前PCR4、PCR所用的全部溶液都应当没有核酸和〔或〕核酸酶〔DNase和RNase〕污染。全部PCR试剂中使用的水都应当是高质量的－颖蒸馏的去离子水，用0.22μm在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中参与0.025%的叠氮钠不抑制扩增反响。所用试剂都应当以大体积配制，试验一下看试剂是否满足，然后分装成仅够一次使用的量进展贮存。全部试剂和样品预备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。配制的试剂在用于预备的标本之前应当加以检验。样品预备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应当留神保存。5、在前PCRPCR可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在试验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。假设你的试验室使用多套引物，以致于配制包括全部试剂的PCR成分。作为一个规章，应当保存一套阴性、弱阳性和强阳性比照样品来分析