分子印迹固相萃取结合超高效液相荧光法测定螺类中15种多环芳烃

分子印迹固相萃取结合超高效液相荧光法测定螺类中15种多环芳烃

多环芳烃（pahs）是一种高度毒性的碳氢化合物。PAHs具有疏水性、半挥发性及难降解等特点,容易在生物体内富集贝螺类具有营滤食性生活和代谢率低的特点,极易富集污染物,常用作海洋生态系统污染暴露于效应的生物指示。PAHs在环境中不易降解并且具有亲脂特性,经鳃丝、体表渗透和摄食等方式进入海洋生物,环境中PAHs的生物富集系数可高达几千至几百万倍,因此海洋贝螺类已广泛地应用于海洋环境中有机污染物的检测分子印迹技术是借助人工制备的分子印迹聚合物(molecularlyimprintedpolymer,MIP)针对目标分子实施特异性识别、分离、净化以及富集处理,同时多种MIP和SPE柱结合起来的应用,通过分子印迹材料能够避免到内源性干扰,在有效去除样品基质干扰的同时,还可以特异性结合分析物1材料和方法1.1仪器、试药和仪器H-CLASS型超高效液相色谱仪(美国Waters公司);MG-2200型氮吹仪(日本EYELA公司);QT-1型漩涡混合器(上海琪特分析仪器有限公司);12位固相萃取真空装置(德国CNW科技公司);SB-5200DT型超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);5810R型离心机(德国Eppendorf公司);电子天平(德国bt25s公司);MIP-PAHs多环芳烃专用小柱(上海安谱科技股份有限公司),填料规格为1g·(6mL)乙腈(色谱纯),正己烷(色谱纯),二氯甲烷(色谱纯);15种多环芳烃混合标液:萘(Nap)、苊(Ace)、芴(Flu)、菲(Phe)、蒽(Ant)、荧蒽(Fln)、芘(Pyr)、苯并(a)蒽(BaA)、1.2样品预处理1.2.1超声水浴时间称取5g均质(精确至0.01g)试样于50mL离心管A,加入10mL正己烷,涡旋振荡10s后,放入40℃超声水浴30min,4500r·min1.2.2亲脂ptfe针式滤器ptfe过滤依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化MIP-PAHs多环芳烃专用小柱,将待净化样上到小柱上,再用2mL正己烷润洗30mL玻璃离心管B,上样到柱上,用6mL正己烷淋洗小柱并弃流出液,再用6mL二氯甲烷收集洗脱液于5mL玻璃离心管中,将收集液在40℃下用氮气吹干,用1mL乙腈定容,超声1min,再漩涡混合10s,过0.22μm亲脂PTFE针式滤器,待上机检测。1.2.3测量取试样溶液10μL,注入超高效液相色谱仪,记录色谱图,从标准曲线上查得样品中多环芳烃的浓度。1.3流动相及洗脱梯度色谱柱为AglientZORBAXEclipsePAH柱(4.6mm×150mm,3.5μm),柱温30℃;流动相A为乙腈,B为超纯水。洗脱梯度为0.0~2.0min,50%A;2.0~22.0min,50%~100%A;22.0~28.0min,100%A;28.0~28.1min,100%~50%A;28.1~32min,50%A;流速为1.5mL·min多波长荧光检测器,采用程序定时控制荧光检测波长变化,测定除苊烯以外的15种多环芳烃,见表1。1.4计算结果15种多环芳烃含量的计算公式:其中,X为样品的多环芳烃含量,μg·kg2结果与分析2.1标准曲线的线性范围配置1、5、10、20、50和100ng·mL2.2返回率和准确度为了确保分析数据的准确性、精密性和可比性,在空白螺类样品中添加含有15种PAHs的混标(添加水平分别为5、10、20μg·kg2.3螺类样品中多环芳烃的含量运用本研究建立的方法对浙江省内部分地区的螺类样品进行分析检测。检测分析结果(表4)表明:15种组分中Phe的平均含量最高,检测样品中Phe的含量在5.83~30.21μg·kg浙江省内部分地区的螺类样品中多环芳烃平均含量见图1。可知,温州洞头被测样品的PAHs总和含量最高,平均含量约为57.02μg·kg2.4螺类多环芳烃组分PAHs大致可分为2环的萘,3环的苊烯、苊、芴、非和蒽,属于低分子质量多环芳烃,易挥发,对水生生物有一定毒性;4环的荧蒽、芘、苯并[a]蒽和浙江省内部分地区PAHs组分特征见图3。2环PAHs是台州三门和温州洞头被测螺类体内多环芳烃的优势组分;台州椒江被测样品的PAHs以4环为优势组分;舟山普陀的组分特征结构较平均,2、3、4环结构含量在5.41~5.87μg·kg3螺类中pahs的组成及含量本研究建立了分子印迹固相萃取-超高效液相色谱荧光检测15种多环芳烃含量的方法,具备了操作步骤简单、回收率稳定、结果准确的优点。超声波提取法增强了溶剂穿透复杂基质,对水产品中PAHs的分析更有优势。PAHs在1~100ng·mL浙江省内部分地区螺类中15种PAHs总含