羚羊角粉对大鼠脑创伤后脑水肿的影响

羚羊角粉对大鼠脑创伤后脑水肿的影响

脑水肿是脑瘫（ti）致死和致死于主要原因之一。近年来的研究表明，水通道蛋白质-4（aqp4）与脑水肿密切相关。1材料和方法1.1动物1.2蛋白试剂盒羚羊角粉(产地新疆,由上海雷允上中药饮片厂生产,每瓶600mg),水合氯醛(青岛宇龙海藻有限公司生产,配制成10%的溶液),伊文氏蓝(EB,北京广博先锋生物技术有限公司,配制成2.5%的溶液),AQP4蛋白试剂盒(购自上海高创科技有限公司)。1.3骨窗开孔被破坏随机分为模型组与治疗组。两组按脑创伤前1d,脑创伤后1、3、5、7d分为5个亚组,每组10只大鼠。SD大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.03mL/kg体质量)后,大鼠俯卧位固定头部,用牙科钻在其前囟后方1.5mm,中线左侧2.5mm处钻开5mm的骨孔,保持硬脑膜完整,20g砝码从30cm高出自由坠落,击中打击棒,造成大鼠中度脑损伤。石膏粉封闭骨窗,缝合头皮,放入笼中饲养。治疗组大鼠按300mg/kg体质量给予羚羊角粉灌胃。1.4样品的采集和检测1.4.1脑eb含量测定各组动物在处死前15min乙醚吸入麻醉后,按25mg/kg体质量自后肢股静脉注射2.5%EB溶液。15min后处死,开颅取脑,将大脑两半球切开称重,按0.3mL/kg湿脑组织加甲酰胺,加盖避光在45℃水浴中提取72h,提取液离心15min(3000r/min),取上清液在HitachiF-2000型荧光分光光度仪上测定荧光强度,激发波长为620nm,发射波长为683nm,波宽均为10nm。用倍比稀释法制作标准曲线,再根据标准曲线求得脑组织EB含量,以μg/g湿脑组织表示。以左半球EB增量=左半球EB量-右半球EB量,来表示左半球即创伤侧BBB破坏的情况。1.4.2脑干质量的测定大鼠按观察时间处死,立即取脑并除去小脑,大脑两半球切开,吸水纸拭去脑组织表面的血迹和水分,分析天平精确称重,记为湿质量(W),置于100~110℃的烤箱(HXG-10型)中烘烤48h至恒重后,称取干质量(D),将脑组织干湿质量代入Elliot-Jsaper公式1.4.3大鼠脑aqp4蛋白表达水平测定将各个时段大鼠,取创伤周围脑皮层组织以及软脑膜500mg,缓冲液冲洗干净,测定大鼠脑组织后各个时段的AQP4蛋白。测试盒购自上海高创科技有限公司,由本院检验科按照测试盒说明协助测定。1.4.4病理检查1.5统计处理2结果2.1两组伤口前后的指标比较2.2两组病理检查创伤后脑组织水肿明显,毛细血管周围间隙较大,切片透亮度增加,星形胶质细胞有明显的肿胀和空泡变性。治疗组脑水肿明显减轻。3羚羊角的保护作用脑水肿是TBI、脑缺血、脑肿瘤和脑脓肿等伤病的共有的复杂的脑组织病理生理改变,其主要病理学特征为脑实质内水分过多从而使脑组织体积增加笔者采用经典的自由落体坠击伤大鼠模型,符合临床常见的加速型颅脑创伤,是研究创伤性脑水肿较理想的动物模型羚羊角有“定心神,消水肿,去瘀血,生新血,降火下气”(《本草再新》),“清热,凉血,解毒”等诸多作用。研究认为羚羊角对中枢神经系统有保护作用;羚羊角外皮浸出液能增加动物组织对缺氧的耐受能力,有镇痛作用;羚羊角粉用于高血压脑出血之神昏高热患者有较好的疗效SD大鼠100只,清洁级,购自第二军医大学实验动物中心),体质量(250±20)g,雌雄不限。将脑组织浸泡于10%甲醛溶液内固定、切片、HE染色,光镜下观察脑组织病理改变。应用SAS统计软件分析。计量资料以(ue0af±s)表示。P<0.05为差异有统计学意义。见表1。SD大鼠BBB在创伤后1d即有破坏(P<0.05),伤后3d最为严重(P<0.05),5d后开始BBB修复。脑水肿在创伤后1d升高至3d达到最高水平(P<0.05),5d后开始下降,但7d时与创伤前相比仍有明显水肿(P<0.05)。AQP4的表达在伤后1d增加(P<0.05