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无菌培养系统下松材线虫

消长动态和除菌效果研究许刚指导老师：张建平生物与环境工程学院第1页

松材线虫病是松树病虫害中最严重疾病，细菌在松材线虫致病机制起着主要作用。为了对这一成果进行研究，我们需要取得大量无菌松材线虫，不过要取得无菌松材线虫非常困难，导师张建平创制了一种无菌松材线虫培养装置。课题研究背景

第2页这个装置设计是用木屑+选择性培养基(孟加拉红)，不过这个装置试验效果还需要优化。我们做这个试验目标就是对这个装置培养效果做更加好优化，使得优化后培养基达成产量最高，并且达成无菌效果。第3页详细试验方案1、真菌培养时间对松材线虫生长数量影响。2、松材线虫本身培养时间对松材线虫带菌情况影响，如：松材线虫体内是否带菌研究3、松材线虫本身培养时间对松材线虫生长数量影响第4页1、真菌培养时间对松材线虫培养产量影响真菌培养时间234567平均1286394968423326313693283110126平均2415627101023326465343283110126第5页松材线虫数量伴随松枯稍孢菌培养时间增加而下降只是在松枯稍孢菌培养第3天时，松材线虫数量迅速减少成果与上述趋势有异，也许是试验误差。第6页2、松材线虫培养时间对松材线虫带菌数量影响松材线虫培养时间357911131517取样梯度10-310-210-210-310-410-410-410-3菌落数2.7125156.7128.713854.3227.3125含菌量2.7×1031.25×1041.567×1041.287×1051.38×1065.43×1052.273×1061.25×105每条松材线虫带菌量（cfu）2.712.515.67128.713805432273125注：菌落数采取最后一次观测培养皿中菌落数平均值第7页松材线虫带菌情况与时间关系是：先逐渐上升，第11-15天之间带菌量趋于稳定状态，然后第17天带菌量下降。注：每条松材线虫带菌量（cfu）数据取对数后作图第8页3、松材线虫体内带菌情况成果 将培养了不一样步间松材线虫研磨后分梯度接入肉汤培养基中，观测肉汤培养基浑浊情况，得到数据如下，数据表达培养后开始浑浊天数，>11能够判断为不浑浊。编号培养时间ABC1231231233116﹥118﹥11﹥11﹥11﹥11105222﹥11﹥11﹥112227﹥11﹥11﹥11333﹥11﹥11﹥119121﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥1111222﹥112﹥11﹥11﹥11﹥111322﹥11﹥115﹥11﹥11﹥11415﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥1117﹥11﹥11﹥11﹥11﹥11﹥1110﹥11﹥11第9页 培养液不混浊表达样品不带菌，即松材线虫体内是不带菌，松材线虫体表带菌，在研磨之前通过加双氧水消毒，已经除去了。假如松材线虫体内带菌话，那么，所有测量样本最后止果都应当显示浑浊，可是成果中大部分都是不浑浊。因此通过这个试验，我们得出结论：用松材线虫无菌培养装置培养松材线虫体内不带菌，能够取得真正无菌松材线虫，但仍需要谨慎除菌操作。需长时间才浑浊样品也许是由于操作时出现误差。第10页4、松材线虫本身培养时间对松材线虫生长数量影响根据松材线虫在木屑中不一样生长时间，通过度离，对松材线虫生长数量进行测量、计数。接种培养时间57911131517单个培养装置松材线虫数量（条）26041315204319226687293531228014341第11页通过图能够分析出松材线虫不一样培养时间对松材线虫生长情况影响，虽然略显波动，不过基本趋势还是下降，其中第9天线虫量为最多，这也许是由于松材线虫无菌培养装置中营养物含量下降造成。第12页1、在松材线虫无菌培养装置中，伴随培养时间延长，松材线虫所带细菌越多，但虫体内部都可达成无菌程度，通过以H2O2消毒处理可取得完全无菌松材线虫。2、在松材线虫无菌培养装置中，伴随培养时间延长，松材线虫所带细菌越多，每条松材线虫可达约3－4条，但虫体内部都可达成无菌程度，通过以H2O2消毒处理可取得完全无菌松材线虫。