高效液相色谱法测定大鼠血浆中异补骨脂素的浓度及其药动学研究

高效液相色谱法测定大鼠血浆中异补骨脂素的浓度及其药动学研究

异丙醇素是一种重要的补骨脂活性成分。材料和方法1药品、仪器和药品动物SPF级Wistar大鼠,雌雄各半,体重130~150g,由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。动物许可证号:SCXK(京)2014-0004。药品与试剂异补骨脂素,批号:20150815,规格:每瓶25mg,天津月牙湖生物科技有限公司生产;蛇床子素(内标),规格:每瓶20mg,批号:110822-201609,中国食品药品检定研究院生产。黄蓍树胶粉,北京Solarbio公司生产;甲醇、乙腈,赛默飞世尔科技(中国)有限公司生产。仪器LDZ5-2离心机,北京医用离心机厂产品;LEAGENOMICRO21R低温高速离心机,美国Thermo公司产品;2695液相色谱仪,美国Waters公司产品。2实验方法2.1黄著树胶粉溶液按照体重将大鼠随机分成4组,每组6只:低、中、高3个剂量异补骨脂素组和空白对照组。空白对照组给予等容量黄著树胶粉溶剂;低、中、高3个剂量异补骨脂素组给予3.5,7.0,14.0mg·kg2.2前血液样本处理精密取血浆样品100μL,加入浓度为50μg·mL2.3条件1TC-C2.4方法研究2.4.1筛选对照品色谱图取大鼠空白血浆,按2.2项下的方法操作;取大鼠空白血浆,分别加入一定量的异补骨脂素和蛇床子素,得血浆对照品色谱图;取给药后的大鼠血浆,按2.2项下方法操作,得血浆样品色谱图。2.4.2标准溶液的配制精密吸取不同浓度的异补骨脂素标准液置于离心管中,用氮气挥干,加入大鼠空白血浆100μL,加入异补骨脂素标准品的系列标准溶液后,按照2.2项操作,配制成不同浓度的异补骨脂素含药血浆的一系列标准溶液:20,50ng·mL2.4.3提取回收率实验精密吸取空白血浆100μL,不加内标,按照2.2项方法处理至氮气系统吹干步骤后,加入异补骨脂素标准液,使异补骨脂素质量浓度分别为50ng·mL按下式计算大鼠血浆中的异补骨脂素提取回收率(R%):R%=Rx/Rs×100%×1/0.9。2.4.5准确度和精度精密吸取大鼠空白血浆100μL,加入标准品,使异补骨脂素的质量浓度分别为50ng·mL2.4.6稳定性精密吸取大鼠空白血浆100μL,按照2.2项下方法配制异补骨脂素的低、中、高3个质量浓度的质控(QC)样品(5.0×103药代动力学参数用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料用ue0af±s表示,血药浓度-时间数据用DAS3.0程序中的统计矩法计算药代动力学参数。结果1内源性物质干扰大鼠体内异补骨脂素检测异补骨脂素和蛇床子素的保留时间分别为10.69,15.98min,表明血浆中的内源性物质均不干扰大鼠体内异补骨脂素的含量测定,见图1。1.2标准曲线和线性范围异补骨脂素的标准曲线方程为R=1.1×101.3加标回收率试验异补骨脂素低、中、高3个浓度的平均回收率分别为(72.34±6.09)%,(73.36±6.00)%和(78.22±6.99)%,均大于70%,回收率较高。1.4外规范要求本方法的准确度、批内精密度及批间精密度均符合有关国内外规范要求。低、中、高3个浓度的批内精密度分别为7.04%,7.71%和7.74%;低、中、高3个浓度的批间精密度分别为6.59%,8.26%和9.19%。1.5稳定性结果异补骨脂素在3次冻融循环后处理、样品复溶后上清液室温放置24h后进行处理和样品于-20℃超低温冰箱中放置10d后处理的状态下,均显示出较好的稳定性。2血药浓度曲线给予大鼠单次灌胃低、中、高3个浓度异补骨脂素后的平均血药浓度-时间曲线,见图2。3药房动态参数因动物个体差异较大,