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文档简介

大肠杆菌的检验方法样品制备：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1〜2min,制成1:10样品匀液（也可用灭菌乳钵研磨的方法代替）。稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4。从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超过15min。LST和EC初步筛选：对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白（月示）（LST）肉汤，每管接种1mL。将接种管置于36±1°C培养48±2h。观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生，用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5C水浴箱内，培养48±2h。EMB平板：取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝（EMB）平板,36±1C培养24±2h。检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。如有典型菌落，则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落，则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1°C培养18〜24h。生化试验：将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。1色氨酸肉汤：在36±1C培养24±2h后，加Kovacs氏试剂0.2〜0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。MR-VP培养基：在36±1C培养48±2h。以无菌操作移取培养物1mL全13mmX100mm试管中，加5%a-萘酚乙醇溶液0.6mL,40%氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结品，振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。如培养物变红色，为甲基红试验阳性，若变黄色则为阴性反应。Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1C培养96h记录有无生长。LST肉汤：于36±1C培养48±2h，观察试管中是否产气。5革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下:靛基质IMRIVP| 枸椽酸盐|鉴定（型别）+1 + I — I — I典型大肠杆菌—I + I — I — 〕非典型大肠杆菌+ I + I - I + I典型中间型—I + I - I + ］非典型中间型-I - I+I+I典型产气肠杆菌+I - I+I+］非典型产气肠杆菌如出现上表以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯,应重新划线分离，必要时做重复试验。结果报告:大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖

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