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文档简介
实验十大肠菌群的测定一、 目的要求学习并掌握食品中大肠菌群测定的基本方法和基本原理。二、 实验说明大肠菌群系指一群在37°C,24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标,来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。食品中大肠菌群数系以每100ml(g)检样内大肠菌群最近似数(MPN)来表示,其含义是指100ml(g)食品内含有大肠菌群数的实际数值(表10-1)。三、 实验器材1、 设备和材料温箱:36±1C,水浴:44+0.5C,天平、显微镜、均质器或研钵,温度计,平皿、试管、吸管、载玻片。2、 培养基及试剂乳糖胆盐发酵管(GB),伊红美蓝琼脂平板(GB),乳糖发酵管(GB)、蛋白胨水(GB)、靛基质试剂(GB),革兰氏染液(GB)。四、 方法步骤(10-1)(一)检样稀释1、以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml番茄生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌研钵内,经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8000-10000rpm的速度处理1分钟,做成1:10的均匀稀释液。用1ml灭菌吸管,吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其它稀释的试管内,振摇试管混匀作成1:100的稀释液。另取1ml灭菌吸管,按上述操作依次作10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。2、根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度接种3管。(二) 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1°C温箱内,培养24±2h,如有乳糖胆盐发酵管都不产气,则报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。(三) 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1C温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。(四) 证实试验在上述平板上,挑取可疑大肠菌群1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1C温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。五、实验作业1、根据证实为大肠菌群的阻性管数,按附表报告
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