艾滋病实验室的建立生物安全要求及管理制度

艾滋病实验室的建立、生物平安要求及管理制度1主要内容1艾滋病实验室的建立23艾滋病实验室生物平安艾滋病相关检测及实验室要求2艾滋病实验室生物平安3实验室生物平安概论是指在从事病原微生物实验活动的实验室中防止病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的伤害，为了保证试验研究的科学性还要保护被试验因子免受污染。4生物危险感染性的致病因子，无论是直接感染，还是间接地散播到环境中去，对人类、动物或植物都是一个现实的或潜在的危险。动物人类植物5实验室主要生物危害还有许多不明原因的实验室相关感染

眼结膜入侵吸入感染经口摄入经皮肤感染6健康工作者HIV感染的职业危险暴露类型经皮粘膜未知皮肤报告数量〔截至99年6月〕475

10单次HIV暴露的危险性〔％〕0.30.03<0.03美国CDC7Pike等对3921例实验室相关感染统计分析结果发现，原因的实验室感染只占全部感染的18％，不明原因的实验室感染却高达82％。对不明原因的实验室感染的研究说明，大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病的。8可产生各种严重程度微生物气溶胶的实验室操作9至2004年报道的和可能的HIV职业暴露感染人群分类职业报道可能总计护士/护工医生/医学实习生外科医生牙医临床实验室工作者急救人员非临检实验室工作者尸体防护者外科医技师透析技师气管切开师健康咨询师主妇/看门人其它总计10经实验室职业暴露感染HIV案列分析〔举例〕国家从事工作暴露情况美国静脉切开技师血液喷溅至脸部痘上和口腔粘膜；2个月后被污染〔IDU〕的针头刮伤美国医技师处理血浆别离置换仪器污染手皮肤后可能接触患皮炎的耳朵美国实验室研究人员清洁被高浓度HIV污染的设备时被钝头不锈钢针头刺穿手套美国实验室人员被含艾滋病病人血的试管划破手美国临床实验室人员在为艾滋病病人采集血后被21-G注射器针头刺伤美国病理医生在为艾滋病死者尸体剖检时被手术刀深度割伤美国别离病毒技术员在P3实验室中处理高浓度HIV时，手皮肤可能接触了被病毒液泄漏而污染的手套意大利清洁女工在化学实验室眼结膜被残留HIV感染者的血液标本污染11定义实验室生物平安防护：实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染。12生物平安防护三原那么实验室生物平安防护的内容包括:平安设备、个体防护装置和措施〔一级防护〕实验室的特殊设计和建设要求〔二级防护〕严格的管理制度、标准化的操作程序和规程等方面采取综合措施确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染。13艾滋病实验室建立14全国艾滋病检测工作管理方法(卫生部2006年6月印发)15实验室的职能、开展检测工作的性质及范围共分三类实验室艾滋病参比实验室艾滋病检测确证实验室艾滋病检测筛查实验室16艾滋病参比实验室-中国疾病预防控制中心

1、承担全国艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和评价工作。

2、建立全国艾滋病检测质量保证及质量控制体系，组织国家级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂临床质量评估。

3、承担艾滋病检测疑难样品的分析和确证，对有争议的检测结果进行仲裁，出具最终检测报告。

4、开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的病原学鉴定、现场综合防治、调研、监测、临床治疗等工作中的相关检测任务。

5、建立国家艾滋病病毒毒种库、样品库、质控品库、基因库和细胞库。

6、为艾滋病确证中心实验室开展省级实验室质量管理、省级艾滋病诊断试剂临床质量评估和自愿咨询检测等工作提供技术支持和指导。

7、组织全国艾滋病检测相关业务培训，组织制定和修改与艾滋病检测工作有关的技术标准和指南。17艾滋病检测确证实验室

艾滋病确证中心实验室：省级疾病预防控制中心。艾滋病确证实验室：疾病预防控制机构、医疗机构、血液中心、方案生育技术效劳机构等。18艾滋病确证中心实验室职能(1)负责职责范围内艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和评价，组织艾滋病检测实验室人员技术培训。

(2)建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。

(3)承担省级卫生行政部门指定区域内的艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。

(4)开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的病原学鉴定、现场综合防治、调研、监测、临床治疗等工作中相关的检测任务。

(5)建立职责范围内的艾滋病检测样品库和质控品库。

(6)收集、整理和分析艾滋病检测数据及相关资料，建立艾滋病检测实验室根本资料库和艾滋病检测资料数据库。定期向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心报告艾滋病检测数据及相关资料，并配合其做好个案调查、登记等随访工作。

(7)负责对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室的技术支持和指导。19艾滋病确证实验室职能

(1)承担当地卫生行政部门指定的艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。

(2)及时向艾滋病确证中心实验室报告经确证的阳性结果，并配合其做好个案调查、登记等随访工作。

(3)承担当地卫生行政部门指定的艾滋病检测筛查实验室的业务技术指导、培训和评价任务。

(4)定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病确证中心实验室和同级卫生行政部门。

(5)协助艾滋病检测实验室开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。20艾滋病检测确证实验室

(一)人员条件。

至少由5名医技人员组成，其中专职人员至少2名，具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事艾滋病病毒抗体检测工作经验、接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。

(二)建筑条件。

需有独立的血清学检测实验室，分为清洁区、半污染区和污染区，符合二级生物平安实验室(BSL-2)要求。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测等建筑区域。

(三)仪器设备条件。

配备血清学检测和二级生物平安实验室(BSL-2)所需仪器设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温冰箱、水浴箱(或温箱)、离心机、旋转震荡器、摇床、加样器(仪)、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、实验室恒温设备、平安防护用品和生物平安柜。具有建立血清库和数据库的设备条件。21艾滋病检测筛查实验室艾滋病筛查中心实验室：市(地)级疾病预防控制中心艾滋病筛查实验室艾滋病检测点疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、方案生育技术效劳机构等22艾滋病筛查中心实验室职能(1)负责职责范围内艾滋病病毒抗体筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。

(2)负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反响的样品送艾滋病检测确证实验室。

(3)定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病检测确证实验室。配合艾滋病检测确证实验室做好个案调查、登记等随访工作。

(4)负责对职责范围内艾滋病检测筛查实验室的技术指导；协助艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。23艾滋病筛查实验室职能(1)开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。

(2)负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反响的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。

(3)定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。

(4)对自愿咨询检测工作提供技术支持。24艾滋病筛查中心实验室及

艾滋病筛查实验室

1、人员条件

至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。

2、建筑条件

实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物平安实验室(BSL-2)要求。

3、仪器设备条件

配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱(或温箱)、离心机、加样器(仪)、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、平安防护用品和生物平安柜。25艾滋病检测点职能

(1)开展艾滋病病毒抗体的筛查试验。

(2)负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反响的样品送当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。

(3)定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。

(4)开展艾滋病自愿咨询检测工作。26艾滋病检测点

1、人员条件

至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。

2、建筑条件

需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。

3、设备条件

需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、平安防护用品。27实验室建设要求28实验室结构和设施、平安操作规程、平安设备适用于对健康成年人无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。包含微生物举例大肠杆菌格鲁伯耐格里原虫感染性犬肝炎病毒枯草杆菌一级生物平安防护实验室29实验室应设洗手池〔靠近出口处〕实验室围护结构内外表应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废弃物容器的台〔架〕实验台外表应不透水，耐腐蚀、耐热实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗一级生物平安防护实验室〔BSL-1〕实验室设计及建造30

工作过程中禁止非工作人员进入实验室。接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化装及存储食物一级生物平安防护实验室标准微生物操作规程31使用机械移液器吸取液体，禁止口吸制定锋利器具的平安操作规程按照实验室平安规程操作，降低溅出和气溶胶的产生每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒所有培养物、废弃物在运出实验室前须进行灭活〔如高压〕。需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。一级生物平安防护实验室标准微生物操作规程32一级生物平安防护实验室平安设施和个体防护一般无须使用生物平安柜等专用平安设备工作人员在实验室应穿工作服，带防护眼镜工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套33实验室结构和设施、平安操作规程、平安设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。包含微生物举例麻疹病毒沙门氏菌乙型肝炎病毒HIV血清学检测衣原体志贺氏菌二级生物平安防护实验室〔BSL-2〕34生物平安二级实验室的设计和设施方面的要求，除了满足BSL-1级实验室条件的根底上，还应符合以下要求

1、实验室门的要求：能自动关闭有可视窗有防介肢动物的设施352、报警系统火灾报警器〔声、光报警〕停电报警3、实验室的通风要求1〕可采用自然通风，但应有防虫纱窗2〕人工通风系统，对气流进行组织，形成定向气流，气流从洁净区向污染区方向流动，实验室排出的空气应经高效过滤器过滤后排出。364、电源1〕有稳定可靠的电力供给，最好有双路供电或备用电源，保证生物平安柜、培养箱、冰箱等重要设备的正常运行。2〕有应急照明系统3〕有在黑暗中能区分方向的标识375、实验空间有足够空间放置实验物品和器材的摆放，实验区域内有存放个人防护用品的条件。6、层高要求采用自然通风：应以2.6~2.7M为宜；采用送排风〔气流组织〕：以2.5~2.6M为宜；设备技术夹层：高度为1.2~1.5M或更高。387、开间大小以方便操作、减少浪费为原那么，大多采用3.2~4.0M之间，但以3.6M较为理想。污染区〔检测区：以15M2左右为宜；缓冲区：以2~3M2为宜；准备区〔半污染区〕：不宜过大，原那么上不能在此区域进行任何可能造成污染的实验操作。398、地面与墙面要求采用环氧树脂自流坪或PVC卷材。生物平安实验室墙体可根据实验室专业要求及投入资金状况等选用外表吸附性小、易清洗、光滑平整的材料，有条件的可优先选用厚度薄、保温性好、施工方便、牢度有保障的新型轻质板材，这些材料不仅美观平整，还可扩大实验面积，提高实验室档次、展现良好的形象，而且有利于今后实验室的改扩建。409、通风及空调带循环风的空调系统，全排风系统，负压。送排风形式：上送下排，也可采用上送上排方式；送风口和排风口的位置：一般要求送风口应设在房间入口处上方，排风口宜设在房间最里侧，使风向形成单一气流。空气净化：一般要求设立初、中、高效三级过滤器，洁净度到达7~8级，有利于延长过滤器的使用寿命和减少对实验样本的污染。4110、给排水要求给水：无特别要求；排水：实验室的废水排放必须符合环境保护要求，要设立独立的污水处理系统。11、其他要求防雷、抗震等42BSL-2实验室设备的特殊要求

在实验室所在的建筑内应配置高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。实验室内配备生物平安柜。设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。43二级生物平安防护实验室特殊微生物操作规程满足一级实验室(标准微生物操作规程)各款要求，在此根底上特别注意制定出入制度实验室入口贴上生物危险标志制定实验室特定的生物平安操作规那么每年一次最新培训制度44禁止用手处理破碎的玻璃器具。二级生物平安防护实验室特殊微生物操作规程使用塑料器材代替玻璃器材。

培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌45用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手直接从注射器取下。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒46艾滋病实验室管理47引用文件?医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原那么〔试行〕?中华人民共和国卫生部，2004年5月31日公布，2004年6月1日起实施。?实验室生物平安通用要求?GB19489-2004，2004年10月1日起实施。?微生物和生物医学实验室生物平安通用准那么〔WS233-2002〕?中华人民共和国卫生行业标准，2002-12-03发布，2003-08-01实施。GuidelinesfortheSafeTransportofInfectiousSubstancesandDiagnosticSpecimens.WHO1997.BiosafetyinMicrobiologicalandBiomedicalLaboratories,CDC/NIH,FourthEdition,1999.Update:ProvisionalrecommendationsforchemoprophylaxisafteroccupationalexposuretoHumanImmunodeficiencyVirusMMWR.1996;45:468-472,andfromBSchoub.VirusSA.1997.GuidelinestotheManagementofOccupationalExposuretoHIV.NationalInstituteofVirology.?消毒技术标准〔2002年版〕?中华人民共和国卫生部2002-11-15发布，2003-04-01起实施。48实验室生物平安级别艾滋病血清学检测〔包括筛查和确认实验室〕、免疫学和核酸检测：Ⅱ级生物平安实验室〔BSL-2〕。HIV别离、细胞培养及研究工作：Ⅲ级生物平安实验室〔BSL-3〕。49管理责任

实验室管理层对所有员工和实验室来访者的平安负责。平安负责人应制定、维护和监督有效的实验室平安方案。一个有效的实验室平安方案应包括教育、定位及培训、审核及评估、促进实验室平安行为的程序。实验室负责人应制定规定和程序确保实验室设施、设备、个人防护设备、材料等符合国家有关平安要求，定期检查、维护、更新、确保不降低其设计性能。50实验室内设置准入管理制度在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区和污染区非实验有关人员和物品不得进入实验室实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准51实验室工作人员资格和培训实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，到达合格标准，方可开始工作实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接受实验室平安教育，自愿从事实验室工作实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程52生物平安师资培训合格证和岗位资格证

53对可能的危险因素，制定保证平安的工作程序事前进行有效的培训和模拟训练对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性保健治疗的措施，足以应付紧急情况实验室事故处理及上报

54针对艾滋病检测的特殊规定55样品的采集和处理血液：包括血清、血浆和全血唾液或尿液56血清样品采集和处理用一次性注射器〔或真空采血管〕抽取一定量静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用3,000r/min离心15min，吸出血清备用。57抗凝血样品采集和处理应根据实验要求选用适当的抗凝剂：CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠；HIV病毒别离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在48h内别离PBMC和血浆，否那么应在2448h内别离血浆和血细胞。58采集样品本卷须知采集样品原那么上应按临床采血技术标准操作〔试剂盒说明书有特殊要求除外〕。采集样品时应注意平安，建议采用真空采血管及蝶形针具，以防止直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病〔AIDS〕病人血液/体液的操作,应戴双层手套。59样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期〔1周〕内进行检测的样品可存放于2-8℃。用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h那么不可检测。60样品的运送实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。61采用WHO提出的三级包装系统第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装假设干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签〔数量，收、发件人〕。62血清和血浆样品应在2

8℃条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18

23℃运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。63感染性废弃物的处理64废弃物处置应符合?实验室生物平安通用要求?〔GB19489-2004〕和?消毒技术标准〔2002年版〕?。从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，平安运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。高压蒸汽消毒，121℃，保持1520min;65艾滋病相关实验室检测66特异性实验诊断HIV抗体测定抗原测定核酸测定病毒别离CD4淋巴细胞计数67治疗前评估HIV抗体检测CD4+T细胞计数HIV-RNA检测全血细胞计数、肝功、肾功、尿常规血糖、血脂肝炎标志物检测〔HAV、HBV、HCV〕HIV－RNA>1000拷贝/ml，基因型耐药检测〔建议对进入临床关心的所有患者进行基因型耐药检测，不管是否要开始抗病毒治疗。〕PAP涂片PPD、interferon-γreleaseassay(IGRA)弓形虫抗体IgGRPR/VDRL衣原体、淋病双球菌检测－STD治疗胸部X线辅助受体嗜性〔Tropism〕检测HLA-B*5701检测68常用药物不良反响监测AZT:严重贫血-监测血常规DDI:胰腺炎－监测AMYNVP:皮疹和严重肝损害－监测肝功PI:脂代谢、糖代谢异常-血脂、血糖69HIV特殊检测实验室具体要求

及功能分区70血清学检测实验室生物平