农药薄荷脑的质量标准研究

农药薄荷脑的质量标准研究

薄莲脑注射液是指嘴唇科植物的薄荷（meshahalectalyxbirq）的新鲜茎和叶通过蒸汽蒸馏而获得的，然后是冷冻和提取的结晶。本品为无色透明棒状晶体,有薄荷的特殊香气,味初灼热,后清凉,是一种饱和环状醇。薄荷脑有清凉和抗炎作用,可作为许多中成药的君药。虽然中成药及合成制剂中薄荷脑的含量测定方法有过报道,但薄荷脑原料药的质量控制方法尚未建立。笔者采用毛细管气相色谱法对薄荷脑原料药建立了质量控制方法,并且取得满意结果。1材料和方法1.1药品、试剂与仪器GC-7890Ⅱ(上海天美)SEPU3000工作站,电子天平:SartoriusBP211D。薄荷脑化学对照品(中国药品生物制品检定所,批号0728-200005规格100mg);癸醇(中国医药集团上海化学试剂公司,色谱标准);薄荷脑原料药(湖北中医学院提供),其它试剂均为分析纯。1.2高纯氮载气系统使用FFAP(聚乙二醇20M与2-硝基对苯二甲酸的反应产物)毛细管色谱柱(30m×0.53mm×1μl);高纯氮(99.999%)为载气,载气流量:15ml·min-1,尾吹:20ml·min-1,AIR:300ml·min-1,H2:30ml·min-1,不分流进样;进样器温度:200℃;检测器:FID温度230℃:柱温:80℃保持一分钟,按每分钟升2.5℃至150℃,维持5分钟。进样量:0.50μl。1.3去薄荷香气去轻油取本品1g,加硫酸20ml使溶解,即显红色。24小时后析出无薄荷香气的无色油层(与麝香草酚的区别);取本品50mg,加冰醋酸1ml使溶解,加入硫酸6滴与硝酸1滴的冷混合液,仅显淡黄色(与麝香草酚的区别)。1.4试验品及对照品溶液的制备系统适用性试验:分别称取薄荷脑和癸醇适量,用乙醇制成每1ml含10mg的混合溶液,量取0.50μl注入气相色谱仪,记录色谱图,薄荷脑峰与癸醇峰之间的分离度大于1.5。(图1)供试品溶液的制备:取本品约1g,精密称定,置10ml量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成100mg·ml-1的供试品溶液。对照品溶液的制备:取供试溶液0.10ml至10ml的容量瓶中用乙醇稀释至刻度,制成1mg·ml-1的对照品溶液。测定:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液0.50μl注入气相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍,(图2)表明各杂质峰面积小于对照品溶液主峰面积,杂质峰面积之和占总面积的0.44%。1.5标准曲线及检测限内标溶液的制备:精密称定癸醇对照品100mg,置于10ml容量瓶中,加乙醇稀释至刻度,配制成含癸醇10mg·ml-1的内标溶液。校正因子的测定:取薄荷脑对照品100mg,置于10ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。再吸取1ml置于10ml容量瓶中,精密加入内标溶液1ml,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,取0.50μl注入色谱系统,记录峰面积计算校正因子,f=1.169,RSD=0.3%(n=3)。标准曲线的绘制:取薄荷脑标准对照品适量,配制成10mg·ml-1的标准对照品储备液。再分别吸取0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.00ml、1.10ml、1.20ml、1.30ml于10ml量瓶中,并加入10mg·ml-1的癸醇内标标准溶液1ml,用无水乙醇稀至刻度。得到浓度分别为0.70mg·ml-1、0.80mg·ml-1、0.90mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.10mg·ml-1、1.20mg·ml-1、1.30mg·ml-1系列标准溶液。各进样0.5μl,记录色谱图。采用薄荷脑峰面积与癸醇峰面积之比Y对浓度作线性回归。标准曲线:Y=0.04959+1.03707C,范围0.70mg·ml-1～1.30mg·ml-1,r=0.99986,检测限:5μg·ml-1。测定:分别取样品及标准品适量,用乙醇溶解,再加入浓度为10mg·ml-1的内标溶液(癸醇)1ml并用乙醇稀释成含薄荷脑1mg·ml-1的供试品溶液和标准品溶液,分别取标准品溶液和供试品溶液0.5μl进样,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍,采用内标对照法计算含量(见表1)。1.6标准品溶液的配制分别量取10mg·ml-1的供试品溶液0.80ml、1.00ml、1.20ml于10ml量瓶中,加入10mg·ml-1的癸醇内标标准溶液1ml,用无水乙醇稀至刻度,配成0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的溶液。另取标准品适量稀释成1mg·ml-1,制成对照液,各量取0.50μl,注入气相色谱仪,记录色谱图。重复进样3次,计算回收率及RSD(见表2)。1.7方法的精密度分别取0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的标准品溶液0.50μl,注入气相色谱仪,记录色谱图。重复进行5次,计算日内精密度。分别取0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的标准溶液0.50μl,注入气相色谱仪,重复进行4天,记录色谱图。计算得日间精密度(见表3)。1.8重复使用取同一批号样品,按含量测定方法平行测定5次,计算含量及RSD(见表4)。2结果3检测方法及结果按照药典规定进行以下实验:影响因素实验(高温试验、高湿试验、光照试验);加速试验;长期试验;酸破坏试验;碱破坏试验;氧化破坏试验;热破坏试验;光破坏试验,依照含量项下的条件,按稳定性重点考察项目检测,结果符合药典。不挥发物采用干燥失重法检测,结果符合药典要求;有