壁虎抗肿瘤作用的基础实验研究现状

壁虎抗肿瘤作用的基础实验研究现状

壁虎又名蝎子虎、龙眼草和虎科，是中国传统的肿瘤中药。根据《四川中医药》的记载，壁虎的治疗有“驱风除血积虚证治肿瘤”的记载。大量临床实践和基础研究表明，壁虎具有肿瘤作用，对胃肠道肿瘤有显著影响。尽管壁虎有明确的抗肿瘤效果,但其成分复杂、作用机制尚不清楚。本文就壁虎抗肿瘤作用的基础实验研究现状作一综述。1壁虎氨基酸测定壁虎中含有与马蜂毒相似的有毒物质及组织胺类、蛋白质。通过氨基酸含量测定壁虎中含有17种氨基酸,薄层色谱检测壁虎中含有胆固醇和硬脂酸;黄筱美等对蛤蚧与壁虎化学成分比较分析,发现壁虎醇提部分经氨基酸测定含有14种氨基酸,水溶部分经光谱分析含有18种微量元素。另有研究发现壁虎中还含有维生素、胡萝卜素、粗纤维、脂肪等。2不同制备过程中肿瘤活性药物的效率研究壁虎抗肿瘤药效学研究主要表现为整体用药和从壁虎中分离出有效抗肿瘤成分2个方面,并分别从整体动物实验和体外细胞实验2个层次来进行。2.1不同剂量壁虎粉混悬液对小鼠s180瘤生长的影响将去除内脏的干壁虎粉碎成粉末制备壁虎粉。将干壁虎粉与羧甲基纤维素混合成混悬液,配置不同浓度壁虎粉溶液。刘菲等通过建立小鼠S180肉瘤模型来观察不同浓度的壁虎粉混悬液对小鼠肿瘤的生长抑制作用,结果显示高、中、低剂量组均可抑制小鼠S180肉瘤生长,抑瘤率分别为49.8%,52.8%,43.1%;将上述不同浓度的干壁虎混悬液给大鼠灌胃,取其血清用血清药理学方法来研究其体外对细胞增殖抑制作用,结果显示干壁虎粉含药血清可抑制食管癌细胞的生长。2.2壁虎醇提物对小鼠体内肿瘤活性的影响王晓兰等使用醇沉法制备壁虎醇提物,通过建立S180实体瘤模型和体外对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用来观察其抗肿瘤活性,体内实验显示壁虎醇提物高、中、低剂量组均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%,63.94%,69.53%。壁虎醇提物体外能显著抑制EC9706细胞生长,呈一定的剂量和时间依赖性。宋佳玉等在研究壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S180肉瘤和体外对人食管癌EC-109细胞增殖的抑制作用中表明其体内体外均具有抗肿瘤活性。2.3第二,根据不同的干、鲜壁虎的使用,对移植性小鼠s180细胞增殖抑制率,一般可作用于地面治疗的抑制药操作以见表1有学者使用反复冻融、低温离心的方法制备干、鲜壁虎水提物冻干粉。杨金霞等采用昆明小鼠H22移植瘤模型观察干、鲜壁虎冻干粉体内抑瘤活性,结果显示干、鲜壁虎冻干粉低、中、高3个剂量组的抑瘤率分别为25.6%,40.0%,48.5%和20.7%,28.1%,51.1%,体内具有抑瘤活性。其含药血清在体外能够明显抑制H22细胞的增殖,干、鲜壁虎低、中、高含药血清组的增殖抑制率为17.4%,21.0%,34.5%和16.4%,26.3%,43.2%,体外对H22细胞具有杀伤活性。干、鲜壁虎冻干粉对移植性小鼠S180肉瘤的抑制作用显示不同浓度的干、鲜壁虎冻干粉灌服荷瘤小鼠10d后,均可抑制小鼠S180肉瘤的生长,且抑瘤作用相近。鲜药在干制过程中,化学成分会发生变化,从而使药物的药效优于或有别于干品。然而,有学者对壁虎鲜品和炮制品对小鼠H22肝癌细胞体内外抗肿瘤活性进行比较研究,发现二者体内外均能抑制H22细胞增殖,无显著性差异。2.4壁虎内脏提取液用清水洗净鲜壁虎,将壁虎分成皮肤、头部、肌肉骨骼、内脏、尾部五部分。另取若干只壁虎,分成内脏和去除内脏两部分,以及全壁虎若干,粉碎匀浆冻融低温离心取上清制备不同部位提取液。杨丽华等研究了该提取液对培养的H22肝癌细胞体外抑制增殖作用和对H22实体型移植瘤小鼠的体内抑制作用,体外结果显示,壁虎内脏提取液高剂量组可显著抑制H22细胞的增殖,抑制率为61.6%。体内抑瘤实验显示壁虎提取液对小鼠肿瘤生长均有一定的抑制作用,其中以全壁虎液抗肿瘤效果明显,低、高剂量抑瘤率分别为31.6%,52.1%。2.5壁虎多糖对h2细胞增殖的抑制率吴雄志等首次在国内成功地从壁虎中分离提取抗肿瘤活性成分守宫硫酸多糖。杨丽华等用MTT法检测不同浓度的壁虎多糖对H22肝癌细胞体外杀伤作用,结果显示不同浓度的壁虎多糖均可抑制H22细胞的增殖,其高剂量组抑制率达79.1%。但是通过采用昆明小鼠H22移植瘤模型观察壁虎多糖高、低剂量组的体内抑瘤活性,结果显示壁虎多糖各组均无明显抗肿瘤作用,高剂量组的抑瘤率仅为8.8%。2.6mtt法测体外生长活性采用旋转薄膜分散-超声法制备鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分生物碱脂质体,该脂质体有利于抗癌成分到达靶部位,提高生物利用度。康建功等体外用MTT法测定CT-26肿瘤细胞株的生长活性;体内实验通过建立CT-26荷瘤小鼠模型观察其体内抑瘤活性,结果显示鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分及其脂质体体内外呈时间和剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖,但抗肿瘤活性成分脂质体更为明显。2.7不同的抑制率李钦青等将干壁虎细粉匀浆后使用胃蛋白酶、胰蛋白酶、仿生酶酶解液得到相对分子质量<3000的小肽进行抗肿瘤研究,发现小分子肽对S180肉瘤、H22肝癌的抑制率为27.3%,30.1%,32.9%和26.7%,32.1%,34.0%,明显高于原粉与水煎煮液。李耀辉等对壁虎中抗肿瘤成分进行分离纯化并对其抗肿瘤效果进行研究,结果显示硅胶柱色谱所得样品对CT-26肿瘤细胞的抑制率45.50%上升为Al2O3柱色谱所得样品对HepG2肝癌肿瘤细胞的60.33%,同时对小鼠CT-26肿瘤造模的体内抑瘤实验中抑制率高达67.24%,实验表明壁虎提取物具有较好的抗肿瘤效果。3肿瘤作用机制的研究壁虎可通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管形成、诱导肿瘤细胞分化以及通过免疫调节来抑制肿瘤生长。3.1壁虎醇提物诱导工程细胞凋亡是由基因所调控的一种细胞主动死亡方式。诱导肿瘤细胞凋亡是目前许多抗肿瘤药物作用的主要机制。宋萍等采用血清药理学探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响,结果形态学、流式细胞仪和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清能够诱导C6胶质瘤细胞,其诱导细胞凋亡的机制可能与上调Bax基因有关。宋佳玉等把Fas和Caspase-3作为了解壁虎醇提物诱导食管癌细胞凋亡分子机制的切入点,发现Fas和Caspase-3蛋白的表达随着药物浓度的增加而增强,推测壁虎醇提物体外诱导细胞EC-109凋亡可能和死亡受体介导的信号通路相关。王晓兰等在壁虎醇提物对EC9706细胞增殖抑制作用基础上进一步探讨了其作用机制,发现其诱导细胞凋亡的分子机制可能与其能调控肿瘤细胞中凋亡蛋白Bax的蛋白表达,升高Bax/Bcl-2有关。提示死亡受体途径和线粒体途径均可能在壁虎醇提物诱导细胞凋亡的过程中发挥作用。3.2sp免疫组化法检测微血管密度和血管内皮生长因子肿瘤新生血管的形成是肿瘤生长、侵袭和转移的基础,抑制或破坏肿瘤新生血管的形成及生长,切断肿瘤赖以生存的“生命线”,可达到抑制肿瘤生长和转移的目的。采用Weider方法检测肿瘤组织的微血管密度,SP免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞因子(bFGF)的蛋白表达来探讨鲜壁虎冻干粉对H22肝细胞癌血管生成机制,发现其抑制H22小鼠肿瘤生长及血管生成的机制可能是通过降低肿瘤组织内bFGF,VEGF蛋白的表达而达到抗肿瘤作用。刘菲等在干壁虎粉对S180荷瘤小鼠的抑制作用中也表明干壁虎粉抑制小鼠肉瘤S180生长可能与降低肿瘤组织bFGF,VEGF蛋白的表达有关。3.3虎诱导肿瘤细胞分化诱导分化是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下,向正常分化方向逆转的现象。目前,壁虎诱导肿瘤细胞分化仅局限于肝癌细胞,主要从细胞形态、生化指标及细胞周期的改变来判定肝癌细胞分化。吴雄志等在实验中发现守宫硫酸多糖具有诱导肝癌细胞分化的作用,肝癌细胞形态由多变形变为纺锤形,且甲胎蛋白分泌量减少,转氨酶分泌量增多,流式细胞仪检测细胞被阻滞于G/M期。3.4免疫抑节作用4活性成分的分离纯化和作用机制壁虎中含有高活性、低毒的抗肿瘤成分,但目前对其研究存在诸多问题,基础实验研究尚处在粗体物水平,其抑瘤作用主要由一种成分起作用还是由多种成分协同起作用尚不清楚;对很多有效成分的化学结构尚不清楚,尚未找到完全单一的活性成分;分离纯化壁虎中抗肿瘤有效成分存在难题,如蛋白质或多肽活性成分分离难,其一是易受温度、酸碱度等的影响而变性,其二是活性成分不稳定易降解等;抗肿瘤作用的靶点和