自制新中药配方治疗烧伤的研究

自制新中药配方治疗烧伤的研究

烧伤是一种常见的损伤，近年来发病率呈逐渐上升趋势。烧伤治疗中存在创面疼痛、进行性坏死、易感染、瘢痕愈合四大难题。本研究中的新中药配方,由虎杖、栀子、白及、白芷、紫草等7味中药组成。其有效成分具有抑菌消炎、促进结痂和调节免疫功能的功效。通过动物实验探讨对新中药配方在烧伤中的疗效进行客观评价。1材料和方法1.1提纯的制备新中药配方由虎杖、栀子、白及、白芷、紫草等7味中药提纯制成,购自湖州平家大药房;美宝湿润烧伤膏(汕头市美宝制药有限公司,产品批号:1200603A);昆明种小白鼠50只,湖州市食品药品检验所提供。1.2实验方法1.2.1药渣水制备浓缩先用酒精浸泡中药,时间约为30min。30min后滤出药液,将其浓缩至饱和后倒入已消毒的杯子中,并且盖好以免挥发,同时将药渣水煎提纯浓缩至300mL。将浓缩的酒精药液与浓缩的药水倒在一起,并且搅拌均匀,测试该溶液的密度为0.94g/mL(在溶液均匀无沉淀的情况下),制成中药提取物,用已消毒的蒸馏水配出中药成品提取物浓度分别为100%、80%、60%的药品。1.2.2脱毛剂一反合利小球活化小鼠在实验期间均正常饮水,普通饮食,于试验前24h在小鼠背部涂上8%硫化钠脱毛剂,然后用生理盐水洗净脱毛区,背部脱毛面积约3cm×3cm。实验当日,先用乙醚将小鼠进行浅麻醉,用100℃恒温水通过一平底玻璃小瓶(瓶底面积为3.14cm2)分别烫伤小鼠背部皮肤,烫伤时间为17s,造成浅Ⅱ度烫伤模型。1.2.3给药及定剂量将已造成浅Ⅱ度烫伤模型的小鼠50只随机分为新配方高剂量组、新配方中剂量组、新配方低剂量组、阳性对照组和空白对照组,每组10只。新配方高剂量组为中药提取物100%组,新配方中剂量组为中药提取物80%组,新配方低剂量组为中药提取物60%组,阳性对照组为美宝湿润烧伤膏组。新配方高、中、低剂量组每只涂药0.5mL,阳性对照组每只涂药0.5g,涂药面积需超过创面2mm,需覆盖创面,厚度薄于1mm。每日定时定量给药3次,给药时间为7:30、13:00、18:30,连续20d。空白对照组除敷药外其他实验条件均与其他组相同。1.2.4计算面积计算定时观察烫伤创面的变化,如有无渗出、溃破、感染,观察各组皮肤创面结痂情况。并于烫伤后第1、5、10、15天将硫酸纸贴于创面描绘创面图形,并由纸重计算出创面面积。以第1天的创面面积作为初始面积计算各组动物烫伤后各天的留痂率、留疤率、完全脱痂只数。于用药结束后,制作病理切片。留痂率=留痂面积/创面初始面积×100%留疤率=留疤面积/创面初始面积×100%病理取材:切取各组小鼠烫伤局部皮肤组织,取材深度包括表皮、真皮、皮下组织,用4%的福尔马林溶液固定,石蜡包埋,切成5μm切片,HE染色,制成病理切片(病理切片由湖州市第一人民医院病理科制作),光镜检查,观察组织学变化。1.3统计处理计量资料以ue0af±s表示,应用SPSS12.0.1软件包,进行方差分析及SNK检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1小鼠视角组织中皮肉皮肉烫伤模型制备后,肉眼观察:皮肤外观苍白。烫伤后第1天均结痂,未发现水泡。第11天新配方中、低剂量组中各有1只小鼠创面皮肉微黄,阳性对照组中有2只老鼠创面皮肉内有黄色物质。第15天空白对照组中有1只小鼠创面有脓液渗出。2.2疗效与空白对照的比较创面留痂率(见表1)以及创面留疤率(见表2)。根据观察指标统计学SNK处理,可发现新配方低剂量组在第5天的疗效明显优于其他组(P<0.01),而新配方高、中剂量组和阳性对照组的疗效与空白对照组无差别。在第10天新配方低剂量组治疗效果优于新配方高剂量组(P<0.05),与其他实验组无差别,在第15天后,各组创面愈合与空白对照组无差别。2.3小鼠完全脱复合性的情况烫伤小鼠完全脱痂只数(见表3)。各组小鼠完全脱痂的只数随时间推移而增加,从第15天开始新配方低剂量组的小鼠完全脱痂只数明显多于其他组。从第5天开始,阳性对照组小鼠完全脱痂只数多于空白对照组,但在第15天后未超过新配方低剂量组的完全脱痂只数。2.4新中药配方的疗效烫伤部位的病理切片(见图1)。各组小鼠的烫伤经治疗后背部皮肤病理切片显示,各组小鼠皮肤表皮均覆盖有复层鳞状上皮。新配方低剂量组皮肤组织结构清晰,肉芽组织明显减少,炎性细胞渗出和小血管增生明显少于新配方高剂量组、新配方中剂量组和空白对照组,而与阳性对照组无显著差异,镜下观察见图1C。新配方高剂量组表皮因药物刺激使鳞状上皮增生而明显变厚,表皮下方结构较紊乱,可见肉芽组织增生,出现大量炎性细胞渗出和小血管增生现象,镜下观察见图1A。新配方中剂量组组织结构较清晰,肉芽组织增生包括炎性细胞渗出和小血管增生明显少于新配方高剂量组,镜下观(见图1B)。阳性对照组与新配方低剂量组无显著差异,但其表皮下方有角化囊形成,并且从病理切片看,其形成角化囊的小鼠只数明显多于新配方高、中、低剂量组,镜下观察见图1D。空白对照组中形成的表皮层较厚,表皮下方组织结构紊乱,肉芽组织增生,出现大量炎性细胞渗出和小血管增生现象,光镜下可见大量中性粒细胞,多数切片中可见表皮下方有角化囊形成,镜下观察见图1E。中草药治疗烧烫伤具有悠久的历史,中医有云:“烧伤既是伤又是疡,伤则血瘀气滞,瘀则不通,不通则痛,气滞则湿积,湿积则霉腐”。因此,治疗烫伤需做到活血化瘀,祛腐生肌。但与此同时也需要做到抗感染和抗炎的作用,否则会使创面肿痛、化脓。自制的新中药配方中,虎杖属苦寒之品,苦燥湿,寒胜热,又苦先入心,能清涤血热,可清热解毒,其含有的大黄素对创面起到良好的抗炎效果,在烧伤药中早有虎杖、虎杖鞣质及虎杖复方等多种制剂作为烧伤创面用药,具有促进结痂、抗感染等作用,能减少创面渗出,防止水分及电解质丢失,加快创面愈合。栀子中的环烯醚萜类、有机酸和色素具有镇静、降温、镇痛、抗菌和抗炎作用。白芷中的香豆精及其衍生物和挥发性成分具有抗菌、镇痛、抗炎和解热作用。白及含有的胶状物成分具有止血作用,可显著缩短凝血酶原生成时间,并加速红细胞沉降率;白及提取物的抗菌活性与其结构的关系研究发现其含有的羟基苄基化合物对金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌有抑制作用,能控制及防止感染;白及的治疗作用可能是通过神经反射机制而增强集体的防卫能力,刺激肉芽组织的增生并且可缩短凝血时间,减少出血,从而有利于创面愈合。甘草补气血以排脓,还具有补脾益气、润肺止咳、缓急止痛、缓和药性的功效,在临床上应用于脾胃虚弱、食少便溏、润肺平喘、食物或药物中毒、止痛,其药理作用在解毒、抗菌、抗肿瘤方面非常显著,而且对免疫调节、抗肝炎病毒和抗艾滋病毒也有一定的药理作用。石膏凉而能散,透表解肌,亦具有清热泻水、除烦止渴的功效,经研究其所含有的钙质可退热,含有的微量元素可调节免疫、抗病毒,还可用来镇痛消炎。紫草中含有的紫草素具有抗菌、消炎、抗病毒活性和抗肿瘤活性的作用,抑制炎症、控制水肿和抑制慢性关节炎、刺激成纤维细胞的生长以加速伤口愈合的用处,已有研究者制造紫草膜和紫草油纱来研究其在烧伤方面的疗效。据《本草纲目》记载:“是以药不具五味,不备四气,而久服之,虽暂获胜,久必致天。”这是指中药配方中应集起五味,而在新中药配方中七味药分别使该配方聚齐了五味四气。本研究通过动物实验观察自制的新中药配方治疗烧伤的疗效,新配方低剂量组在第5天的留痂率、留疤率和完全脱痂只数中,可发现其促进创面愈合的疗效优于其它各组;从病理切片中,可发现其促进创面愈合的疗效优于新配方高剂量组、新配方中剂量组和空白对照组。在小鼠烫伤用药后第5天可发现新配方高、中剂量组未显现其疗效,其留痂率与留疤率均高于新配方低剂量组,这可能是其提取物浓度过高,使经过浅Ⅱ度烫伤的皮肤受到刺激,并将药物成分当做抗原物质进行炎症反应,从而使创面在愈合过程中,因炎症反应使肉芽组织过度增生且明显高于正常皮肤水平面从而抑制了创面的愈合。在用药后第10天,新配方高剂量组与新配方低剂量组在留痂率和留疤率上的差异,也提示了过高的药物浓度可抑制创面的愈合,这在病理切片中得到了更充分的说明,新配方高剂量组的表皮因受刺激而增生,并伴有肉芽组织增生包括炎性细胞渗出和小血管增生。在第15天后,各组创面愈合与空白对照组无差别,这与浅Ⅱ度烫伤的自愈时间有关。在此实验中,阳性对照组在留痂率、留疤率和完全脱痂只数上未明显显示其阳性,可能与烫伤程度低、浓度过高等因