固相萃取-高效液相色谱法同时测定禽肉中磺胺类药物残留量

固相萃取-高效液相色谱法同时测定禽肉中磺胺类药物残留量

氨基丙烯酸药物是一种合成抗菌药物，以氨基丙烯酸为基本化学结构。具有广阔的抗菌性、稳定性、价格低廉、使用简单、能耗低等优点。换句话说，它在动物和水的营养中得到广泛的应用，对控制和治疗动物疾病起到了重要作用。但由于磺胺类药物存在严重副作用,人体食用磺胺类超标的食品后,药物进入人体产生富集,人体中长期存在磺胺类药物会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性,会导致尿路障碍、肾脏功能损害,引起过敏反应,有皮疹,药热等,还可以造成对血液系统的伤害等诸多不良反应,因此磺胺类药物成为目前无公害畜产品和水产品药物残留的必检项目。所以建立有效快速的禽肉中磺胺类药物的检测方法具有现实意义。本方法采用固相萃取-高效液相色谱法建立快速,灵敏的检测禽肉中磺胺类药物含量的测定方法,该方法经过反复实验,结果表明:磺胺分离效果好,检测时间短,重现性好,精密度高,试验所得回收率和相对标准偏差都比较理想。1实验部分1.1磺胺类药物标准品甲醇和乙睛为色谱纯。水为超纯水。正已烷、正丙醇均为分析纯,重蒸馏使用。磷酸、无水硫酸钠等均为分析纯。碱性氧化铝SPE柱。微孔滤膜0.45μm。磺胺类药物标准品:磺胺嘧啶(SD)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺地索幸(SDM)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺喹恶啉(SQ)均购于中国兽医药品监察所。7种磺胺类药物标准溶液:准确称取适量的标准品,分别用少量甲醇溶解,在用流动相配成需要的混合标准曲线。1.2设备和设备美国WATERS-1525型高效液相色谱仪,配有WATERS-2487紫外检测器。超声提取仪。振荡器。旋转蒸发仪等。1.3u3000沉淀物的提取称取5.000g绞碎的试料,置于50mL的聚丙烯离心管中,加无水硫酸钠7g和乙睛25ML,用超声振荡提取并振荡30min。用3000r/min离心5min。上清液移至分液漏斗中,加入25mL正乙烷,振摇2min后,静止5min,分离乙睛层。在用25mL乙睛将沉淀物重复提取1次,乙睛层经同一份正乙烷分配,合并乙睛层于100mL鸡心瓶中,加入正丙醇5mL,50℃减压浓缩至近干。用5mL乙腈+水(95+5)溶解残留物过碱性氧化铝SPE柱,不收集、用乙腈+水(95+5)5mL洗涤鸡心瓶,并过SPE柱,吹去柱内滞留的液体。用5mL乙腈+水(75+25)洗脱待测物至10mL容量瓶中,用0.017moL/L磷酸定容至10mL,用0.45μm微孔滤膜过滤,收集滤液作为试液,上机测定。1.4磷酸+乙腈梯度洗脱色谱柱:菲罗门C18反相柱,250mm×4.6mm,粒径5μm。流动相:0.017mol/L磷酸+乙腈梯度洗脱。流速:1mL/min检测波长:270nm进样量:20μL2结果与讨论2.1色谱图在上述的色谱条件下,得到标准溶液,从图1中可知,在所采用的色谱条件下,目标组分得到了很好的分离。2.2标准曲线的比较对系列浓度的标准溶液进行HPLC测定,得到标准曲线,从表1可以看出7种药物在0.05～1.0μg/ml之间均有良好的线性关系,相关系数R均较为理想。2.3回收率及精密度在不含磺胺类药物的样品中进行添加标准样品进行回收率和精密度实验,样品分别添加0.050、0.100、0.200、0.250、0.500μg/ml5个浓度水平的磺胺药物标准溶液,摇匀后,按照样品前处理法进行提取和净化,高效液相色谱测定。从表2看出其中5个添加水平回收率为81.6%～95.1%,相对标准偏差为。回收率值相对较高,相对标准偏差较低,方法的重现性较好。3磺胺类药物的回收率对不同禽肉的样品,在不同的浓度条件下进行了不同水平的添加,分别进行了7种磺胺类药物的添加回收率实验,