温郁金倍半类化学成分及指纹图谱研究

温郁金倍半类化学成分及指纹图谱研究

姜科生姜属植物温郁金属、高.扰动和励磁物质。c.lighter是一种三醇中药植物。干燥的根为郁金香，干燥的根为假指甲，干燥的根为鲜绿色。这些物质在蒸汽中提取的翠盛物元通常被称为焕叶油。温郁金主产于浙江瑞安,为著名的“浙八味”之一,现代药理及临床研究表明,温郁金具有抗肿瘤、降血脂、抗辐射及保肝等多种药理活性。为了更好地控制温郁金的质量,笔者现围绕其主要化学成分的含量测定及指纹图谱研究作一综述。1主要化学成分1.1倍半类化合物倍半萜类是温郁金挥发油的主要活性成分,到目前为止,已分离得到约40多个倍半萜类化合物,常见的有吉马酮、莪术二酮、莪术酮、莪术醇、牻牛儿酮等。1.2姜黄素类化合物姜黄素类化合物是温郁金中另一类重要成分,主要指二苯基庚烃类化合物,也包含个别戊烃类化合物,根据苯环上有无羟基可分为酚性和非酚性两类。目前已经分离并鉴定了19个姜黄素类化合物,其中以姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素最为常见。结构见图1。2主要成分含量的测定2.1高效液相色谱法研究温郁金的挥发油俗称莪术油,是其最重要的活性成分之一。近年来,随着其药理活性的深入研究,越来越多的学者运用先进的分析仪器和分析方法对其含量进行测定,文献报道的高效液相色谱(HPLC)法较多。2.1.1挥发油及温郁金含量测定潘氏等参考《中华人民共和国药典》(以下称“《药典》”)方法测定温郁金不同部位:温莪术(主根茎)、姜黄(侧根茎)、温郁金(块根)、温郁金叶、温莪术鲜芽挥发油含量,采用HPLC法测定挥发油中莪术醇含量,发现温莪术提油率和莪术醇含量均较高,而温郁金提油率虽较低,但油中莪术醇含量较高,宜研究利用。另外,潘氏等还参照《药典》法提取温莪术鲜品中的挥发油并测定其不同生长时期的含油量,并运用RP-HPLC法测定挥发油中莪术醇含量。结果表明,不同生长期的温莪术鲜品中挥发油含量在0.471%~0.820%(g/g)之间,挥发油中莪术醇含量在0.862%~1.380%(g/g)之间。研究表明,生长期长的温莪术中挥发油及油中莪术醇的含量均高于生长期短的温莪术,表明生长期的长短会影响温莪术中挥发油和莪术醇有效成分的积累。何氏等采用HPLC法测定温莪术和温郁金中牻牛儿酮的含量,建立的方法简便易行,其中主根茎中牻牛儿酮的含量高于块根,可作为温莪术、温郁金药材的质量控制方法。李氏等首次采用HPLC法测定不同郁金中吉马酮和莪术二酮的总量,发现瑞安沙洲村一组吉马酮和莪术二酮的总量是二组的2倍多,这为郁金类药材质量控制提供了一定的理论依据。2.1.2醋酸乙酯的分离纯化根据挥发油成分的特性,近年出现了运用气相色谱(GC)法及气相-质谱(GC-MS)法测定温郁金中挥发油含量的报道。朱氏等采用毛细管气相色谱法测定温郁金中吉马酮的含量,提取挥发油时在侧管加入2mL醋酸乙酯提取结果较理想,而以HP-5毛细管柱分离效果最好。CaoJie等分别采用不同的提取方法,以水蒸气蒸馏、固相微萃取、顶空液相微萃取对温郁金挥发油进行提取,提取物采用GC-MS测定。结果表明,固相微萃取与传统的水蒸气提取结果一致,而且固相微萃取时间短,所需样品少,能够更简便地测定挥发油。顶空气相微萃取采用在线提取、在线测定,不仅结果可信,而且成本低、萃取剂的选择空间大、所需样品少,且可以直接利用药品粉末,使其成为最快速的测定方法。DengChunhui等采用微波萃取技术提取样品,然后用顶空气相方法进行含量测定,分析温郁金中挥发性成分的含量,为药材质量控制提供了一种更简捷环保的方法。2.2去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素姜黄素类作为姜黄属植物的特色成分,以姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素最为常见。近年来,国内外对温郁金姜黄素类化合物的研究非常活跃,所见文献报道含量测定方法也主要集中于此3种。2.2.1姜黄素类化合物的提取朱氏等采用HPLC法对莪术3种不同来源的不同炮制品中姜黄素含量进行了测定。结果表明,4种炮制品中醋莪术中姜黄素含量最大,其中又以温郁金中姜黄素含量最高,为温郁金炮制工艺和质量控制提供了依据。彭氏等用HPLC法测定了姜黄、莪术、郁金中姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素3种主要姜黄素类化合物含量,选择姜黄素类化合物的最大吸收波长420nm作为检测波长,灵敏度高,干扰少。刘氏等确立了郁金中姜黄素的优化提取条件,即用15倍药材量的60%乙醇回流提取1h,提取1次。建立了姜黄素的HPLC含量测定方法,精密易行,为寻找提取郁金药材中姜黄素类化合物的最佳工艺提供了依据。2.2.2氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素的合成薛氏等借助于环糊精衍生物单-6-O-苯基胺甲酰基-β-CD,利用毛细管区带电泳法对郁金中所含的姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素3种姜黄素类化合物进行了分离研究和含量测定。最佳试验条件是,硼砂缓冲液浓度为40mmol/L、pH9.0、单-6-O-苯基胺甲酰基-β-CD的浓度为9mmol/L。3种姜黄素类化合物得到基线分离,测得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量分别为0.40%、0.57%和0.31%。3指纹谱3.1指纹图谱的建立及相似度评价色谱方法是指纹图谱的主流方法。陈氏等根据温郁金所含化学成分的特性,用6批温郁金药材得到GC图谱,通过国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”,提取出药材的共有模式作为对照指纹图谱,共有22个色谱峰是6批药材所共有的,以此确定为共有指纹峰。GC指纹图谱共有模式的建立,为控制温郁金药材质量提供了一种新的思路。杨氏等运用GC-MS分析了3种基原的18个莪术样品,所得图谱采用“中药色谱指纹图谱计算机相似性评价系统软件”进行模式分析及相似度计算。通过质谱数据与文献对照检视出主要特征峰成分,并根据主要特征成分对18个样品进行SPSS聚类分析。基于聚类分析结果,建立了温郁金和蓬莪术的指纹图谱共有模式。王氏等采用GC色谱法建立指纹图谱,并用GC-MS法确定指纹图谱特征峰,采用指纹图谱全谱相似度计算方法评价指纹图谱的相似性。通过GC-MS定性出18个成分,以黄丝郁金的指纹图谱为对照图谱,按占总峰面积2%以上的吸收峰的丰度确定8个吸收峰为郁金指纹图谱的特征峰。邹氏等通过自身正交投影法对温郁金挥发油HPLC指纹图谱的峰纯度进行了鉴定,用目标色谱峰的光谱进行投影,以投影前后光谱的夹角余弦作为依据来鉴别目标色谱峰纯度,识别出吉马酮等2个纯色谱峰。李氏等从药材整体色谱图入手,首次建立了温郁金HPLC指纹图谱,选取了11个特征峰构成了温郁金的指纹图谱,指认出4号峰为莪术二酮,8号峰为吉马酮。刘氏等采用HPLC法,以牻牛儿酮为对照,通过对19批浙江不同产地温郁金样品测定,标定了14个共有峰,并通过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”和聚类分析等辅助手段,建立了浙江产温郁金挥发油的HPLC指纹图谱。3.2郁金的各种鉴定方法黄氏等采用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)对不同品种的郁金进行直接测定,并进行聚类分析;采用差热分析法(DTA)对4种样品进行分析研究。FTIR聚类分析结果显示,4个样品被分为2组,温郁金、黄丝郁金及桂郁金为一组,川郁金单独为一组;差热分析结果显示4种药材的DTA曲线均有区别,可以建立用FTIR/聚类分析及结合DTA对郁金的不同品种进行鉴定。宿氏等建立了FTIR鉴别姜黄属4种常用药材姜黄、黄丝郁金、绿丝郁金、莪术,以乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚提取,提取物用氯仿充分溶解后,采用液膜法分别测定400~4000cm范围内各提取物的红外吸收光谱,依据各药材的各自特征吸收峰鉴别各药材。3.3基于rapd和ssap的温郁金亲缘关系研究王氏等在提取纯化温郁金DNA的基础上,利用PCR扩增技术,对Mg2+、dNTP、模板DNA、引物、Taq聚合酶等反应条件进行优化,建立了温郁金基因组DNA的RAPD-PCR最佳反应体系;另外,还对蓬莪术、广西莪术和温郁金共8个居群的37个样本ISSR-PCR分析,用POPGEN32软件分析其遗传相似系数及遗传距离,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图。陈氏等结合化学和形态资料,对温郁金和川郁金进行了RAPD研究,探讨用RAPD技术解决川郁金和温郁金的植物和药物分类存在的问题和争议。冷氏等采用SRAP分子标记技术对不同产地温郁金样品进行了基因组DNA多态性分析,构建出不同产地温郁金的DNA指纹图谱,探讨利用SRAP技术在温郁金亲缘关系研究中的可行性。该试验研究的对象涉及范围较广,基本上涵盖了目前全国温郁金的主要种植地区。从研究结果来看,温郁金不同产地样品间的遗传相似系数均在0.89以上,表明各样品间的亲缘关系近,遗传变异小,较为保守。陶氏等曾利用ISSR标记对温州地区的温郁金主要种植区进行了遗传多样性研究,表明其亲缘关系较近,遗传稳定,与上述研究结果一致。4中药质量的评价与检测现行的温郁金质量控制方法中只考虑众多复杂成分中个别成分的含量测定,至今为止还没有一种方法同时测定温郁金中挥发油和姜黄素类成分。单指标成分含量测定不能反映药材有效成分整体的协同作用,未把各中药材所含的整体化学信息与其临床疗效相结合,难以准确反映中药材的质量。目前,多指标成分同时测定越来越成为当今国际流行的中草药