药用植物鸦胆子全组分和水提组分的急性毒性实验研究

药用植物鸦胆子全组分和水提组分的急性毒性实验研究

这是清朝赵学敏从草图中总结的内容。这是苦木科植物苦木（l.）的干燥成熟果实。目前，苦木内部成分和喜胆子油的有效成分。中医认为,鸦胆子苦、寒,归大肠、肝经,有清热解毒、止痢、截疟、腐蚀赘疣之功,常用于热毒血痢、冷积久痢、各型疟疾及鸡眼赘疣。现代研究有杀虫、抗肿瘤等作用,临床上主要用于寻常疣、扁平疣及多种恶性肿瘤晚期。本实验对鸦胆子全组分、水提组分、醇提组分进行了急性毒性反应的考察,为进一步研究鸦胆子的毒性成分提供参考。1实验材料1.1药物和试剂鸦胆子(FructusBruceae),购自四川新荷花中药饮片有限公司,批号:0905078;乙醇等试剂均为分析纯。1.2动物健康昆明种小鼠,SPF级,体重(20±2)g,由山东大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(鲁)20090001。2实验方法2.1提取液用量及生药量的确定取鸦胆子50g粉碎,过80目筛,即得鸦胆子全组分(批号:2009062601)。取鸦胆子药材150g两份,分别加10倍量水和10倍量95%乙醇加热回流提取3次,1小时/次,合并滤液,分别浓缩制得生药量为2.479g·mL-1的鸦胆子水提组分(批号:2009062602)和生药量为3.947g·mL-1鸦胆子醇提组分(批号:2009062701)。加蒸馏水配制成一定浓度的药液备用。2.2醇提组分剂量对小鼠的影响根据预实验结果,鸦胆子全组分、水提组分、醇提组分均可测出小鼠的口服LD50。三个组分正式实验均设五个剂量组,全组分剂量分别为4.5g·kg-1、3.83g·kg-1、3.25g·kg-1、2.76g·kg-1、2.35g·kg-1(r=0.85),水提组分剂量分别为6.2g·kg-1、5.08g·kg-1、4.15g·kg-1、3.41g·kg-1、2.79g·kg-1(r=0.82),醇提组分剂量分别为4.93g·kg-1、3.94g·kg-1、3.16g·kg-1、2.52g·kg-1、2.02g·kg-1(r=0.8)。取昆明小鼠320只,按体重随机分成16组(空白对照组和15个药物组)。小鼠禁食不禁水12h后,按25mL·kg-1体积灌胃给药1次,空白组给以等体积的蒸馏水。各组给药后,每盒5只,正常饲养,连续观察14d:药后30min内,连续观察;药后30min~2h,每15min观察1次;药后2h~4h,每30min观察一次;药后4~8h,每1h观察1次;药后8~24h,每4h观察1次;给药后第二天起,每天观察1次,记录小鼠的毛色、精神、动度、进食、饮水等一般情况、中毒症状及死亡情况。3结果3.1灌胃浚营造药物对小鼠的毒性反应鸦胆子全组分混悬液给小鼠灌胃急性毒性症状见表1,灌胃后不同时间的累计死亡数见图1,各组存活小鼠体重变化见图2。根据各药物组小鼠死亡率,用Bliss法计算鸦胆子水提组分小鼠口服LD50,结果见表2。表1结果表明:小鼠灌胃鸦胆子全组分20h后才出现怠动、腹泻、紫绀等毒性反应,且毒性症状的发生率呈现一定的剂量相关性,以上症状于药后72h开始逐渐缓解、消失。由图1可看出,鸦胆子全组分药物组小鼠于药后24h开始出现死亡,所有小鼠死亡都发生在药后72h内,药后72h药物组小鼠死亡率分别为100%、75%、55%、35%、5%。由图2可看出:给药一天后(1d)空白组小鼠体重有所增加,药物组体重则均有不同程度的降低,给药后第二天(2d)药物3、4、5组小鼠体重开始回升,给药后第三天(3d)药物2组小鼠体重也开始回升。表2结果可见鸦胆子全组分按生药量计算灌胃给药的LD50=3.14g·kg-1,95%可信限为(2.9384~3.3489)g·kg-1。3.2单次给药后小鼠的急性毒性变化鸦胆子水提组分给小鼠灌胃后急性毒性症状见表3,灌胃后不同时间的累计死亡数见图3,各组存活小鼠体重变化见图4。根据各药物组小鼠死亡率,用Bliss法计算鸦胆子水提组分小鼠口服LD50,结果见表4。表3结果表明:鸦胆子水提组分给小鼠灌胃后,药物1、2、3组均出现明显的毒性反应,毒性症状主要有腹泻、尾部紫绀、怠动,毒性症状出现时间均在给药18h后,药物3组毒性症状发生频率较低,且在药后24h开始缓解、消失,药物1、2组几乎所有小鼠均出现以上毒性症状,药后48h症状消失。由图3可看出,各药物组小鼠均出现死亡,死亡时间均在给药24h后,各组小鼠死亡率分别为100%、80%、50%、30%、5%。由图4看出:给药一天后(1d)空白组小鼠体重有所增加,药物组体重则均有不同程度的降低,给药后第二天(2d)药物3、4、5组小鼠体重开始回升,给药后第三天(3d)药物2组小鼠体重也开始回升。表4结果可见鸦胆子水提组分按生药量计算灌胃给药的LD50=4.023g·kg-1,95%可信限为(3.7256~4.3366)g·kg-1。3.3给药后小鼠的急性毒性及体重变化鸦胆子醇提组分给小鼠灌胃急性毒性症状见表5,灌胃后不同时间的累计死亡数见图5,各组存活小鼠体重变化见图6,根据各药物组小鼠死亡率,用Bliss法计算鸦胆子水提组分小鼠口服LD50,结果见表6。由表5看出:药物1、2组小鼠于药后20h开始出现怠动、腹泻、尾部紫绀等症状,药后72h以上症状开始逐渐消失。药物3、4、5组小鼠均未见上述症状出现。由图5可看出:小鼠灌胃鸦胆子醇提液后,药物1、2、3、4组均出现死亡,所有小鼠死亡均发生在给药后24~72h,药物各组死亡率分别为90%、65%、50%、25%、0%。图6结果显示:给药后第一天(1d)空白组小鼠体重有所增加,药物组体重明显降低,给药后第二天(2d)药物3、4、5组小鼠体重开始回升,给药后第三天(3d)各药物组小鼠体重均呈增长趋势。表6结果可见鸦胆子醇提组分按生药量计算灌胃给药的LD50=3.3198g·kg-1,95%可信限为(3.0252~3.6612)g·kg-1。4单次给药毒性成分鸦胆子属于清热解毒药,中医认为此类药“易伤脾胃,中病即止”。近年来,鸦胆子及其制剂用于各种恶性肿瘤晚期和疣类疾病的治疗,疗效明显,但过敏、水泻、肝损害等临床不良反应报道日益增多,这影响了鸦胆子的临床安全、有效应用。本实验研究发现,鸦胆子全组分、水提组分、醇提组分的小鼠口服LD50分别为3.14g·kg-1、4.023g·kg-1、3.3198g·kg-1,此结果表明鸦胆子全组分毒性最大,水提组分最小,鸦胆子的毒性成分既有水溶性的又有醇溶性的。鸦胆子主要化学成分有:鸦胆因A、B、C、D、E、F、G、H、I等苦木内酯类化合物和鸦胆子苦醇、鸦胆子素等醇溶性成分和鸦胆子苷等水溶性成分。文献研究报道水溶性的鸦胆子苷、双氢鸦胆子苷是鸦胆子的主要毒性成分,本实验中发现水提组分的LD50为4.023g·kg-1也表明了鸦胆子水提组分具有较强的急性毒性。由本实验结果可见,鸦胆子醇提组分对小鼠急性毒性大于水提组分,但其中的致毒成分并不明确,也未见有相关报道。鸦胆子全组分对小鼠的急性毒性比水提组分和醇提组分大,提示我们鸦胆子中可能含有热不稳定的毒性成分,在提取过程中被破坏。全组分、水提组分、醇提组分对小鼠的急性毒性反应均有腹泻和尾部紫绀,且呈现一定的剂量相关性。剧烈腹泻导