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文档简介

免疫荧光双染光染色。双重免疫荧光标记法(double冰冻切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤固定10min，待丙酮完全干后于PBS（PH7.4）中），3、?破膜：切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液育20min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每4、?加试剂1,2：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂5、?BSA封闭:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，8、?DAPI复染细胞核：切片用PBS（PH7.4）洗外激发波长330-380nm，发射波长420nm；FITC绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555?nm；CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm）石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤Ⅱ15-20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸），育20min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每4、?加试剂1,2：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1?(TdT)?和试剂2(dUTP)按2:29混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于5、?BSA封闭:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，6、?加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸7、?加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每8、?DAPI复染细胞核：切片用PBS（PH7.4）洗涤3次，每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。外激发波长330-380nm，发射波长420nm；FITC绿光激发波长465-495nm，发

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