微生物学-实验1普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件

试验一

普通光学显微镜使用及细菌形态观察主讲:文晴生命科学学院第1页试验课要求作图要求：试验汇报要求用蓝色或黑色钢笔、圆珠笔或签字笔撰写，要求用铅笔作图（包含视野、观察结果、放大倍数等；值日要求：每四人一组，包含物品归位、黑板、地面、台面等，值日结束后经老师同意方可离开。第2页9/16/2023一、试验目标了解显微镜结构和各部分作用，掌握显微镜使用方法学习并掌握油镜原理和使用方法了解并观察细菌三种基本形态第3页目镜镜筒转换器物镜通光孔聚光器压片夹反光镜镜座粗准焦螺旋细准焦螺旋镜臂镜柱载物台机械部分和光学部分普通光学显微镜结构可分为两部分：一、普通光学显微镜基本结构第4页二、试验原理：显微镜工作原理◆物镜上标识

显微镜总放大倍数=物镜放大倍数X目镜放大倍数第5页油镜放大倍数可达100×，放大倍数这么大镜头，焦距很短，直径很小，但所需要光照强度却最大。由低倍镜转为高倍镜时，经过增加照明强度和开大虹彩光圈，以增大高倍镜及油镜下视野亮度。第6页

从标本玻片透过来光线，因介质密度不一样（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入光线较少，物像显现不清。为了不使经过光线有所损失，在使用油镜时需在油镜和玻片之间加入与玻璃折射率相仿镜油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了视野进光量，从而使物象愈加清楚。第7页显微镜分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指显微镜能区分两点之间最小距离能力。从物理学角度看，光学显微镜分辨率受光干涉现象及所用物镜性能限制，可表示为：式中：D=显微镜分辨两点间最短距离λ=光波波长（平均0.55m)

NA=物镜数值孔径值。◆显微镜性能第8页

数值孔径则取决于物镜镜口角和玻片与镜头间介质折射率，可表示为：NA=n·sin(α/2）

n:物镜和被检标本间介质折射率：镜口角。物质折射率物质折射率空气1亚麻油1.47水1.33石蜡油1.487甘油1.487香柏油1.515玻璃1.52丁香油1.535冬青油1.536浓松节油1.542以香柏油为介质油镜所能到达数值孔径（NA普通在1.2～1.4）要高于低倍镜、高倍镜等物镜（NA都低于1.0）。数值孔径通常在0.65左右高倍镜只能分辨距离大于0.4μm物体，而油镜分辨率却可到达0.2μm左右。第9页三、试验器材1、标本片：四联球菌、枯草芽孢杆菌2、试剂：香柏油、二甲苯3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等第10页四、试验步骤

1、显微观察步骤

1）低倍镜观察（10×）：

2）高倍镜观察（40×）：

3）油镜观察（100×）：2、显微镜用毕后处理第11页低倍镜操作右手握住镜臂，左手拖住镜座，将显微镜放在自己身体前方，离试验台边缘10cm左右处；接通电源，打开显微镜电源开关；3.旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方；4.调整光源强度，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀；5.将标本放在载物台上，旋转推进器，使观察目标物置于圆孔正中央；6.转动粗准焦螺旋，上升载物台至距离物镜约0.5cm（注意：眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰）；7.左眼观察目镜，调整粗、细准焦螺旋直至目标物清楚为止。第12页高倍镜操作转换物镜。旋动转换器将低倍镜换成高倍镜（注意：在转换物镜时要从侧面观察，以防镜头与标本片相撞，假如高倍镜触及标本片，应马上停顿旋转，并重新用低倍镜调焦）；调焦。调整光圈，使光线亮度适当，再调整细准焦螺旋直至目标物清楚；观察。移动推进器，找到适当目标物，并移至视野中心进行观察。（假如用高倍镜未能看清目标物，则可换用油镜观察）第13页油镜操作1.转换油镜。调整粗准焦螺旋，下降载物台约2cm，转换油镜镜头；2.加香柏油。在标本片镜检部位滴一滴香柏油；从侧面注视，用粗准焦螺旋迟缓上升载物台，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片；3.调焦。上升聚光器，将虹彩光圈开大，使光线充分照明；迟缓调整细准焦螺旋，直至物像清楚。4.观察。多观察几个视野，选取菌体分布均匀视野进行菌体形态和排列方式观察。第14页2、显微镜用毕后处理将光强调整至最弱关闭电源开关拔掉电源插头下降载物台

取洁净擦镜纸拭去镜头上香柏油

取洁净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留油迹

取洁净擦镜纸擦去残留二甲苯

将显微镜各部位还原，物镜转成“八”字形，擦洁净镜体，罩上防尘罩。第15页五、试验数据及处理结果

绘出你在油镜下观察到两种细菌形态及其不一样细菌细胞排列方式。四联球菌（10×100）

杆菌120（10×100）第16页六、思索与讨论

用油镜观察时应注意哪些