细菌的分离纯化和接种实验

环境科学与工程学院实验中心实验题目细菌得分离纯化与接种实验实验类别综合实验环境温度:湿度:同仪器:无菌小试管8支、盛无菌水得锥形瓶1个、盛无菌基础培养基得锥形瓶1环、煤气灯、无菌培养皿10套试剂:无菌水、无菌基础培养基、未知菌种、酵母菌、羽毛溶解菌、湖水三、实验原理从混杂得微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物得过程称为微生—培养(平板倒置)—挑菌落;平板划线法步骤:倒平板(标记培养基名称)－制备湖培养斜面:试管中加培养液(标记培养基名称)—斜放试管制斜面-选取菌种—实验原理问答题:答:因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中得微生物分散开,使其成单个个体/答:第一,为了防止重力对菌落得生成产生影响;第二,为了防止培养基中得水分蒸3。微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面？答:⑴划线接种,涂布接种,穿刺接种,三点接种,浇混接种,液体接种,注射接种,活体⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理,接种过程必须在煤气灯旁进行,接种环、玻璃涂棒等器具要过火处理,把所要用到得器材与菌种培养基有序编号放置,操作时应避免已经灭菌处理得材料用具与周围得物品得接触,往培养基就是划线或点菌时动作要轻以防把培养基划破等、四、实验步骤1、制备细菌稀释液:ﻭ使用5ml移液管加4.5ml无菌水放入贴有10—3、10—4、0。5ml放入贴10－4标签得小试管中,吸洗三次以混轻轻地拨出,瓶口保持对着火焰;另一人拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝,迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿,使培养基均匀分布在培养皿底3、湖水中微生物含量得测定:ﻭ分别从10－4、10-5、10—6土壤稀释液中,用各自4、空气、自来水中细菌含量得测定:在一个平板中,加入0.2ml得自来水,摇晃并涂布均匀,并做一组平行样;打开一平将灼烧灭菌得接种环插入菌种管内,先接触无菌苔生长得培养基上,待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出,接种环不能通过火焰,应在火焰旁迅速插入接种管。在棉塞、再重新仔细灼烧接种环后,放回原处,并塞紧棉塞。将接种管贴好标签五、实验注意事项六、思考题1、氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillusferrooxidans,广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉与沉积硫内,尤以金属硫化矿与煤矿等酸性矿坑水(pH〈4)中最为常见、其化能自养,专性好氧,嗜酸,革兰氏阴性,,主要利用利用CO2为碳源,并吸收氮、磷等无机营养来合成自身细胞。请思考其athen0mL,加入盛有100mL灭菌9K或Leathen液体培养基得250mL锥形瓶中,在30℃,120r/min得空气浴恒温摇床中培养,直至锥形瓶中得溶液变为红棕色,一般需4天。反复几次。然后采用固体培养基稀释凸起状小菌落(d≈1mm),将单独小菌落挑起,每个小菌落分别接体培养基得小试管中,以棉球封口,培养条件同上,直到小试管得液体颜色也变成红棕色、重复在液体培养基中扩大培养与在平板上反复分离,最后分离出优良菌具体方法二:取菌液1mL,用pH=2.5得稀硫酸按每次稀释10倍,依次稀释成-1—2,10—3,10-4,10—5,10-6浓度得稀释液。吸取稀释度为10－4,10-5,10-6稀释样各0。2mL,分别接种到三个事先准备好得灭菌9K琼脂固体培养基,涂布均匀,正置于30℃恒温培养箱中静置培养,次日倒置继续培养,直至固体培养基表面出现圆形凸起状小菌落(d≈1mm),一般需两周、将单独小菌落挑起,每个小菌落分别接种到装有5mL9K液体培养基得小试管中,以棉球封口,放在30℃摇床2、某果园业主想知道其果园土壤中得微生物数量,请帮助设计方案(详细说明)、释度得溶液,在基础培养基上以平板涂布法培养后数菌落数,然后乘上稀释倍数,答:液体石蜡保藏法(将灭菌液体