丹莪妇康胶囊对小鼠耳廓微循环的影响

丹莪妇康胶囊对小鼠耳廓微循环的影响

丹桂仙康膏是中药的一种复方制剂。它由紫丹参、莪术、竹叶柴胡、三七、赤芍、当归、三棱、香附、延胡索和甘草组成。具有活血化瘀、舒肝理气、调经止痛、软硬度和转化积。前期研究结果表明,丹莪妇康胶囊对子宫内膜异位症大鼠具有较好的治疗效果,能抑制异位内膜的生长,其作用强度与原剂型丹莪妇康膏相当,此外,尚具有抗血小板聚集作用,但是否具有改善微循环的功效未见报道,为此,本实验观察了丹莪妇康胶囊对小鼠耳廓微循环的影响,现报道如下。材料和方法1药物和试剂1.1药临床用量由昆明滇虹药业有限公司提供,批号:030711,规格0.33g/粒,原料药每克相当于生药16.7g,临床推荐用量每次4~6粒,每天2次,按成人60kg体质量计算,临床用量为0.066g/kg(相当于生药量1.1g/kg)。临用前用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制成不同浓度备用。1.2药物治疗用量由昆明滇虹药业有限公司提供,批号:060307。成品规格:100g/瓶,每克煎膏相当于生药2.20g,用量:口服,每次10~15g,每天2次,共20~30g(相当于原生药44~66g)。按成人60kg体质量计算,临床用量为0.5g/kg浸膏(相当于生药量1.1g/kg)。临用前用0.5%CMC-Na配制成不同浓度备用。1.3盐酸乙醇注射液由广州白云山明兴制药有限公司提供,批号:060201,规格1mg/ml,临用前用生理盐水配制成适宜浓度备用。2动物许可证及饲养管理条件健康ICR小鼠,由昆明医学院实验动物中心提供动物生产许可证号:SCXK(滇)2005-2008,饲养管理条件:室温为(20±2)℃,相对湿度60%~70%。3实验动物与仪器ICR小鼠50只,体质量18~22g,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分别为:溶媒对照组、丹莪妇康胶囊低、中、高剂量组和丹莪妇康煎膏组,分别灌胃给予等体积溶媒(0.5%CMC-Na)、丹莪妇康胶囊1.0、2.0、4.0g/kg(相当于生药量16.7、33.4和66.8g/kg,为临床推荐剂量的15、30和60倍)和丹莪妇康煎膏15.18g/kg(相当于生药量33.4g/kg,为临床用量的30倍),均按20ml/kg每天给药2次,连续5个剂量。实验前每鼠右耳用8%硫化钠脱毛,再用温水洗净,24h后进行实验。25%乌拉坦2.5g/kg腹腔麻醉动物,参照文献方法将小鼠固定在观察台上(耳托上和耳廓表面滴加少许香柏油),用XSZ-hs7型微循环显微镜(中国重庆)和BI-2000医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)观察小鼠耳廓微循环。记录灌胃给药后0、5、10、20、30min及腹腔注射(ip)盐酸肾上腺素注射液(l.0mg/kg)后0、5、10、20和30min小鼠微循环细静脉、细动脉的管径,再分别以0min时的管径为基数,各时间点时的管径与基数的差值作比较。4丹不同药物对小鼠耳廓微循环的影响实验数据用差值均数±标准差表示,并采用SPSSforWindows11.0软件进行统计学分析(LSD-t检验)。给予丹莪妇康胶囊后,高剂量的丹莪妇康胶囊(4.0g/kg)小鼠耳廓的微动脉和微静脉管径明显增大(图2:A、B,见封3),与溶媒对照组比较(图1:A、B,见封3),有显著统计学差异(P<0.05,0.01);而丹莪妇康膏有扩张小鼠微动、静脉的趋势(图3:A、B,见封3),但未达到显著统计学差异(表1,2)。腹腔注射肾上腺素之后,溶媒对照组小鼠耳廓微动脉明显收缩(图1:C,见封3),与注射肾上腺素之前相比有显著差异,微静脉也有收缩趋势,提示肾上腺素造成了小鼠耳廓的微循环障碍;丹莪妇康胶囊能明显减轻肾上腺素所致的微动静脉的收缩,对微动脉的舒张作用更强(图2:C,见封3),与同时间点的溶媒对照组比较有显著差异(P<0.05,0.01),与等临床用量的丹莪妇康膏相比(图3:C,见封3),无显著性差异(表3,4)。肾上腺素(adrenaline,epinephrine,AD)是肾上腺髓质的主要激素,其生物合成主要是在髓质嗜铬细胞中首先形成去甲肾上腺素,然后进一步经苯乙胺-N-甲基转移酶(phenylethanolamineN-methytransferase,PNMT)的作用,使去甲肾上腺素甲基化形成肾上腺素。肾上腺素是α、β受体激动剂,皮肤、黏膜及腹腔内脏血管尤其是微动脉和微静脉分布着大量的α受体。肾上腺素与受体α1结合后,激活了与磷脂酶相连的鸟苷酸调节蛋白(Gq),形成αq-GTP。此α亚单位激活磷脂酶C,磷脂酶C催化膜的二磷酸磷脂酰肌醇(5P2)裂解,产生三磷酸肌醇(IP3)和二酰基甘油(DAG)。IP3促使细胞内贮存钙释放为游离钙,胞质钙浓度增加,激活钙依赖性蛋白激酶,接着它的底物磷酸化,最终引起细胞功能性反应,即表现出明显的缩血管作用。活体微循环观察是研究微循环血流动力学最重要也是最基本的方法,文献报道多采用拟肾上腺素药造模研究微循环的变化情况。在本试验条件下,腹腔注射肾上腺素后,小鼠耳廓微动脉明显收缩,微静脉也有收缩趋势,造成了局部的微循环障碍。而后给予丹莪妇康胶囊,能明显减轻微血管的收缩反应,改善了肾上腺素所致的微循环障碍,提示丹莪妇康胶囊对肾上腺素诱导的小鼠耳廓微循环障碍有改善作用,但影响肾上腺素致血管收缩是因为拮抗作用还是因为影响了磷酸化过程中的某个环节还有待进一步研究。据报道紫丹参水溶性成分如丹参素具有抑制体外血栓形成作用和抑制血小板聚集作用,当归的有效成分之一丁基苯酞有改善软脑膜微循环的作用。此外,丹莪妇康胶囊灌胃给药后,