制备色谱参考资料

一.背景•与蒸馏、萃取比较，制备液相是更有效的分离方法•广泛用于样品和产品的提取和纯化•用于合成、植化、生化和制药等领域二.制备HPLC应用领域成份量所在领域微克生物酶毫克结构描述和鉴定克对照品千克工业规模三.分析和制备HPLC目的•分析HPLC－－样品组成的信息，研究大部分或全部组分(产品)•制备HPLC回收纯品，研究一种或几种样品组分(目标组分)四.分析／制备HPLC的特点进样量仅够检测即可尽量大模式反向HPLC正相HPLC柱内径1～5mm>10mm添料1～5um>10um流速<10mi/min>10mi/min进样通常不是问题进样较难检测条件选择最大灵敏度降低灵敏度样品溶解度通常不重要非常重要流动相挥发性不重要溶剂挥发五.制备HPLC的策略1：很高的生产效率和产量，收率很低。2：高纯品，但是生产效率和产量很低。3：峰在基线上被完全分开，产品纯度、产量和生产效率都达到最高。六.制备分离的策略•如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。•如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。七.建立制备HPLC方法考虑•建立分析HPLC方法（流动相、添加剂）•粗产品分离•样品在流动相中溶解度八.扩大规模的制备色谱•分析液相：•会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。•进样量是微克级，甚至更低。•样品量和固定相之比甚至小于1:100000。•进样体积一般大大小于柱体积（小于1:100）。•制备液相：•最大的区别就是超量进样。九.分析色谱吸附等温线分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。最佳的峰形应是一条高斯曲线十.制备色谱吸附等温线将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重拖尾和k缩小。浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。吸附变化线取决于组份的多少，色谱柱的载样能力就必须根据实验来决定十一.样品重量对峰的影响十二.体积法超量载样样品组份溶解性差，浓缩法超量载样不能使用，更大样品体积注射到色谱柱中。超过一定进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。组份的溶解性限制，两种超量载样技术结合使用十三.进样体积对峰宽与峰形影响样品体积／峰基线体积：1－0.3，2－3，3－5，4－15十四.制备方法步骤1.优化分析方法的选择性。2.在分析柱上进行超量载样。3.放大到制备柱十五.线性放大•可变参数：流量、进样量、检测池尺寸、溶剂消耗、产品产量、系统死体积、进样管体积、样品收集体积•不可变参数：填料种类、色谱柱长度、色谱柱背压、样品浓度、回收率、纯度、操作时间、色谱柱性能、操作温度十六.优化制