常用pH缓冲溶液的配制和pH值

（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2．药品称量要精确。3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水， 比电阻值在50万欧姆以上，pH在~之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入 1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度1000ml）。2．１/15Mol/L 磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠Na2HPO4，.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。3．按附表的比例，配制成不同 pH值的缓冲溶液。附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO4pH 1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO4（三）L PB液附表2 LPB液配制法pH L Na2HPO4（ml） L NaH2PO4（ml）Na2HPO4·2H2O分子量=

L溶液含

26.7g/L

。Na2HPO4·12H2O分子量=

L溶液含

53.7g/L

。NaH2PO4·H2O分子量=

L溶液含

20.7g/L

。NaH2PO4·2H2O分子量=

L溶液含

23.4g/L

。（四）L

PB缓冲液附表3 L PB缓冲液配制法pH Mol/L Na2HPO4（ml） L NaH2PO4（ml）L Na2HPO4·2H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/LLNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L欲配L PB缓冲液则在L PB缓冲液的基础上加 H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加％的 NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS）LPH）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO40.2g将上述试剂依次溶于 1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）文章来自：医药园(整理：zfg1．硼酸（Ｈ3BO3）L硼酸：硼酸12.37g加水至1000ml。2．硼砂（Na2B4O7）L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。附表4不同pH的L硼酸缓冲液配制法pHL硼砂（ml）L硼酸（ml）pHL硼砂（ml）L硼酸（ml）（七）巴比妥缓冲液1．离子强度L巴比妥缓冲液巴比妥钠

47.6g蒸馏水

3 000mlHCl（

N

HCl=193ml浓

HCl加

1

807ml

蒸馏水）⑴ 将

4.76g

巴比妥钠溶于

3

000ml

蒸馏水。⑵ 加

N

HCl

55ml。⑶用HCl调节pH到，并加蒸馏水至4265ml。2．L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至13．L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1（八）L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5L醋酸盐缓冲液配制法pHLTris（ml）LHCl（ml）pHLTris（ml）LHCl（ml）23℃ 37℃ 23℃ 37℃25 5 2525 2525 2525 2525 2525 2525 25（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（ Tris—HCl缓冲液）不同pH，LL三羟甲基氨基甲烷加 х，加水稀释至 100ml（见下表）附表6 Tris—HCl缓冲液配制法pHLTris(ml)(ml)pHLTris(ml)(ml)23℃37℃23℃37℃2552525252525252525 2525 2525 2525 2525 25三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。：取，加水至1000ml。（十）L碳酸盐缓冲液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使 PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1．配制磷酸缓冲液Na2HPO4NaH2PO4混合即可2．9份甘油与1份磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hank’s液1．贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4·12H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g％酚红液双馏水加至115℃高压灭菌15min，冰冻保存。2．工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的％NaHCO3液调pH值至左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（ Nessler’s reagent）配方1：氯化汞6.0g碘化钾12.4g20％NaOH30ml加蒸馏水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml（完全溶解后）过滤，加20％NaOH50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsever’s）液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万μg）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。临用时，按 1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸3000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。配方2：浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。配方3：重铬酸钾100g蒸馏水1000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效缓冲溶液（英文：buffersolution ）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低 pH变动的溶液。pH缓冲系统对维持生物的正常 pH值和正常生理环境起到重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的 pH缓冲体系，它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统。 每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系 pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。如果“提取酶”实验体系的 pH值变动或大幅度变动，酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。[编辑本段]常用作缓冲溶液常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在以上时缓冲能力很小。三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是的Tris缓冲液，4℃时是，37℃时是，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。在以下，其缓冲能力极为不理想。[编辑本段]缓冲溶液组成缓冲体系由１、弱酸和它的盐（如 HAc---NaAc）2、弱碱和它的盐（）3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液组成。[编辑本段]决定缓冲液pH值的因素设缓冲系统的弱酸的电离常数为 K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：[H+]=Ka{[ 弱酸]/[共轭碱]}pH=pKa+log{[ 共轭碱]/[ 弱酸]}这就是Henderson-Hasselbach 等式。如果[弱酸]=[ 共轭碱]，pH=pKa根据此式可得出下列几点结论：缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸的pH值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不便。酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为 PK±1pH。[编辑本段]缓冲溶液的配制只要知道缓冲对的 PK值，和要配制的缓冲液的 pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出 pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。 只要我们知道要配制的缓冲液的 pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配