辣根过氧化物酶对大鼠下丘脑室旁核和终纹床核的射交反应

辣根过氧化物酶对大鼠下丘脑室旁核和终纹床核的射交反应

根据现代研究，大脑周围的核（pvn）、最终纹尿核（bnst）和前额叶皮层（pbc）与情感反应密切相关。然而，是否存在直接的神经联系及其在调节情绪方面的相关性尚不清楚。本文利用HRP既可逆向追踪又可顺向追踪的特点,通过将HRP分别注射到PVN和BNST区,对PVN与BNST之间、PVN与PFC之间以及BNST与PFC之间的神经纤维联系进行研究,为进一步研究PFC、BNST和PVN之间的功能联系提供解剖学基础。1材料和方法1.1动物组成年雄性SPF级SD大鼠8只(安徽省动物中心),体重250～300g,分为PVN注射组和BNST注射组,每组4只。1.2asson图谱动物经7%水合氯醛腹腔麻醉(10mL/kg)后开颅,将开颅后的大鼠固定于脑立体定位仪上(ZH-蓝星C,淮北正华),参照Paxinos-Waston图谱,采用1μL微量进样器(上海高鸽)将0.15μL的20%HRP(Sigma公司)定向注入。PVN注射组注入左侧PVN,注射坐标为(mm):冠矢点后1.5～1.6,旁开0.3～0.4,进针深度7.8～7.9;BNST注射组注入左侧BNST,注射坐标为(mm):冠矢点后0.2～0.3,旁开1.4～1.5,进针深度6.5～6.6。进针后停针5min开始注射,注射时间为20min,注毕留针10min。1.3pvn、bnst脑片动物的分离和诱导表达动物存活48h后用7%水合氯醛腹腔浅麻,断头取脑,含4%多聚甲醛的PB固定2d,在含10%、20%、30%蔗糖的PB中(4℃)沉底移行。切取PFC,BNST至PVN间脑段,行冠状冻切(LEICACM1900型),片厚30μm。PVN注射组对PVN部位行DAB法呈色,确定HRP准确注射到PVN的动物,对该动物的PFC段、含BNST区的脑片行DAB显色,脱水,透明,封固。显微镜(NikonE800)下观察、拍照。BNST注射组对BNST部位行DAB法呈色,确定HRP准确注射到BNST的脑片动物,对该动物的PFC段、含PVN区的脑片行DAB显色,脱水,透明,封固。显微镜(NikonE800)下观察、拍照。2bnst注射对hrp的影响每组动物中均选择HRP注射区准确位于PVN或BNST的大鼠进行观察。经DAB呈色后光镜下观察,PVN注射组4例大鼠中有2例HRP注射区局限于PVN内(图1A),将HRP注射入左侧的PVN后,HRP逆行标记的神经元在BNST区主要局限于注射区同侧(图1B),对侧BNST内未见HRP逆行标记神经元。高倍镜下观察,BNST内的HRP逆标神经元以双级或梭形细胞为主,少数神经元呈多突形,少数多突形神经元有明显的长突起,胞浆内呈均匀的棕黄色,PFC处同侧和对侧均未见标记的细胞或轴突。BNST注射组经DAB呈色后光镜下观察,4例大鼠中有3例HRP注射区局限于BNST内(图1C),将HRP注射入左侧的BNST后,HRP顺行标记的轴突末梢散在局限于注射区同侧的PVN区域及第三脑室的室周区(图1D),对侧区也有极少量的分布。高倍镜下观察,PVN区内的HRP顺行标记轴突末梢呈点状,轴浆内呈棕黄色。PFC处的同侧和对侧均未见HRP标记的细胞或轴突。3丘脑-腰椎-肾上腺素皮质hpa轴和神经核团pvn神经束路追踪技术对示踪剂的基本要求是注射区局限、追踪的灵敏度高、追踪结果便于观察和保存。为了确认逆行追踪结果的可靠性,还常常需要用顺行追踪方法来验证,反之亦然。本研究选用了传统的、具有逆行和顺行示踪功能的HRP作为示踪剂,将其注入PVN区以观察PVN向BNST和PFC的上行投射,又将其注入BNST区以观察BNST向PFC的上行投射及向PVN的下行投射,在确认靶区准确并局限的前提下,用DAB法呈色,观察PVN与BNST之间、PVN与PFC之间以及BNST与PFC之间是否存在直接的神经通路。近年来,随着应激假说的提出,下丘脑在抑郁症发病中的中枢调节机制越来越受到人们的关注。按应激假说,脑内应激机制的过度驱动是导致抑郁症的重要因素,下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴是应激反应的最后通路,PVN促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)神经元是应激反应的中枢驱动力。大量的研究证实,抑郁症发生过程中,下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴发生改变,血浆皮质类固醇水平升高、生长减缓、肾上腺重量增加、胸腺重量降低,海马等边缘系统的体积减小和细胞丢失,脑源性神经营养因子表达减少,糖皮质激素和兴奋性神经递质水平提高,神经胶质细胞增生以及神经再生二次抑制],提示抑郁症的发生是患者体内多种生物化学、生理学及组织学方面的异常变化通过HPA轴共同作用的结果。Davis等的研究表明,BNST在机体面临威胁性情境时,可能主要负责处理焦虑信息。焦虑刺激信息在传入丘脑和相应皮质后输入杏仁基底外侧核,BNST接受来自杏仁基底外侧核的被处理过的感觉信息后,投射到参与介导恐惧和焦虑的特异性症状和体征的下丘脑和脑干等部位,由它们调节机体对焦虑刺激的生理和行为反应。PFC是所有皮层中功能最复杂、了解最少的部位,目前普遍认为其与意识、思维、想象、运动的组织和计划、注意等有关。研究证据显示,PFC与下丘脑在抑郁症发病中都起到一定的作用,但PFC在抑郁症发病中的作用是否通过HPA轴实现并不清楚。PFC与中枢神经系统其他核团的神经回路特别是与PVN之间的功能联系正越来越受到人们的关注。以往的研究表明,PVN与脑内的许多神经核团具有广泛的神经联系。根据Sawchenko和Roland的研究,PVN主要接受背中核、视交叉内侧、第三脑室前腹面区和腹内侧区、BNST及下丘脑室旁核邻近部位的直接神经投射,BNST是前脑传入下丘脑室旁核主要的直接传入联系核团,也是杏仁核中央亚核、内侧前额皮质和外侧隔区等脑区传入下丘脑室旁核的间接的中继核团。我们的实验结果进一步证实了BNST确有神经纤维投射到PVN,但要证实当机体面临威胁性情境时,BNST是否可以通过其对PVN的神经投射激活HPA轴,刺激肾上腺皮质合成和分泌糖皮质类固