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文档简介

实验基本技术

分子生物学部分存在问题1.基本的实验技能2.实验习惯3.责任感和安全性核酸纯化技术离心分离技术凝胶电泳技术核酸定量技术分子杂交技术序列分析技术………………一核酸纯化技术原理1.核酸混合物成分:

结构类-细胞碎片，细胞器，其他大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等2.关键:DNA，RNA—Protein3.方案：Protein变性

苯酚：强变性25氯仿：弱变性24异戊醇：消泡14.苯酚的处理：重蒸-饱和-pH

重蒸：去除醌类氧化物饱和：防止核酸损耗pH：pH7.0-8.0-核酸最适合方法：蒸馏（183℃）-收集（棕色瓶）-饱和与调pH（Tris-HClpH8.0）-0.1%8羟基喹啉-4℃或-20℃保存方法样品+等体积饱和苯酚10kb以上轻柔混匀；10kb以下振荡离心（12000*g）取上清核酸相Protein变性相有机相二离心技术原理离心力：F=ω2rmRCF=F/G=ω2r/g=（2π*rpm）2r/g=1.119*10-5(rpm)2r浮力密度：K=m-mp0/p沉降阻力：f*(dx/dt)RCF=k+f*(dx/dt)

差速离心—密度梯度离心操作离心机分类：普通6000rpm高速20000-25000rpm

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