医学免疫学教学课件：实验一 凝集反应,沉淀反应

免疫学实验课实验室守则进实验室务必穿白大褂；严禁吃东西。4人一组，由前往后，试验中先把每组需要的实验材料拿齐，做完试验后打扫好自己的台面。物品回收：实验用过的试管、吸管等玻璃制品放置红桶内，吸头放回讲台。值日：班长或者负责人安排值日生，负责打扫卫生和实验物品回收，桌面摆放整齐，关灯、窗等。作业由班长或者负责人于每次实验课后尽快在一周内将作业本收齐，按学号顺序叠放，交到A2-624门口的架子上，并在每次上课前取回，发给大家。实验一凝集反应,沉淀反应一、凝集反应1）直接凝集反应玻片凝集反应：抗原特异性 1片/人2）间接乳胶凝集反应

类风湿因子检测 1份/人二、沉淀反应1）单向琼脂扩散实验 1片/组2）双向琼脂扩散实验 示教颗粒性Ag+相应Ab

一定条件下

肉眼可见的凝集物

条件：温度、酸碱度、离子强度、抗原抗体比例凝集反应的概念Ag过剩Ab过剩AgAb比例适当凝集反应的类型直接凝集反应玻片法试管法间接凝集反应间接凝集反向间接凝集间接凝集抑制试验一、直接凝集反应实验材料抗体：伤寒杆菌免疫血清（1:10）痢疾杆菌免疫血清（1:10）抗原：伤寒杆菌（24h斜面培养物）生理盐水玻片、接种环1、直接凝集反应玻片法—用于细菌的鉴定分型实验方法（同学操作）清洁玻片一张，划成三格，做好标记用接种环分别取伤寒血清、痢疾血清、生理盐水各4-5环（50ul），分别放于玻片上接种环取伤寒杆菌，分别混匀于上述血清中

经1-2分钟，观察有无凝集现象产生伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒免疫血清痢疾免疫血清生理盐水+++注意事项接种环的使用方法：执笔法接种前后进行充分的烧灼消毒二、间接凝集反应类风湿因子(RF)乳胶凝集试验RF检测的原理：RF：抗-变性IgG的抗体。用人IgG来检测RF。人IgG是可溶性抗原，因此先把人IgG与乳胶颗粒结合，形成致敏的颗粒性抗原，再与待检血清进行反应。RF免疫乳胶试剂盒胶乳颗粒：人IgG+胶乳颗粒阳性血清阴性血清待检血清（是否含有RF？）实验方法胶乳颗粒1滴阳性血清1滴阴性血清1滴待检血清50µl

实验结果观察轻轻摇匀，1-3分钟后观察结果：阳性：出现均匀凝集颗粒阴性：无凝集颗粒二.沉淀反应

可溶性抗原（如血清、毒素、细菌浸出液等），和相应的抗体相遇，在有电解质存在时，二者比例适当，可形成肉眼可见的沉淀物。在作沉淀试验时，为不使抗原过剩而生成不可见产物，通常应稀释抗原。

凝集反应：颗粒性Ag+相应Ab

一定条件下肉眼可见的凝集块沉淀反应：可溶性Ag+相应Ab

一定条件下肉眼可见沉淀物条件：温度、酸碱度、离子强度、抗原抗体比例沉淀反应类型液体内沉淀试验絮状沉淀试验环状沉淀反应免疫浊度测定凝胶内沉淀试验单向扩散试验√双向扩散试验√与电泳技术相结合

对流免疫电泳

火箭免疫电泳免疫电泳一、单向琼脂扩散试验（单扩）单扩法测定人IgG实验材料：1、抗人IgG抗体2、待检血清(1:20,1:40,1:80,1:100)3、融化的1%琼脂、玻片、打孔器4、量尺1、制备琼脂板（实验室准备）：将1%琼脂融化并冷却至56℃；加入抗人IgG抗血清，混匀；取清洁玻片，倒入琼脂，铺成3-4mm厚的琼脂板；打孔（如下图）。琼脂糖凝胶（含抗体）实验步骤待检血清（抗原）

1:201:401:801:100琼脂糖凝胶（抗体）2、加样：3、把琼脂板放在湿盒，37℃放12-24h；4、明天早上来观察结果。二、双向琼脂扩散试验（双扩）

（示教）琼脂糖凝胶抗原抗体三角孔型双排孔型梅花孔型双孔型双向琼脂扩散试验的用途定性检测抗原或抗体抗原相关性分析抗原相关性分析双扩法测定甲胎蛋白甲胎蛋白（AFP）胎儿肝细胞合成，出生后消失。在原发性肝癌患者血清中含有AFP。可用于原发性肝癌的辅助诊断。用已知的AFP抗体来检测血清中是否含有AFP。实验材料已知抗体：AFP免疫血清阳性对照抗原：AFP待测患者血清：AFP？融化的1%琼脂、玻片、打孔器实验方法1、制备琼脂板（实验室准备）：取清洁玻片，加入已融化的1%琼脂铺成3-4mm厚的琼脂板；按下图打好孔。2、同学们操作（1）按下图做好标号（2）并分别用注射器加入以下样品：

①：AFP抗体

②③：AFP阳性对照④⑤⑥⑦：待测患者血清74562313、把琼脂板放在湿盒，37℃放12-24h；4、明天早上来观察结果。实验结果7456