鼠疫实验室检测技术课件讲义

鼠疫实验室检测技术鼠疫实验室检测技术1鼠疫实验室检测■针对病原体本身的生长繁殖、生理生化特性的检测:鼠疫菌的染色检査;鼠疫菌的培养及鼠疫噬菌体试验;鼠疫菌的生化检査、营养需求、毒素检测、毒力测定等。■针对病原体特异性抗原结构的检测:鼠疫F1抗原抗体检测;鼠疫菌外膜蛋白的检测■针对病原体遗传基因的检测:鼠疫菌的质粒检测;鼠疫菌特异性核酸片断的检测;鼠疫菌全基因组测定;插入序列的检测。2鼠疫实验室检测2鼠疫菌菌体形态检查典型的鼠疫菌呈短而粗,菌体长1~2μm,宽0.5-0.7μm,中段膨大,两端钝圆,且两极浓染的卵圆形小杆菌,有荚膜,无鞭毛,无芽胞。革兰氏染色阴性。染疫动物或患者及其尸体的新鲜脏器制备的压印片,可见到两端钝圆、两极浓染的典型鼠疫菌。压印标本中可在吞噬细胞内外见到鼠疫菌,对于鉴别杂菌污染材料极有价值。鼠疫菌染色方法有革兰氏染色(菌体染成红色)、美兰染色(菌体染成兰色,两极浓染明显)、姬姆萨染色(菌体染成色,荚膜染成色)鼠疫菌菌体形态检查3鼠疫菌染色检查(脏器压印片)■革兰氏染色美兰染色鼠疫菌染色检查(脏器压印片)4鼠疫菌染色鼠疫菌涂片的革兰氏染色pC、tns211N,,鼠疫菌染色5鼠疫菌染色检查Waysonstain(魏申氏荚膜染色一墨汁负染色染色)呈现的两极浓染特征0000°80⊙鼠疫菌染色检查6、鼠疫菌的培养特性◆鼠疫菌是典型的异养菌。鼠疫菌为需氧菌,亦为兼性厌氧菌鼠疫菌在普通培基上生长良好,培养的最适温度为28℃,最适pH为697,发育初期的最适氧化还原电位(Eh约为100~150mV,接种后至少20h以上才能形成肉眼可见的菌落般24~48h形成肉眼可见的小菌落。◆强毒鼠菌对钙离有半依赖性,缺时生长不良。37℃缺钙毒鼠疫菌ops和分泌毒力蛋白v抗原(Lcrv)。此现象称为低钙反应,受70kb(45MD)质粒上的遗传基因控制◆典型鼠疫菌培养18-20h光镜下呈透明的碎玻璃片状。培养24h以上菌落在透过光线下是灰自色略带淡素色,反射光线下菌落圆形隆起呈淡灰白色见菌落中心发花边,周边围绕一圈宽窄不等,边缘不整呈锯齿状、薄而透明的、鼠疫菌的培养特性7鼠疫噬菌体试验在培基上密集平行划线培养鼠疫菌,鼠疫噬菌体滴于上端划线中部,直立平板,使噬菌体液垂直划线自然流下,置20℃培养24h,有明显的噬菌带在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假结核菌,具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异性),是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。对被检材料作细菌分离培养的同时作噬菌体裂解试验,20h左右即可获得结果。>分离到鼠疫噬菌体,可以间接判定检材中存在鼠疫鼠疫噬菌体试验8鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验■典型鼠疫菌菌落形态■噬菌带较(肉鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验9鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验鼠疫菌培养特征鼠疫噬菌体试验鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验10鼠疫实验室检测技术课件讲义11鼠疫实验室检测技术课件讲义12鼠疫实验室检测技术课件讲义13鼠疫实验室检测技术课件讲义14鼠疫实验室检测技术课件讲义15鼠疫实验室检测技术课件讲义16鼠疫实验室检测技术课件讲义17鼠疫实验室检测技术课件讲义18鼠疫实验室检测技术课件讲义19鼠疫实验室检测技