病原免疫学实验：细菌在血平板上的生长情况观察及细菌涂片的制作与革兰氏染色

实验报告课程名称：病原与免疫学实验指导老师：成绩：____________实验名称：细菌在血平板上的生长情况观察及细菌涂片的制作与革兰氏染色实验类型：观察与制作装订线实验目的装订线了解知道细菌在血平板上的生长情况，熟悉病原性球菌的培养特性及主要鉴别点（菌落特点、溶血性、色素等）掌握细菌涂片的制作及革兰氏染色方法掌握葡萄球菌的血液凝固酶试验原理及现象了解生物因素（抗生素）对细菌的作用及其在医学实践应用中的意义实验材料及步骤实验材料：金黄色葡萄球菌、柠黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌的血琼脂平板培养物。金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌琼脂斜面培养物，兔血浆，脓液琼脂斜面培养物，革兰氏染液，抗生素纸片（青、链、氯、庆大霉素4中抗生素），生理盐水，接种环，载玻片，酒精灯，打火机，显微镜，镊子等。实验步骤：细菌在血平板上的生长情况，观察细菌的培养特性：参照实验讲义第40页细菌涂片的制作：参照实验讲义第5页革兰染色法：参照实验讲义第6、7页葡萄球菌的血液凝固酶试验：第40、41页抗生素的抗菌试验（纸片法）：参照实验讲义第25页实验结果1、细菌菌落溶血现象的观察比较（α溶血VSβ溶血）图1,乙型链球菌、甲型链球菌与肺炎链球菌的菌落溶血现象比较乙型链球菌：菌落圆形隆起，灰白色，菌落周围有界限分明、完全透明的溶血环，β溶血现象甲型链球菌：菌落圆形隆起，灰白色，菌落周围有草绿色溶血环，培养基对着光看菌落不透明，α溶血肺炎链球菌：圆形、光滑、扁平的细小菌落，菌落周围有草绿色溶血环，培养基对着光看菌落不透明，α溶血2、细菌菌落的色素观察（脂溶性色素VS水溶性色素）图2菌落色素观察比较（绿脓杆菌VS白色葡萄球菌图3金黄色葡萄球菌、柠黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌绿脓杆菌：产生绿色水溶性色素溶解在培养基中，使菌落与培养基都呈绿色白色葡萄球菌：产生白色脂溶性色素，菌落呈白色，菌落周围无溶血环。金黄色葡萄球菌：产生金黄色脂溶性色素，菌落呈金黄色，且菌落周围有完全透明的溶血环。柠黄色葡萄球菌：产生柠檬黄脂溶性色素，菌体呈柠檬黄色，菌落周围无溶血环。葡萄球菌的血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌+生理盐水白色葡萄球菌+兔血浆金黄色葡萄球菌+兔血浆金黄色葡萄球菌+生理盐水白色葡萄球菌+兔血浆金黄色葡萄球菌+兔血浆图4葡萄球菌的血浆凝固酶试验：细菌凝集成块呈阳性，说明金黄色葡萄球菌能产生葡萄球菌凝固酶使兔血浆凝固。：无凝集呈阴性，说明白色葡萄球菌不能产生葡萄球菌凝固酶。：对照组，无凝集呈阴性细菌涂片的制作与革兰氏染色图5脓汁标本病原性球菌涂片革兰氏染色10X100倍革兰阳性菌染成蓝紫色（②号箭头所示）革兰阴性菌染成红色（①号箭头所示）抗生素的抗菌试验（纸片法）图6氯霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.2cm）庆大霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.6cm）图7青霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈（直径：3.3cm）链霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.3cm）图8庆大霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.0cm）氯霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈（直径：1.8cm）图9链霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.0cm）青霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈（直径：2.5cm）同一种细菌对不同的抗生素的敏感性是不同的，金黄色葡萄球菌对青霉素的敏感性最强，对氯霉素的敏感性最弱；白色葡萄球菌对青霉素最敏感，对氯霉素的敏感性最差。两种不同的细菌对同一种抗生素的敏感性不同，金黄色葡萄球菌比白色葡萄球菌对抗生素更敏感，白色葡萄球菌的耐药性更强实验讨论分析区别甲型链球菌与肺炎链球菌的方法肺炎双球菌在血平板上的菌落与甲型溶血性链球菌相似，均有草绿色溶血。在液体培养基中培养48小时后，因产生自溶酶使菌体溶解，使早期因细菌生长繁殖而浑浊的培养液变为澄清。肺炎链球菌自溶酶可被胆汁或胆盐激活，故可用胆汁溶菌试验与甲型溶血性链球菌相区别。肺炎链球菌能分解菊糖，甲型溶血性链球菌相则否。细菌涂片制作的加热固定原理采用加热可以杀死细菌蛋白质失活凝固并使菌体黏附于玻片上，增加其对染料的亲和力。革兰染色时滴加各种革兰染色液体时均以菌膜完全被覆盖为准。要掌握好染色时间，尤其是酒精脱色时间不宜过长或过短。阳性菌透性小，不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色；但这是在固定的时间条件下的结果，如果延长脱色时间，也会使脱色剂渗透进阳性菌的细胞壁中，使染上的结晶紫脱去颜色，最后染上