病原免疫学实验：凝集反应1

专业：_口腔医学专业：_口腔医学_______姓名：__王雪婷________学号：__3130102930____日期：__2015.3.25______地点：___医教A401_____课程名称：_病原生物学与免疫学实验________指导老师：__王迪__________成绩：__________________实验名称：_______凝集反应、吞噬实验______实验类型：__操作型________同组学生姓名：吴文治____一、实验目的1、熟知凝集反应的概念和分类。2、掌握ABO血型鉴定试验的基本内容，学会结果判断。3、学会凝集反应在临床检验中的实际应用。二、实验原理（一）玻片凝集试验——ABO血型鉴定ABO血型鉴定为玻片凝集试验，属于定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞，各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便、快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。（二）间接血球凝集试验——血清类风湿因子测定以红细胞为载体，将人丙种球蛋白吸附在载体表面而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细胞检测类风湿关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体），当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅助诊断疾病。（三）金黄色葡萄球菌协同凝集试验金黄色葡萄球菌细胞壁含有金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）。SPA具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段的功能的特性。利用SPA这一特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。此方法常用于未知抗原的检测。三、材料与方法（一）玻片凝集试验——ABO血型鉴定材料：（1）标准血清（抗体）抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。（2）盛有1mL生理盐水的一次性试管1支。（3）一次性采血针1枚、白瓷板1块、一次性毛细吸管1支、75%酒精棉球和灭菌干棉球。方法：（1）用酒精棉球消毒被检者的手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出，滴1～2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，使之成为血球悬液。用灭菌干棉球止血。（2）取白瓷板1块，将抗A、抗B分型试剂分别滴加1滴于白瓷板的两个圆孔内。（3）用毛细血管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加1滴。（4）将白瓷板前后左右不停地摇动，使其充分混匀，5～10min后观察并记录结果。（二）间接血球凝集试验——血清类风湿因子测定材料：（1）致敏红细胞悬液。（2）1:10待检血清、阳性对照血清、稀释液。（3）V型微量反应板、微量振荡器、37℃恒温箱、移液器、移液头。方法：（1）用微量移液器吸取稀释液加于微量反应板的1～9孔内，每孔50μL，第10孔加50μL阳性对照血清。（2）第1孔内加待检血清50μL，混匀后吸出50μL加于第2孔内，依次作倍比稀释至第8孔，并从第8孔中吸出50μL弃去。各孔的血清稀释度为1:20、1:40、1:80……第9孔为阴性对照，第10孔为阳性对照。（3）将致敏红细胞悬液混匀，从第9孔起依次向前各孔内加入50μL致敏红细胞悬液。（4）第10孔阳性对照加50μL致敏红细胞悬液。将反应板置于微量振荡器上，振荡1min，37℃静置30min后观察结果。（三）金黄色葡萄球菌协同凝集试验材料：（1）抗A群脑膜炎球菌抗体致敏的金黄色葡萄球菌液、未致敏的金黄色葡萄球菌液、生理盐水。（2）毛细吸管、有格玻片。方法：（1）在玻片的第1、2格分别加1滴致敏金葡菌液，第3格加未致敏金葡菌液。（2）于第1、3格各加1滴病人脑脊液，第2格加1滴生理盐水，将玻片轻轻摇动3-5min，观察结果。四、实验结果（一）玻片凝集试验——ABO血型鉴定未凝集凝集未凝集凝集根据如图的结果，可以发现在抗A分型试剂中没有发生凝集现象，即“—”，在抗B分型试剂中有发生凝集现象，因此认为凝集“+”性。即根据实验结果，血型也为B型。（二）间接血球凝集试验——血清类风湿因子测定稀释度1：201：401:801:1601:3201:6401:12801:2560阴性对照阳性对照序号12345678910现象+++++++++++++————++++以“++”的血清最高稀释度作为实验效价，凝集效价>1:20为阳性，故待测血清样本类风湿因子阳性，凝集效价1：160。（三）金黄色葡萄球菌协同凝集试验非致敏金黄色葡萄球菌液＋病人脑脊液不凝集致敏金黄色葡萄球菌液＋病人脑脊液致敏金黄色葡萄球菌液＋生理盐水不凝集非致敏金黄色葡萄球菌液＋病人脑脊液不凝集致敏金黄色葡萄球菌液＋病人脑脊液致敏金黄色葡萄球菌液＋生理盐水不凝集凝集致敏的金黄色葡萄球菌能够与抗A群脑膜炎球菌抗体结合，抗体与抗原结合时产生的凝集反应使得金黄色葡萄球菌被动凝集，该方法可