曲克芦丁对温敏水凝胶的温敏性影响

曲克芦丁对温敏水凝胶的温敏性影响

敏水凝胶是一种智能水凝胶。能够感知和响应周围温度的变化，主要表现为体积的变化。使用聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)温敏水凝胶作为药物载体已有相关研究。就温敏水凝胶对药物释放的影响而言,现有研究主要集中在凝胶对药物的缓释作用上,本工作将PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶作为脉冲式药物释放的载体,通过体外控制温敏水凝胶温度变化来控制凝胶的溶胀与收缩进而使药物按照患者病情需要进行脉冲式释放,大大提高了药物的利用度,减少了药物不良反应也提高了患者的顺应性。1实验部分1.1曲克芦丁注射液PLGA-PEG-PLGA(自制,GPC测定共聚物重均相对分子质量为7361,数均相对分子量为6025);曲克芦丁注射液(2mL∶60mg,青岛金峰制药有限公司,批号20100511)。紫外分光光度计,UV2550型,日本岛津公司;HPLC工作站,安捷伦1200型,美国Agilent公司;空气浴摇床,SL300型,韩国JeioTech公司。1.2实验方法1.2.1曲克芦丁温敏水凝胶溶液的配制采用物理混合法取曲克芦丁注射液加入到温敏水凝胶中充分振荡混匀后制成曲克芦丁温敏水凝胶溶液。将制备好的含药温敏水凝胶自然放置2周,另取样品在3000r·min-1下离心15min观察有无分层现象。1.2.2相变温度和沉淀温度的测定取含曲克芦丁1.2mg·mL-1、质量分数为20%的凝胶样品水溶液用试管倒置法考察含药温敏水凝胶的相变温度和沉淀温度,将含曲克芦丁的温敏凝胶水溶液置于试管中水浴加热,从25℃持续升温,每次升高0.5℃,直到发生相变和沉淀。当溶液形成凝胶并保持10s不流动时则判定此时的水浴温度为凝胶的相变温度,继续升温,当样品出现白色沉淀并且可以流动时即为沉淀温度,每个样品测定3次,取平均值作为样品的相变温度和沉淀温度。同样方法测定空白水凝胶的相变温度,将两者进行比较。1.2.3热敏水凝胶水提取物的测定1.2.3.1.测量波长的确定取曲克芦丁注射液稀释液(24μg·mL-1)用日本岛津UV2550紫外分光光度计在200~400nm范围内扫描确定测定波长。1.2.3.紫外检测峰面积将曲克芦丁注射液配制成系列浓度为6,12,18,24,30,48μg·mL-1的标准液,用Agi-lent1200DAD紫外检测器测定峰面积,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标做标准曲线。进样量为20μL,流动相为蒸馏水,测定波长为“1.2.3.1”中确定的最大吸收峰。1.2.4方法精密度试验按照“1.2.3.1”中的测定波长和“1.2.3.2”中的测定方法取浓度为6μg·mL-1的曲克芦丁注射液同样方法在24h内进样6次,以峰面积计算日内精密度。同样方法,取浓度为6μg·mL-1的曲克芦丁注射液连续6d进样,以峰面积计算日间精密度。1.2.5药物释放曲线测定取相变温度为25℃的温敏水凝胶加入曲克芦丁配制成含药1.2mg·mL-1的曲克丁温敏水凝胶溶液。取1mL放入底部直径为10mm的10mL试管中,将试管置于40℃空气浴摇床中(80r·min-1),待其相变以后再加入8mL蒸馏水从此时开始计算时间。以后每2h取样,取样量为1mL,同时加入1mL新鲜的蒸馏水以保持漏槽条件,并调节摇床温度观察在不同温度下曲克芦丁温敏水凝胶的释药行为(温度为40℃和30℃交替)。样品用Agilent1200DAD紫外检测器来分析,通过标准曲线方程计算药物浓度及累计释放量,以2h累积释药百分率对时间作图,绘制载药胶束的药物释放曲线。累积药物释放百分率Q的计算公式为式(1)中:Q,药物的累积释放率,%;Cn,第n个时间点所取样品质量浓度,μg·mL-1;V,释放介质总体积,(本实验中为蒸馏水8mL);Vi,第i个时间点取样体积,1mL;Ci,第i个时间点所取样品浓度(V0及C0均为零),mg·mL-1;mdrug,用于释放的胶束中药物的质量,mg;n,置换释放介质的次数。2结果与讨论2.1plga-peg-plga凝胶的制备制备好的含药温敏水凝胶自然放置2周或3000r·min-1下离心15min,均无分层现象,说明曲克芦丁在PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶中被胶束充分包裹。2.2曲克芦丁对温敏水凝胶的温敏性水凝胶的相变图见图1。实验证明,加入曲克芦丁以后PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的温敏性并没有发生明显的变化,说明加入曲克芦丁以后并没有影响温敏水凝胶原有的温度敏感性,所以可以控制含曲克芦丁温敏水凝胶的温度及其相变。2.3热敏水凝胶水的外剂测定2.3.1双曲面图4:《全球最优条件》图2曲克芦丁的紫外吸收光谱(24μg·mL-1)见图2。由图2可以看出,曲克芦丁在254nm和348nm处具有大的吸收(与文献报道基本相符),本工作选用348nm作为测定波长。2.3.2标准曲线及线性范围以峰面积为纵坐标,曲克芦丁浓度为横坐标做标准曲线见图3。回归方程为y=17.156x-25.393,相关系数r=0.9997,表明曲克芦丁在6~48μg·mL-1范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。2.4精密相对标准偏差日内精密度考察结果见表1。日间精密度考察结果见表2。由表1和表2可见,系统日间和日内精密相对标准偏差(RSD)分别为0.22%和0.85%,均小于2%,说明系统精密度良好,该方法准确可行。2.5第一次升温温度要比之后再升温时药物释放速率加快的特点曲克芦丁PLGA-PEG-PLGA凝胶溶液体外变温情况下释药结果见图4。从图4可以看到,高温时曲克芦丁从温敏水凝胶中释放的速度比低温时快。多次实验结果还表明每次实验过程中的第一次升高温度要比之后再升温时药物释放速率加快的更加显著。这主要是因为温敏水凝胶在第一次升温时胶束迅速聚集,原本松散的胶束内核因胶束的聚集而收缩变的紧实,这使得核内的药物及部分水被排挤出来,释放于介质中;另外,胶束聚集使粘附在PEG链空隙的药物被排出也进入释放介质。而在降温的过程中胶束其实并没有完全恢复到原来没有升温之前的状态(聚集的胶束并没有完全的散开),所以当再次升温时胶束的聚集状态变化并不像第一次升温时那么大,因此药物释放也没有第一次升温时变化的那么明显,这在国外研究NIPAAm温敏水凝胶时也被证实。3曲克芦丁的加入方法选用相变温度为25℃的PLGA-PEG-PLGA为载体,曲克芦丁为模型药物,物理混合法制得凝胶质量分数为20%含