含冬虫夏草制剂中冬虫夏草、咖啡酸通阳药、复方安定法的研究

含冬虫夏草制剂中冬虫夏草、咖啡酸通阳药、复方安定法的研究

婆罗洲是一种常用的中药，具有开孔、醒神、清热、止痛的功效。多用于热病神昏、惊厥,中风痰厥,气郁暴厥,中恶昏迷,胸痹心痛,目赤,口疮,咽喉肿痛,耳道流脓。多入丸、散、片、胶囊等剂型使用。冰片、天然冰片、艾片在《中国药典》2010年版一部中均有收载,【含量测定】项下分别测定龙脑、右旋龙脑、左旋龙脑,并且在各自的【检查】项下收载了樟脑的检查。我们查到的《中国药典》2010年版一部、《中成药地标升国标》、《卫生部药品标准中药成方制剂》、《新药转正标准》等现行标准中共涉及到的含冰片制剂约890个品种,15类剂型,仅有74个品种在制剂项下对冰片含量进行控制。大部分含冰片的制剂中没有冰片的控制指标,或有的仅在【鉴别】项下通过薄层色谱法、化学反应等方法进行控制。为了有效控制含冰片制剂中冰片的质量,通过大量的实验工作,建立了含冰片制剂中冰片的含量测定及樟脑限量检查方法,并对部分常用制剂进行了测定。1仪器、试剂和试剂1.1无油空气泵6890N气相色谱仪,FID检测器;XWK-Ⅲ无油空气泵(天津华生分析仪器厂);SartoriusAGME235S型电子分析天平。超声波清洗器(无锡超声电子设备有限公司)。1.2药品对照品及药品检定所冰片对照品(批号为11671-200401),天然冰片对照品(批号为111688-200501),樟脑对照品(批号为110747-200206)均购自中国药品生物制品检定所;水杨酸甲酯、乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯等试剂均为分析纯。1.3样品样品均为市售,阴性对照样品系按处方和生产工艺自制不含冰片的制剂。2标准物质、标准溶液和样品溶液的制备2.1乙酸乙酯贮备液精密称取水杨酸甲酯2.0g,置于1000mL容量瓶中,加入乙酸乙酯至刻度,摇匀,作为贮备液;精密量取贮备液250mL,置于1000mL容量瓶中,加入乙酸乙酯至刻度,摇匀即得。2.2校正因子的测定取冰片对照药材适量,精密称取两份,分别置25mL量瓶中,加内标溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取2μL,注入气相色谱仪,计算校正因子。见表1。2.3试验溶液的制备2.3.1超声超声法样品研细后取样适量(使制成的溶液中冰片含量约为0.4mg/mL),置适宜的容量瓶中,加内标适量超声15min,放凉,加内标溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。2.3.2液体制剂注射剂、口服液等可用内标液直接稀释制成供试品溶液(含冰片约0.4mg/mL)。2.3.3含冰液的冷却剂制备为热法取大蜜丸,剪碎,取适量,精密称定,精密加入硅藻土等量,研匀,精密称取适量,置锥形瓶中,精密加适量内标液密塞,称定重量,超声处理15min,放冷,再称定重量,用内标液补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得(含冰片约0.4mg/mL)。2.3.4挥发油测定取适量膏剂,剪成条状,置500mL圆底烧瓶中,加入150mL水,连结挥发油提取器,由挥发油测定器上端加水至溢流入圆底烧瓶为止,加入1mL甲苯,加热回流4h,静置冷却,取甲苯层置于适宜的量瓶,并用适量的乙酸乙酯洗涤挥发油测定器,洗涤液并入量瓶中,加适量内标贮备溶液后,用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀即得(每mL含内标0.5mg、含冰片约为0.4mg)。3.试验方法和结果3.1龙脑、龙脑及内标物分离度条件一:采用弹性石英毛细管柱(柱长30m,内径0.320mm,膜厚度0.50μm)DB-WAX(聚乙二醇-20M,Agilent公司);程序升温:初始温度120℃,以每min10℃的速率升温至180℃,保持3min;进样口温度为220℃,检测器温度为250℃;分流比为5:1。条件二:程序升温:初始温度110℃,以每min10℃的速率升温至180℃,保持3min;其余同条件一。条件三:采用弹性石英毛细管柱(柱长30m,内径0.320mm,膜厚度0.25μm),HP-FFAP(聚乙二醇硝基苯改性,Agilent公司);程序升温:初始温度120℃,以每分钟10℃的速率升温至180℃,保持3min;其余同条件一。条件四:采用弹性石英毛细管柱(柱长30m,内径0.320mm,膜厚度0.25μm)OV-17(苯基甲基硅酮,涂布浓度为10%);其余同条件一。实验结果表明,各条件下(除条件四外),分离度、理论塔板数等相关参数无显著差异,龙脑、异龙脑及内标物(水杨酸甲酯)色谱峰分离度均大于4,理论板数按龙脑峰计算均不低于4000。条件四下,樟脑和龙脑、异龙脑不能达到基线分离。综合考虑后选择色谱条件一作为实验用色谱方法。3.2检测样品中中晶片含量精密称取3份研细后的样品(冠脉宁胶囊)适量(约含冰片10mg),分别置于25mL;量瓶中,各加内标溶液(内标溶液分别用乙酸乙酯、乙醇和无水乙醇配制)20mL,超声15min,放冷,加内标溶液至刻度,摇匀,用微孔滤膜滤过后,精密吸取2μL,注入气相色谱仪,测得峰面积,计算含量。试验结果表明,分别用乙酸乙酯、乙醇和无水乙醇作为溶剂,测定样品中冰片含量,结果没有显著差异。乙酸乙酯提取的供试品溶液,杂质相对较少,并且可用于对液体制剂进行萃取,和《中国药典》2010年版一部中冰片含量测定所用溶剂一致。故供试品溶液的提取(萃取)选乙酸乙酯作为溶剂。3.3阴性对照品溶液的制备按测定用样品的处方和生产工艺,自制不含冰片的阴性对照样品,按照供试品溶液的制备方法,制成阴性对照品溶液。按拟定的色谱法测定,记录色谱图。结果表明本方法测定冰片具有专属性。见图1。3.4溶液配制与测定峰面积精密称取冰片对照药材122.56mg,置25mL容量瓶中,加内标溶液(水杨酸甲酯浓度0.5046mg/mL)至刻度,摇匀,制成每1mL中含冰片4.9024mg的溶液,作为储备液;精密吸取上述储备液适量,依次加内标溶液(每1mL中含水杨酸甲酯0.5046mg)稀释,分别制成1.9610mg·mL-1、0.9805mg·mL-1、0.4902mg·mL-1、0.1961mg·mL-1、0.0980mg·mL-1、0.0490mg·mL-1的溶液做为对照溶液;分别吸取上述储备液及稀释后的各溶液2μL,注入气相色谱仪,记录色谱图,计算峰面积。以冰片峰面积与内标峰面积之比对进样量进行线性回归,求得方程为y=1.3582x–0.0108,r=1.00;表明冰片在0.098048μg～9.8048μg间呈良好的线性关系。3.5计算规律精密吸取对照品溶液2μL,注入气相色谱仪,连续进样6次,记录色谱峰,计算冰片峰面积与内标峰面积之比。结果比值均值为1.1165(n=6),RSD为0.62%。表明精密度良好。3.6内标峰面积之比取供试品溶液,每隔4h进样1次,测定样品溶液在24h内的峰面积,计算冰片峰面积与内标峰面积之比。结果比值均值为1.1158(n=7),RSD为1.35%,表明样品溶液制备后在24h内进样稳定性较好。3.7测定含量的测定取冠脉宁胶囊样品,研匀,取约0.20g,精密称定,置锥形瓶中,精密量取内标溶液(每1mL中含水杨酸甲酯为0.5046mg)10mL,称定重量,超声15min后,放冷,再次称定重量,用内标溶液补足减失的重量。同法制备7份供试品溶液。按拟定的色谱方法测定,计算含量。结果冰片含量值为20.50mg·g-1,RSD为1.22%,表明重复性良好。3.8对照品溶液的制备取冠脉宁胶囊样品,研匀,取约0.1g(含冰片为20.50mg/g),精密称取7份,分别置于具塞锥形瓶中并依次编号1～7。精密称取冰片对照药材20.6mg置100mL容量瓶中,加内标溶液(每1mL中含水杨酸甲酯为0.5046mg)溶解至刻度,制成对照品溶液。精密量取对照品溶液10mL分别加入1～7号锥形瓶中,同供试品溶液制成测定用溶液,按拟定的色谱方法测定,计算加样回收率。结果表明加样回收率良好。实验数据及结果见表2。3.9酶系统中各样品中各投料量的测定测定了282批含冰片制剂中冰片的含量,结果相差悬殊,统计结果见表3。从测定结果可看出,除11批胶囊剂外,其他样品中冰片含量98%达不到投料量的85%。说明样品中普遍存在冰片投料不足或冰片质量欠佳的情况。4测量值的限制制定根据样品中冰片的测定结果