野生红旗铆钉菇培养基配方研究

野生红旗铆钉菇培养基配方研究

0红外最优设备及其制备红景天是一门伞菌科的一门学科，俗称松伞、松蘑菇和肉蘑菇。这是一种与油松林共生生物共生的细菌。在国内分布于辽、吉、黑、冀、滇、京,其味道鲜美,可治疗神经性皮炎,具有很高的营养价值。近年随着旅游业的发展和高强度的采收,血红铆钉菇野生资源与生存环境正在受到威胁和破坏。对于这样一种共生菌,过去人们更多地是研究其对共生生物体抗逆境(包括抗病、抗干旱贫瘠等)以及促进生物体发育等方面的作用,而对于其本身资源的开发研究较少。对于其菌丝体的生长特性和培养基种类很少有研究报道。作者从连续2年分离出的野生子实体菌丝,详细观察了菌丝的生长特性,研究了铆钉菇各级菌种的制作以及液体菌种的培养。以便为铆钉菇的人工保育和半人工栽培提供技术支持。1材料和方法1.1试验中的细菌菌种来自2006年和2007年延庆四海油松林地的野生血红铆钉菇子实体组织分离物,经观察2年分离的菌种长势和菌丝形态一致。1.2不同配方马铃薯vb1的培养1)PDA马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000mL,2)PDA综合培养基:PDA+KH2PO43.0g,MgSO4·7H2O1.5g,VB1微量,pH6.0,3)PDA+松针水(10%松针水浸液煮制马铃薯),4)PDA+5%麸皮(5%麸皮水煮液过滤煮制马铃薯),5)PDA+5%玉米粉(5%玉米粉浸出液过滤煮制马铃薯),6)PDA+10%腐熟粪草浸出液,7)PDA+10%油松林地土水浸液。在无菌条件下将铆钉菇菌种先置于90mm直径培养皿PDA培养基培养,然后打成5mm直径圆片,放于上述不同配方的培养皿中,每皿一片,置于25℃培养观察。每个配方接种5个培养皿。培养试管斜面,取2支放入-18℃冰箱,3天后取出恢复培养。1.3水曲奇类型2,2,4;5%日本聚乙烯7.1)发酵玉米芯42%,棉子壳42%,麸皮15%,酵母浸粉0.2%,磷肥少许,2)棉子壳50%,木屑25%,麸皮10%,豆粉5%,过磷酸钙4%,石灰1%,3)棉子壳65%,草炭土30%,玉米粉5%,酵母浸粉0.4%,4)松树林地土40%,发酵玉米芯45%,麸皮10%,玉米粉5%,10%松针水,5)麦粒种:麦粒1000g水浸泡24h→煮透无白心→捞起控水→拌入蔗糖50g、碳酸钙60g。将上述不同配方与水混匀(1:1.1～1.2)后,121℃灭菌2h,降至室温接种。每个配方接种二级种10瓶(250mL),三级种10瓶。置于25℃培养。1.4不同浓度pd+双溶剂复合胶囊的制备1)PD培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,水1000mL,2)PD综合培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,硫酸二氢钾3g,MgSO4·7H2O1.5g,VB1微量20mg,水1000mL,3)天门冬酰氨1g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾1.0g,水1000mL,4)PD+松针水10%(100g松针1000mL水浸泡24h,取上清液),5)PD+玉米粉5%,6)PD+松土水10%,7)PD+麸皮5%,8)PD+酵母浸粉0.2%,9)PD+腐熟粪草浸出液10%每个配方接种4个250mL三角瓶中,每个三角瓶接种5个5mm直径的血红铆钉菇菌丝圆片,25℃,150r/min,摇菌88h后,取50mL菌液离心,沉淀45℃烘干后称重,每个处理4次重复。2结果与分析2.1培养基配方对全饼pda水平饼的生长结果25℃条件下,血红铆钉菇菌丝在PDA试管斜面上4～5天长满,在-18℃冷冻3天后仍能恢复生长,菌丝具有很强的抗冻能力。在平皿上不同培养基配方3天即可长满全皿。以PDA玉米粉培养基上长得最好,其菌丝满皿时间最快,2天即长满全皿,3天时菌丝浓白,气生菌丝量中等;在PDA松针水和PDA牛粪的菌丝密度较稀疏,长势最差;在其他4种培养基均能较好的生长,菌丝密度基本相同,从生长势看,以PDA综合>PDA>PDA麸皮>PDA林地土。见表1。2.2棉籽壳和玉米芯的添加比例对培养基的影响由表2可知,固体培养基配方以松林土(配方4))、棉籽壳配合玉米芯(配方1))是铆钉菇固体培养的适宜培养基,12～13天长满瓶,其菌丝浓白,料内菌丝健壮;棉籽壳添加草炭土(配方3))可以增加培养基的通透性,加快菌丝生长的速度,菌袋最早长满,仅需要11天,但基料内菌丝稀薄,不够健壮;棉子壳添加木屑(配方2))菌丝生长的速度最慢,需17～18天满瓶,但菌丝紧密健壮。麦粒种(配方5))也是适宜的培养基。从成本综合比较以棉籽壳配合玉米芯(配方1))较好。试验中还采用了33×17cm塑料袋制作菌种,发现以棉籽壳为主料的配方菌棒坚硬,菌丝致密,而含有草炭的配方菌袋较软,掰开菌丝观察菌丝细弱。2.3不同配方地丝的及其菌球液体培养结果见表3,摇菌48h内,各配方液体菌丝均为大的菌球,以后出现小菌球。不同配方菌丝的浓密程度、形成菌球的形状和颜色都有差异。在添加了松针、玉米粉、松林土、麸皮、酵母、粪草的配方中,菌丝都近似絮丝状,多数菌丝稠密,而PD、PD综合和以天门冬氨酸为主的配方中,菌丝都近似圆形。没有加入PD的天门冬酰氨配方,在形成大菌丝球后,很少再出现小的菌球。从烘干后的菌丝干物重看,9种配方差异显著,以含玉米粉配方的极显著地高于其他配方,其次为含粪和酵母的液体配方。松针水、麸皮的配方也较高。而没有添加PD的天门冬氨酸配方干物重最少,由此看出以PD为主的液体配方都适合血红铆钉菇菌丝的生长。3菌种生长及配方的确定有研究报道血红铆钉菇在以菇类子实体和玉米为主要成分的培养基上分离成功率达6.7%;这表明适当添加玉米粉可以促进血红铆钉菇菌丝体的生长,该实验一级种和液体菌种的培养进一步证明了这一结论。液体培养表明血红铆钉菇在以PD为基础的培养基上均能生长良好。在此基础上添加酵母、玉米粉浸出液能使菌丝生长更加浓密、健壮。在固体培养基配方中以棉籽壳或松林土配合发酵玉米芯