(新编)动物细胞培养和核移植技术

专题2动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞工程常用技术其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础

注意关键词:

细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养细胞株细胞系一、动物细胞培养阅读课文P44----P47相关内容2.2.1动物细胞培养和核移植技术

1、动物细胞培养的概念从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

原理是细胞增殖（有丝分裂）。

分离组织（幼龄动物）分散细胞（胰蛋白酶）原代培养（细胞增殖）传代培养（细胞增殖）分装2.动物细胞培养的操作过程细胞贴壁：

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。有关概念接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。有关概念原代培养：

指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中培养。(分装之前，10代以前)传代培养：

将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。(分装后继续培养，10代以后)细胞株：

原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：

细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：

细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。有关概念2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？

成块的组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养先用剪刀剪碎组织,后用胰蛋白酶处理。思考:1、为什么选用动物胚胎或幼年动物的组织、器官做动物细胞培养的材料?因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强6、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质不能，因为两者的最适pH不同5、如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶处理,然后分别继续培养,让细胞继续增殖4、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。8、如何理解原代培养和传代培养？9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？10、有些细胞为何能一直传下去？7、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养不能,一般传至10代就不易传下去了这些细胞发生突变，朝着癌细胞方向发展易于培养细胞贴壁，进行生长增殖11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？保存10代以内的细胞，因为10－50部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展12、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（分解细胞间的蛋白）原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质遗传物质未改变遗传物质已改变细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）3、温度和PH36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2

）补充合成培养基中缺乏的物质3.动物细胞培养条件思考：2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？主要成分：

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：①液体培养基②成分中有动物血清等无菌、无毒的环境。

比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖植物组织培养和动物细胞培养的比较固体培养基液体培养基蔗糖植物激素葡萄糖动物血清植物体细胞株、细胞系快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白4.动物细胞培养技术的应用1.蛋白质生物制品的生产如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.健康细胞培养培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植3.细胞的生理、药理、病理研究

想一想:根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?利用动物体细胞核移植技术二、动物体细胞核移植技术和克隆动物阅读课文P47----P50相关内容注意关键词:克隆动物核移植供体细胞卵母细胞细胞融合重组胚