炙甘草汤抗心律失常作用的实验研究

炙甘草汤抗心律失常作用的实验研究

甘草炒来自《伤寒》第177条。“伤寒、脉博细，心悸，甘草汤是主要。”其方组成如下:炙甘草四两(炙)、生姜三两(切)、桂枝三两(去皮)、人参二两、生地黄一斤、阿胶二两、麦门冬半升(去心)、麻子仁半升、大枣十二枚。该方是临床治疗早搏的有效处方。本实验研究炙甘草汤的临床应用范围,旨在观察该药的抗实验性心律失常作用。1材料和机器1.1试剂和试剂厂产品炙甘草汤,为棕褐色浸膏,由河南中医学院药剂学教研室提供;盐酸普帕酮片,江苏鹏鹞药业有限公司产品,批号000313;氯化钙,中国上海兴达化工试剂厂产品,批号980901。三氯甲烷(氯仿),化学纯,上海试剂一厂产品,批号940729。乌头碱(ACONITINE),sigma公司;乌拉坦,曹阳第二化工厂产品,批号97102。1.2动物Sprague-Dawlay(SD)大鼠、KM小鼠,均由郑州大学动物实验中心提供。1.3pc/回用控制系统财产安全ECG-6511型心电图机,NIHONKOHDENCORPORATION;TXTOI型微型灌注泵,上海医疗器械厂产品;DH-150型人工呼吸机,浙江大学医疗仪器厂产品;YC-1ELECTRONICSTIMULATOR,RODENTVENTILATOR。2方法和结果2.1小鼠单次给药和小鼠体系中小鼠的行为检测选取KM小鼠100只,♀♂各半,体重在28～30g,随机分为5组,即①空白对照组:生理盐水20ml/kg;②普罗帕酮组0.2g/kg;③脉安Ⅰ组:13g/kg;④脉安Ⅱ组:39g/kg;⑤脉安Ⅲ组:78g/kg。各组每日按20ml/kg灌胃给药1次,连续给药5d。末次给药后1h,将小鼠置于倒扣的600ml烧杯中,取氯仿2ml滴于棉球上,让小鼠吸入氯仿直至呼吸停止(每测试1只小鼠,加0.5ml氯仿)。立即取出小鼠,打开胸腔,肉眼观察小鼠心脏活动节律,记录各组小鼠产生室颤的动物数,其结果进行χ2检验。结果见表1。实验结果显示,空白对照组小鼠室颤的发生率高达70%,而普罗帕酮组和炙甘草汤3个剂量组均能降低小鼠室颤发生率,其中以普罗帕酮组、脉安Ⅲ组作用更为明显,与空白对照组比较差异显著(P<0.05),表明炙甘草汤具有对抗氯仿致小鼠心室颤动的作用。2.2对大鼠心动过速的影响取健康SD大鼠50只,♀♂各半,体重200～230g,随机分为5组。分别为①空白对照组:生理盐水10ml/kg;②普罗帕酮组:0.2g/kg;③脉安I组:7g/kg;④脉安II组:21g/kg;⑤脉安III组:42g/kg。每组按10ml/kg灌胃给药1次/d,连续5d。末次给药后1h,用乌拉坦1.2g/kg腹腔麻醉,仰位固定。股静脉注入3.5%CaCl2溶液105mg/kg(3s内推完),并记录心电图II导联,以观察其心律失常情况。分别记录室速和心电图恢复的时间。结果见表2。结果显示,炙甘草汤3个剂量组均能推迟大鼠室性心动过速的发生时间,加快心电图的恢复时间,与空白对照组比较有明显差异(P<0.05,0.01)。表明炙甘草汤对CaCl2致大鼠心律失常有明显的对抗作用。2.3不同给药剂量对心律失常的影响选取健康SD大鼠50只,♀♂各半,体重200～250g,随机分为5组。分别为①空白对照组:生理盐水10ml/kg;②普罗帕酮组:0.2g/kg;③脉安I组:7g/kg;④脉安II组:21g/kg;⑤脉安III组:42g/kg。每组按10ml/kg灌胃给药1次/d,连续5d。末次给药后1h,用乌拉坦1.2g/kg腹腔麻醉,仰位固定。由股静脉注入乌头碱(用微量灌注泵推注,乌头碱浓度为10μg/ml,速度为0.28ml/min),同时监测心电图Ⅱ导联。观察注射乌头碱后大鼠发生心律失常的情况,分别记录室早(VPB)和室速(VT)、室颤(VF)的出现时间,并折算成相应的乌头碱剂量。结果见表3。结果显示,炙甘草汤3个剂量组能明显推迟VPB,VF,VT,提高大鼠对乌头碱的耐受剂量,与空白对照组比较有明显差异(P<0.05,0.01),表明炙甘草汤对乌头碱致大鼠心律失常有明显的保护作用。2.4小鼠心律失常事件及其结果选取健康SD大鼠60只,♀♂各半,体重210～250g,随机分为①空白对照组:生理盐水10ml/kg;②普罗帕酮组:0.2g/kg;③脉安Ⅰ组:7g/kg;④脉安Ⅱ组:21g/kg;⑤脉安Ⅲ组:42g/kg。各组灌胃给药1次/d,连续给药5d。末次给药后30min,用25%的乌拉坦1.2～1.5g/kg的剂量腹腔注射,麻醉后仰位固定于鼠台上,描记一段正常心电图Ⅱ导联。分离气管,接人工呼吸机(人工呼吸机各参数如下:呼吸比为1∶2;呼吸频率为60;潮气量为6ml/100g)。在第3～4肋间开胸,剪断第4肋骨,暴露心脏并剪破心包膜。在心脏左冠状动脉前降支起始端约2mm处进针并置一1号丝线,稳定10min后,再将一长1cm,内径为3mm的塑料胶管和动脉一起结扎。随后开始每分钟记录1次心电图,连续记录30min后沿塑料胶管剪断丝线,使其再灌注。每分钟记录1次心电图,连续记录40min,观察大鼠心律失常发生的情况,其结果进行χ2检验。结果见表4。结果显示,炙甘草汤3个剂量组均能减少冠脉结扎再灌注大鼠的室早或传导阻滞发生率,其中以大剂量组更为明显,与空白对照组比较有明显差异(P<0.05),表明炙甘草汤对冠脉结扎再灌注致大鼠心律失常有一定的保护作用。3促进氯化钙致大鼠心律恢复的作用炙甘草汤能明显对抗乌头碱、氯化钙引起的大鼠室性心律失常,表现为推迟室性早搏、室性心动过